简介：

简介：本研究探讨多药耐药（mdr1）基因体外转染人骨髓间充质干细胞（BMMSC）以应用于基因治疗的可行性、安全性。体外分离、培养、鉴定MSC；采用具有高效转染非分裂期细胞的慢病毒载体（1entiviralvector，LV）系统将mdr1基因导入BMMSC中；采用RT—PCR和GFP荧光技术检测目的基因的表达，台盼蓝染色及MTT法检测转染后细胞的增殖能力。结果表明：慢病毒感染MSC的感染复数（multiplicityofinfection，MOI）为10，最佳感染率可达80％；Msc表面低表达CD34、HLA—DR、CD31、CD45，高表达CD44、CDl05、CD90、CDl3；GFP荧光表达自72小时开始出现，以后逐渐增强；转染细胞中显示目的基因mRNA的表达；转染对MSC存活及增殖几乎无影响（P〉0．05）。结论：慢病毒载体可成功转染人骨髓间充质干细胞并使其mdrl表达增高，转染对MSC存活及增殖基本无影响。

简介：

简介：摘要目的探讨慢病毒介导色素上皮衍生因子(PEDF)基因修饰后人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的蛋白质组学变化。方法将hUCMSCs分为基因修饰组和对照组，基因修饰组采用慢病毒介导PEDF基因修饰hUCMSCs，对照组为正常hUCMSCs，提取各组细胞蛋白；采用FASP酶切法制备蛋白质样本，进行液相-质谱联用仪检测，采用SWATH模式采集数据。根据蛋白检测结果，进行差异蛋白分析及相应蛋白基因本体论(GO)分析和Reactome信号通路显著性富集分析。结果共鉴定出5 361个可定量蛋白，与对照组相比，实验组慢病毒介导的PEDF基因修饰后差异表达倍数>1.5且P<0.05的蛋白共432个，其中上调蛋白219个，包括丝氨酸蛋白酶抑制剂家族F成员1(SERPINF1)(PEDF)、DEAD-box家族螺旋酶59(DDX59)、血小板反应蛋白1(THBS1)等；下调蛋白213个，包括Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、COL18A1等。GO分析结果显示，差异蛋白主要参与纤维蛋白溶解、细胞外结构构建、转运蛋白活性调节、仲醇及胆固醇生物合成、辅酶代谢、肽酶活性调节等多种生物学进程；Reactome信号通路显著性富集分析表明，差异蛋白主要涉及胰岛素样生长因子结合蛋白调节的胰岛素样生长因子的运输和摄取、蛋白质翻译后修饰磷酸化、细胞外基质构成、糖皮质激素代谢等信号通路。结论慢病毒介导PEDF基因修饰的hUCMSCs可通过调节多种蛋白的表达水平，改变细胞外基质结构，调节与细胞增生、自我更新和多能性相关的蛋白表达水平。

简介：背景：激素性股骨头坏死（SONFH）发病机制尚不完全明确,可能与骨髓间充质干细胞（BMSC）的异常分化密切相关。目的：研究siRNA慢病毒载体介导的DKK-1基因沉默,通过调控Wnt/β-catenin信号通路对超生理剂量糖皮质激素作用下大鼠BMSC分化的影响,探索治疗SONFH的新途径。方法：提取、培养SD大鼠BMSC,并构建DKK-1基因慢病毒干扰载体。大鼠第3代BMSC分4组：对照组（A组）、激素组（B组）、激素＋无序序列慢病毒载体组（C组）、激素＋DKK-1基因慢病毒干扰载体组（D组）。A组用基础培养基培养,B组加入浓度为1×10~（-6）mol/L的地塞米松,C、D组除加入地塞米松外,各自加入相应的慢病毒载体转染BMSC。14d后提取各组细胞RNA及蛋白,对DKK-1、成脂相关基因PPAR-γ2和成骨相关基因RUNX2进行Real-timePCR及Western-blot检测,并对各组进行油红O、茜素红染色,观察各组BMSC分化情况,对结果进行统计学分析。结果：Real-timePCR及Western-blot检测结果示B、C组与A、D组相比,成骨相关基因RUNX2的表达明显较低（P〈0.05）,而DKK-1及成脂相关基因PPAR-γ2的表达明显较高（P〈0.05）。油红O染色结果显示B、C组呈阳性,A、D组呈阴性;茜素红染色结果显示A、D组呈阳性,B、C组呈阴性。结论：DKK-1基因沉默通过特异性抑制DKK-1过表达而重新激活Wnt/β-catenin信号通路,减少成脂基因PPAR-γ2的表达、增加成骨基因RUNX2的表达,抑制BMSC成脂分化,促进BMSC成骨分化。

