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  • 简介:摘要目的观察靶向降解结构域蛋白4(BRD4)的抗骨肉瘤作用,并探讨其相关分子机制。方法采用小分子干扰RNA(siRNA)沉默BRD4在在骨肉瘤细胞中的表达,应用小分子降解ARV-825诱导BRD4在骨肉瘤细胞中化学降解,分为对照组和处理组,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测骨肉瘤细胞凋亡信号的变化。采用流式细胞仪技术、细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖检测技术和细胞克隆实验研究小分子ARV-825的抗骨肉瘤作用。采用单因素方差分析和t检验比较各组间差异。结果应用siRNA抑制BRD4,Western blot实验显示骨肉瘤细胞凋亡关键酶半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9激活,DNA修饰酶多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解增加[MNNG/HOS,siBRD4(a):0.665±0.139、1.024±0.378、0.445±0.130;siBRD4(b):0.844±0.190、1.183±0.368、0.843±0.005],Saos-2细胞系中结果与MNNG/HOS一致;流式细胞仪检测显示细胞凋亡增加,两种细胞系中两种siRNA对应凋亡率分别为(32.670±0.943)%、(43.330±1.247)%、(45.000±1.054)%、(51.330±1.491)%,差异有统计学意义(t=27.930、29.670、35.730、29.520,P<0.01)。Western blot检测结果显示,ARV-825能在两种细胞系中够呈时间和浓度依赖诱导BRD4蛋白降解,差异均有统计学意义(0.01~0.30 μmol/L,F=223.100、219.200,P<0.01;0.5~72.0 h,F=122.500、86.870,P<0.01);CCK-8法显示低浓度ARV-825能有效抑制骨肉瘤细胞增殖[两种细胞50%的抑制率(IC50)分别为0.015、0.020 μmol/L,P<0.01];克隆形成实验显示ARV-825在0.1 μmol/L的低浓度能够完全抑制骨肉瘤细胞的克隆形成(F=56.250、128.500,P<0.01)。结论BRD4具有重要的抑制骨肉瘤细胞凋亡信号传导作用。通过抑制BRD4的表达能够疏通凋亡信号通路,达到抗骨肉瘤作用。提示小分子化学BRD4降解对于提高骨肉瘤的治疗效果具有良好的前景。

  • 标签: 骨肉瘤 溴结构域蛋白4 凋亡