成都蓉生药业有限责任公司,四川 成都 610219
摘要:目的 比较冷沉淀在两种储存温度下人凝血因子Ⅷ效价等质量指标的变化情况。方法随机分组的两组血浆冷沉淀分别储存于-30℃超低温冰箱及-60℃超低温冰箱。于储存0、3、6、9、12个月取样,分别溶解后检测人凝血因子VIII效价、蛋白质含量、细菌内毒素。结果 储存期间冷沉淀外观均呈现均匀微黄粘性沉淀状态,细菌内毒素含量符合要求,相同储存时长的冷沉淀样品人凝血因子VIII效价、蛋白质含量均值之间的差异不具统计学意义。结论-30.0、-60.0℃均适合冷沉淀的储存,这两种储存温度对于冷沉淀的质量指标无显著性影响。
关键词:冷沉淀,储存温度,人凝血因子Ⅷ
Comparative study of cryoprecipitates at two storage temperatures
ZHAO Haiping, Yang Yong,ZHANG Rui,WU Qiang,LI Gang
Chengdu Rongsheng Pharmaceuticals,Co.,Ltd,Chengdu 610219,China.
Abstract: Objective To compare the changes of cryoprecipitates in quality indicators such as the potency of human coagulation factor VIII at two storage temperatures. MethodsTwo groups of cryoprecipitates pided randomly were stored in a -30 ℃ ultra-low temperature freezer and a -60 ℃ ultra-low temperature freezer, respectively. Samples were taken at 0, 3, 6, 9 and 12 months of storage. Potency, protein content and bacterial endotoxins were detected. ResultsDuring the storage period, the appearance of the cryoprecipitates was homogeneous with slightly yellow, and the bacterial endotoxin content met the requirements. There was no statistically significant difference in potency and protein content during the same storage time. Conclusions Both -30.0 ℃ and -60.0 ℃ are suitable for the storage of cryoprecipitates, and no significant quality difference was shown.
Key words:Cryoprecipitate;Storage temperature;Human coagulation factor Ⅷ
血浆冷沉淀是新鲜冰冻血浆在4℃下融化后析出的白色冷沉淀物,主要富集人凝血因子VIII、纤维蛋白原、血管性血友病因子(VWF)、第ⅩⅢ因子以及纤连蛋白等有效成分。临床上,冷沉淀主要用于儿童及成人轻型甲型血友病、血管性血友病、先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症及因子ⅩⅢ缺乏症病人,以及手术后出血、严重外伤及DIC等患者的替代治疗[1-3],是人凝血因子VIII等工业生产的原始材料[4-5]。本文旨在比较研究冷沉淀在两种不同储存温度下质量指标的变化情况。
1对象与方法
1.1 材料 血浆冷沉淀系自制,所使用的人血浆来自四川的单采血浆站,血浆的采集、贮存、运输和质量均符合《中国药典》( 2020年版三部) 生物制品通则中“血液制品生产用人血浆”的要求。
1. 2 主要设备与试剂STA Compact全自动血凝仪,法国STAGO;UV-1800紫外可见分光光度计,日本SHIMADZU岛津;DW-40L508J医用低温保存箱,海尔集团;SANYO MDF-382E医用低温箱,日本SANYO公司;水浴箱,恒奥科技;乏FⅧ血浆,美国THERMO SCIENTIFIC公司;FⅧ国家标准品,中国食品药品检定研究院; APTT试剂,INSTRUMENTATION LABORATORY公司;Tris溶解液