简介：摘要目的构建携带过表达miR181a的慢病毒载体，转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSC)，使基因修饰后的BMSC持续高水平表达miR181a。方法将miR181a质粒与三种助转质粒PRSV，PRRE，VSVG共同转染进293T细胞中，构建含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，eGFP)的过表达miR181a的慢病毒表达载体。72 h后收获过表达miR181a的病毒液，转染BMSC。用嘌呤霉素筛选，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，即miR181a-BMSC。结果成功构建出携带miR181a的慢病毒载体，转染率超过95%。嘌呤霉素筛选BMSC，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，与BMSC组相比，miR181a-BMSC组中，miR181a的表达量明显增多，差异具有统计学意义(3.80比25.92，t＝19.401，P<0.05)。提取BMSC和miR181a-BMSC的外泌体，纯化后miR181a-BMSC的外泌体内miR181a表达量明显增高，差异具有统计学意义(1.41比0.87，t＝6.003，P<0.05)。结论成功构建出慢病毒介导的过表达miR181a基因修饰的骨髓间充质干细胞。

简介：目的使用慢病毒介导兔BMP-2基因转染兔滑膜间充质于细胞（SMSCs），检测其安全性，并在体外定向诱导至软骨细胞。方法通过构建包含BMP-2基因的慢病毒载体，转染SMSCs后行安全性分析；各项检测和MicroRNA分析判断转染后的SMSCs是否进入软骨细胞分化谱系。结果贴块法获得的SMSCs在经分离纯化后，表现出间充质干细胞应有的结构和表面标志物，具有多向分化潜能。增殖动力学、核型分析、致瘤型分析等证实被慢病毒转染的SMSCs安全。Westernblot、免疫荧光等证实且能稳定表达BMP-2蛋白。14d后，免疫组化、MicroRNA检测等证实在不需外加外源性BMP-2的体外环境下SMSCs可自发向软骨细胞分化。结论经重组慢病毒载体感染的兔SMSCs足够安全，能稳定表达BMP-2，体外能自发向软骨细胞分化。

简介：

简介：摘要目的研究分析一次法根充和分次根充的治疗效果。方法选取本院收治的60例急性牙髓炎患者，共110颗患牙，以随机方式分为实验组和对照组，每组各30例，其中，对照组中55颗患牙分次根充，观察组，55颗患牙实行一次性根充，然后综合分析对比两组的治疗效果和不良反应发生的情况。结果实验组治疗成功率高于对照组，P<0.05；实验组不良反应发生率低于对照组，P<0.05，差异具有统计意义。结论一次法根充相较于分次根充治疗效果更好，临床应用价值更加显著，值得推广和应用。

简介：摘要随着医院信息化进程的加快,医院信息的积累越来越丰富,为各种医学研究提供了方便和研究价值。本文介绍了了我院的慢病随访系统，接收并利用了HIS中的数据，使随访工作更加便捷有效。通过本系统的应用促进并建立了和谐的医患关系，降低了医疗风险；提升了服务质量与效果，增加客户忠诚度；争取了健康主动权，增加医院核心竞争力；对于科研教学起到促进作用。

简介：目的构建ITIH4基因重组慢病毒干扰系统。方法选取干扰效果最佳的siRNA片段，设计shRNA结构，退火反应形成双链后采用T4DNA连结酶与线性化慢病毒载体Psico连接，转化大肠杆菌后提取质粒，并经质粒DNA测序和PCR鉴定重组质粒构建是否成功，转染293T细胞并测定培养上液的病毒滴度。结果测序结果显示，重组慢病毒干扰载体Psico／ITIH4测序结果与设计的shRNA序列完全一致，转染293T细胞后，其病毒滴度为9．5×10^3IU／mL。结论成功地构建了ITIH4基因的重组慢病毒系统，为今后深入研究ITIH4奠定了基础。

