血浆冷沉淀在两种储存温度下的质量比较研究

(整期优先)网络出版时间:2025-01-22
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血浆冷沉淀在两种储存温度下的质量比较研究

赵海平 杨勇 张锐 吴强 李刚

成都蓉生药业有限责任公司,四川 成都 610219

摘要目的 比较冷沉淀在两种储存温度下人凝血因子效价等质量指标的变化情况方法随机分组的两组血浆冷沉淀分别储存于-30超低温冰箱及-60超低温冰箱于储存036912个月取样分别溶解后检测人凝血因子VIII效价蛋白质含量细菌内毒素结果 储存期间冷沉淀外观均呈现均匀微黄粘性沉淀状态,细菌内毒素含量符合要求,相同储存时长的冷沉淀样品人凝血因子VIII效价蛋白质含量均值之间的差异不具统计学意义结论-30.0-60.0均适合冷沉淀的储存这两种储存温度对于冷沉淀的质量指标无显著性影响

关键词冷沉淀,储存温度,人凝血因子Ⅷ

Comparative study of cryoprecipitates at two  storage temperatures

ZHAO Haiping, Yang YongZHANG RuiWU QiangLI Gang

Chengdu Rongsheng PharmaceuticalsCo.,LtdChengdu 610219China

Abstract: Objective To compare the changes of cryoprecipitates in quality indicators such as the potency of human coagulation factor VIII at two storage temperatures. MethodsTwo groups of cryoprecipitates pided randomly were stored in a -30 ℃ ultra-low temperature freezer and a -60 ℃ ultra-low temperature freezer, respectively. Samples were taken at 0, 3, 6, 9 and 12 months of storage. Potency, protein content and bacterial endotoxins were detected. ResultsDuring the storage period, the appearance of the cryoprecipitates was homogeneous with slightly yellow, and the bacterial endotoxin content met the requirements. There was no statistically significant difference in potency and protein content during the same storage time. Conclusions Both -30.0 ℃ and -60.0 ℃ are suitable for the storage of cryoprecipitates, and no significant quality difference was shown.

Key words:Cryoprecipitate;Storage temperature;Human coagulation factor Ⅷ

血浆冷沉淀是新鲜冰冻血浆在4℃下融化后析出的白色冷沉淀物,主要富集人凝血因子VIII、纤维蛋白原、血管性血友病因子(VWF)、第ⅩⅢ因子以及纤连蛋白等有效成分。临床上,冷沉淀主要用于儿童及成人轻型甲型血友病、血管性血友病、先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症及因子ⅩⅢ缺乏症病人,以及手术后出血、严重外伤及DIC等患者的替代治疗1-3,是人凝血因子VIII等工业生产的原始材料4-5。本文旨在比较研究冷沉淀在两种不同储存温度下质量指标的变化情况。

1对象与方法

1.1 材料 血浆冷沉淀系自制所使用的人血浆来自四川的单采血浆站血浆的采集、贮存、运输和质量均符合《中国药典》( 2020年版三部) 生物制品通则中血液制品生产用人血浆的要求。

1. 2 主要设备与试剂STA Compact全自动血凝仪,法国STAGOUV-1800紫外可见分光光度计,日本SHIMADZU岛津;DW-40L508J医用低温保存箱海尔集团SANYO MDF-382E医用低温箱日本SANYO公司水浴箱恒奥科技F血浆美国THERMO SCIENTIFIC公司F国家标准品中国食品药品检定研究院; APTT试剂INSTRUMENTATION LABORATORY公司Tris溶解液

自制

1. 3冷沉淀储存过程质量研究 经同一生产工艺及相同设备连续制备的10个批次血浆冷沉淀随机分成高温组定义为A及低温组定义为B),每组5个批次A组冷沉淀储存于-30超低温冰箱B冷沉淀储存于-60超低温冰箱于储存036912个月取样记录每个批次冷沉淀的外观状态按照冷沉淀重量g):Tris溶解液体积ml=1:3的比例加入冷沉淀,于3035水浴箱中完全溶解

冷沉淀溶解液按照《中国药典》四部(2020 版)方法,分别采用一期法测定人凝血因子VIII效价、双缩脲法测定蛋白质含量、鲎试剂法测定细菌内毒素含量。

检测结果判定合格的标准:人凝血因子VIII效价≥20IU/ g冷沉淀,蛋白质含量≥100mg/ g冷沉淀,细菌内毒素≤5EU/ g冷沉淀。

1. 4统计学方法 采用 SPSS 27. 0软件统计分析,符合正态分布的数据用x±s表示,经方差齐性检验符合要求后采用T检验对储存时长相同的AB两组数据进行比较,以P<0. 05 为差异具统计学意义。

2结果

2.1 冷沉淀储存过程最高温度A组冰箱的温度设定值为-30.0B组冰箱的温度设定值为-60.0整个储存期间的实际最高温度见表1A组的实际最高温度为-30.6B组的实际最高温度为-60.8均低于相应的温度设定值储存过程的温度符合要求

表 1  储存过程实际最高温度(℃)

组别

A组(n=5)

B组(n=5)

1月

-31.0

-61.8

3月

-30.8

-61.2

6月

-30.6

-60.8

9月

-30.6

-60.8

12月

-30.6

-60.8

2.2 冷沉淀储存过程质量指标变化整个储存期间A组及B组冷沉淀的外观正常均呈现均匀微黄粘性沉淀状态经检测细菌内毒素含量均低于5EU/ g冷沉淀各个时间点的人凝血因子VIII效价蛋白质含量均值见表2两组样品检测结果均值之间的差异不具统计学意义然而随着储存时间的增长两组冷沉淀人凝血因子VIII效价呈现出一定的下降趋势在本研究12个月的考察期内下降后的效价仍然符合要求

表 2  冷沉淀储存过程质量指标

组别

高温组(n=5)

低温组(n=5)

T

P

外观

均匀微黄粘性沉淀

均匀微黄粘性沉淀

/

/

细菌内毒素含量(EU/g)

<5

<5

/

/

FⅧ效价

IU/ g冷沉淀

0月

59.8 ± 4.5

59.0 ± 1.8

0.332

P>0.05

3月

59.2 ± 5.1

58.8 ± 3.1

1.135

6月

55.2 ± 2.8

57.8 ± 3.4

-1.324

9月

57.9 ± 1.6

58.8 ± 4.8

-0.403

12月

53.2 ± 3.6

55.4 ± 2.4

-1.102

蛋白质含量(mg/ g冷沉淀

0月

151.5 ± 1.9

151.2 ± 3.1

-1.173

3月

152.2 ± 1.1

149.8 ± 4.3

0.454

6月

148.0 ± 2.8

151.9 ± 1.1

-0.801

9月

147.9 ± 1.9

153.3 ± 2.7

-1.953

12月

151.8 ± 1.8

150.8 ± 1.2

1.103

注:“/”代表无相应数据。

3 结论

作为人凝血因子VIII等血源凝血因子类产品的主要制备原料,血浆冷沉淀具有较高的经济价值和社会价值。为了有效延缓冷沉淀中人凝血因子VIII等活性物质的降解和失活过程,冷沉淀应在低温冷冻环境中储存6-7,同时在储存过程中应尽量避免温度的波动,以免造成不利影响。

本文主要探索了冷沉淀在两种储存温度下的质量指标变化情况,研究结果表明:在为期12个月的考察期内,-30.0、-60.0℃均适合冷沉淀的储存,这两种储存温度对于冷沉淀的质量指标无显著性影响。在实际的生产应用中,生产企业可以根据实际情况选择适宜的储存温度。

参考文献

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