,自制。
1. 3冷沉淀储存过程质量研究 经同一生产工艺及相同设备连续制备的10个批次血浆冷沉淀,随机分成高温组(定义为A组)及低温组(定义为B组),每组5个批次。A组冷沉淀储存于-30℃超低温冰箱、B组冷沉淀储存于-60℃超低温冰箱。于储存0、3、6、9、12个月取样,记录每个批次冷沉淀的外观状态,按照冷沉淀重量(g):Tris溶解液体积(ml)=1:3的比例加入冷沉淀,于30~35℃水浴箱中完全溶解。
冷沉淀溶解液按照《中国药典》四部(2020 版)方法,分别采用一期法测定人凝血因子VIII效价、双缩脲法测定蛋白质含量、鲎试剂法测定细菌内毒素含量。
检测结果判定合格的标准:人凝血因子VIII效价≥20IU/ g冷沉淀,蛋白质含量≥100mg/ g冷沉淀,细菌内毒素≤5EU/ g冷沉淀。
1. 4统计学方法 采用 SPSS 27. 0软件统计分析,符合正态分布的数据用“x±s”表示,经方差齐性检验符合要求后采用T检验对储存时长相同的A、B两组数据进行比较,以P<0. 05 为差异具统计学意义。
2结果
2.1 冷沉淀储存过程最高温度A组冰箱的温度设定值为-30.0℃,B组冰箱的温度设定值为-60.0℃。整个储存期间的实际最高温度见表1:A组的实际最高温度为-30.6℃,B组的实际最高温度为-60.8℃,均低于相应的温度设定值,储存过程的温度符合要求。
表 1 储存过程实际最高温度(℃) | ||
组别 | A组(n=5) | B组(n=5) |
1月 | -31.0 | -61.8 |
3月 | -30.8 | -61.2 |
6月 | -30.6 | -60.8 |
9月 | -30.6 | -60.8 |
12月 | -30.6 | -60.8 |
2.2 冷沉淀储存过程质量指标变化整个储存期间,A组及B组冷沉淀的外观正常,均呈现均匀微黄粘性沉淀状态;经检测,细菌内毒素含量均低于5EU/ g冷沉淀。各个时间点的人凝血因子VIII效价、蛋白质含量均值见表2,两组样品检测结果均值之间的差异不具统计学意义。然而,随着储存时间的增长,两组冷沉淀人凝血因子VIII效价呈现出一定的下降趋势,在本研究12个月的考察期内,下降后的效价仍然符合要求。
表 2 冷沉淀储存过程质量指标 | |||||
组别 | 高温组(n=5) | 低温组(n=5) | T | P | |
外观 | 均匀微黄粘性沉淀 | 均匀微黄粘性沉淀 | / | / | |
细菌内毒素含量(EU/g) | <5 | <5 | / | / | |
FⅧ效价 (IU/ g冷沉淀) | 0月 | 59.8 ± 4.5 | 59.0 ± 1.8 | 0.332 | P>0.05 |
3月 | 59.2 ± 5.1 | 58.8 ± 3.1 | 1.135 | ||
6月 | 55.2 ± 2.8 | 57.8 ± 3.4 | -1.324 | ||
9月 | 57.9 ± 1.6 | 58.8 ± 4.8 | -0.403 | ||
12月 | 53.2 ± 3.6 | 55.4 ± 2.4 | -1.102 | ||
蛋白质含量(mg/ g冷沉淀) | 0月 | 151.5 ± 1.9 | 151.2 ± 3.1 | -1.173 | |
3月 | 152.2 ± 1.1 | 149.8 ± 4.3 | 0.454 | ||
6月 | 148.0 ± 2.8 | 151.9 ± 1.1 | -0.801 | ||
9月 | 147.9 ± 1.9 | 153.3 ± 2.7 | -1.953 | ||
12月 | 151.8 ± 1.8 | 150.8 ± 1.2 | 1.103 | ||
注:“/”代表无相应数据。 |
3 结论
作为人凝血因子VIII等血源凝血因子类产品的主要制备原料,血浆冷沉淀具有较高的经济价值和社会价值。为了有效延缓冷沉淀中人凝血因子VIII等活性物质的降解和失活过程,冷沉淀应在低温冷冻环境中储存[6-7],同时在储存过程中应尽量避免温度的波动,以免造成不利影响。
本文主要探索了冷沉淀在两种储存温度下的质量指标变化情况,研究结果表明:在为期12个月的考察期内,-30.0、-60.0℃均适合冷沉淀的储存,这两种储存温度对于冷沉淀的质量指标无显著性影响。在实际的生产应用中,生产企业可以根据实际情况选择适宜的储存温度。
参考文献
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