摘要
摘要目的克隆并表达中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株伽氏疏螺旋体(Borrelia garinii，B.garinii)PD91外膜蛋白A(OspA)的126～274 aa肽段，并对其免疫保护性进行初步研究。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增B.garinii PD91的126～274 aa OspA肽段基因，克隆至原核表达载体pET-30a上，构建pET-30a-OspA-pep重组质粒，转入大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3)中，利用IPTG诱导表达，表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化，采用Western blot分析其免疫原性。将不同剂量的重组OspA-pep(rOspA-pep)蛋白(20、30、40、50、60、80、100 μg)免疫新西兰家兔，采用间接免疫荧光法(IFA)检测免疫前后的抗体滴度，选取产生抗体滴度最高的剂量组为最佳剂量组。用最佳剂量组的免疫兔血清进行体外中和试验以检测rOspA-pep蛋白免疫后血清抗体的体外杀菌能力，同时用最佳剂量的rOspA-pep蛋白免疫新西兰家兔，观察其抗体滴度变化。结果重组质粒pET-30a-OspA-pep构建成功并在宿主菌体内高效表达。Western blot表明rOspA-pep蛋白与B.garinii PD91的多抗有明显的免疫应答。IFA检测结果表明rOspA-pep蛋白免疫后的兔血清IgG抗体滴度明显升高(最高可达1∶2 480)，40 μg为rOspA-pep的最佳免疫剂量。体外中和试验结果表明该剂量rOspA-pep蛋白免疫家兔后产生的抗体对106个/ml的B.garinii和阿弗西尼疏螺旋体(Borrelia afzelii，B.afzelii)型代表菌株PD91和FP1的中和率达100%，对107个/ml的FP1的中和率为100%，对107个/ml的PD91的中和率为60%。用40 μg rOspA-pep在1 d和30 d免疫新西兰家兔2次后，其抗体达到高峰，持续时间为3～4个月，之后抗体滴度逐渐下降。结论中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株B.garinii PD91的126～274 aa OspA肽段具有较好的免疫原性，其诱导的抗体有较好的体外中和能力，可作为中国二代亚单位疫苗的候选成分。
出版日期
2020年08月10日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
