简介：鉴定合成的或通过高通量随机组合方法获得的潜在功能片段的生物学功能需要一套高效便捷的酵母表达专用载体。酵母表达载体pYES2多克隆位点处不含起始密码子,通过设计含有ATG和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物扩增一段Intron,利用In-Fusion重组技术(Clontech)将该片段构建至酵母表达载体pYES2,得到一个含有ATG的重组酵母表达载体pYES2-ATG。为了检测该载体的功能,扩增不含起始密码子的DNA序列nlea,该序列由本实验室设计合成,具有潜在的耐盐功能。构建重组表达载体pYES2-ATG-nlea在酵母中进行功能鉴定。研究结果表明,半乳糖诱导后,含pYES2-ATG-nlea的重组酵母菌株耐盐能力明显高于含pYES2-ATG空质粒的菌株,表明在该载体系统上的添加了起始密码子的nlea成功表达,具有一定的耐盐性,同时也证明改造的载体系统可用于没有起始密码子的编码区序列的功能筛选和鉴定。pYES2-ATG酵母载体系统不影响原始载体基本功能元件的表达,同时能使不含起始密码子编码区序列在酵母中正常表达,在大规模进行多个基因的功能鉴定中具有重要的应用价值。

简介：以宫灯玉露的叶片为外植体，采用正交试验设计，研究不同消毒时间、不同生长调节剂浓度配比对宫灯玉露愈伤组织诱导、丛芽诱导及增殖和生根的影响。试验表明：最适外植体灭菌时间为8min，污染率为13．3％；培养基MS＋30g/L蔗糖＋6g／L琼脂＋6-BA1mg／L＋NAA0．1mg／L适合诱导愈伤；培养基MS＋6-BA0．5mg／L＋KT0．1ml／L＋NAA0．01mg／L有利于芽诱导与增殖；培养基1／2MS＋30g／L蔗糖＋6g／L琼脂＋IBA0．2mg／L适宜诱导根的生成，10～15d内可长出2～3条根；通过炼苗移栽幼苗的成活率达85％以上，从而建立了宫灯玉露工厂化育苗的组培快繁体系，为今后宫灯玉露的规模化生产提供理论与技术指导。