简介：

简介：

简介：摘要目的探讨Wnt信号通路蛋白5a(Wnt5a)基因过表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗心肌梗死的影响及分子机制。方法结扎雄性SD大鼠冠脉前降支制备心肌梗死动物模型，按数字表法分为实验组(40只)和假手术组(20只)，4周后超声检测大鼠血流动力学指标变化；分离大鼠BMSC并在体外培养纯化，建立Wnt5a稳定沉默(sh-Wnt5a)和过表达的(oe-Wnt5a)BMSC细胞株，采用划痕实验检测Wnt5a沉默和过表达对细胞迁移能力的影响；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)技术检测心肌梗死大鼠模型组血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)和肝细胞生长因子(HGF)的含量；BMSC移植治疗心肌梗死大鼠，实验共分4组：心肌梗死对照组，生理盐水组、BMSC组和oe-Wnt5a组。移植治疗4周后，超声检测血流动力学变化后取材大鼠心肌，冰冻切片、苏木精-伊红(HE)染色后检测大鼠心肌梗死的面积；采用蛋白质印迹法(Western blot)技术检测移植后大鼠心肌组织中Wnt5a、桩蛋白(Paxillin)、干细胞因子受体(C-KIT)、Ca2+依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和钙敏感受体(CaSR)蛋白的表达，两组和多组间比较分别采用t检验和单因素方差分析。结果(1)成功建立Wnt5a稳定沉默和过表达的BMSC细胞模型。sh-Wnt5a组细胞迁移率显著低于对照组(6.67±1.02比18.71±3.02，t＝6.542，P<0.01)，oe-Wnt5a组细胞迁移率显著高于对照组(43.33±7.95比18.71±3.02，t＝5.014，P<0.01)。(2)ELISA结果显示，BMSC组及oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于心肌梗死组[(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml比(3 799.20±384.99)、(652.32±95.34)、(352.78±65.89)、(62.92±12.93) pg/ml，t＝4.745、5.114、3.337、3.204，P<0.05]；oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于BMSC组[(6 264.31±498.87)、(1 445.75±179.58)、(663.22±79.71)、(238.15±62.09) pg/ml比(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml，t＝3.990、5.441、3.799、3.437，P<0.05]。(3)移植治疗4周，大鼠心功能血流动力学有所改善。BMSC组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、和CaSR蛋白显著高于心肌梗死组(33.37±7.34、86.71±13.12、57.67±11.23、96.45±11.45比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、64.01±7.75，t＝3.679、3.561、3.895、4.064，P<0.05)；oe-Wnt5a组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、CAMKⅡ和CaSR蛋白表达显著高于心肌梗死组(60.33±10.12、90.22±15.42、86.44±12.45、73.30±11.34、108.69±14.43比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、47.66±9.87、64.01±7.75，t＝7.007、2.635、7.007、2.954、4.725，P<0.05)。Wnt5a和C-KIT蛋白表达显著高于BMSC组(60.33±10.12、86.44±12.45比33.37±7.34、57.67±11.23，t＝3.735、2.972，P<0.05)BMSC组和Oe-Wnt5a的心梗面积小于心肌梗死组(20.98±1.46、14.14±3.11比32.79±3.96，t＝4.825、6.415，P<0.05)，Oe-Wnt5a组的梗死面积小于BMSC组(14.14±3.11比20.98±1.46，t＝3.448，P<0.05)。结论Wnt5α基因过表达能有效促进BMSC的迁移及细胞因子的表达，过表达Wnt5a的BMSC移植治疗心肌梗死大鼠比单独移植BMSC疗效更显著。

简介：我们依然会怀念慢的时光,因为,只有在慢里,才会润泽时光的温静,才会回馈简单的快乐,才会生长纯粹的幸福。总有一些东西,因为慢,才让人无比惦念。拂去书页上的尘埃,那些仍被诵读的文字是慢的。木心写《从前慢》的心境是慢的。他慢慢地回忆那些曾经美好的时光,说：“从前的日色变得慢,车,马,邮件都慢,一生只够爱一个人。”在木心的记忆里,清早去赶火车,还可以悠闲地看“卖豆浆的小店冒着热气”，那些热气透过清晨的微光，慢慢地蒸腾，慢慢地弥漫，带着潮润的温暖。悠闲而又宁静。

简介：摘要间充质干细胞(MSC)是一类具有自我更新和分化潜能的成体多能干细胞，可以调控造血微环境，具有低免疫原性及独特的免疫调节特性，可安全应用于免疫抑制和缓解疾病进展。免疫相关血液系统疾病的发病机制主要涉及免疫调节系统紊乱及造血微环境异常，基于MSC的免疫调节特性和造血调控能力，MSC在该类病的防治方面呈现出极大的临床应用潜力。为进一步优化MSC的临床应用策略，笔者拟就其在移植物抗宿主病(GVHD)、再生障碍性贫血(AA)、免疫性血小板减少症(ITP)、嗜血细胞综合征(HPS)等多种免疫相关血液系统疾病中应用的研究现状进行阐述。

简介：摘要多项临床研究已证实间充质干细胞治疗SLE患者安全且有效。为了规范间充质干细胞的临床应用，专家组对间充质干细胞治疗SLE的适应证、用法、输注次数及细胞数、输注前用药以及输注后合并用药，以及在合并妊娠、感染和肿瘤等情况时的应用制定了推荐意见。

简介：

简介：目的：针对建立老年慢病住院患者营养不良风险评估系统的意义展开分析。方法：选取我院2020年1月-2021年3月期间收治的86例老年慢性住院患者为研究对象，根据建立老年慢病住院患者营养不良风险评估系统时间前后分为对照组与研究组，各43例，对照组采用常规营养风险评估方法，研究组使用最新建立的老年慢病住院患者营养不良风险评估系统，比较两组患者营养不良发生率与营养风险评估满意度。结果：研究组营养不良发生率低于对照组，营养风险评估满意度高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：建立老年慢病住院患者营养不良风险评估系统，可根据系统评估结果制定针对性管理策略，有效减少营养不良发生率，对患者康复有重要意义，值得推广与应用。

简介：目的：构建可诱导表达野生型或突变型第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）的慢病毒表达体系．为进一步研究PTEN与肿瘤间的关系提供理想的实验工具。方法：提取甲状腺癌、肺癌及其癌旁组织的RNA，经反转录后扩增PTEN片段，将其连接入慢病毒载体，与病毒包装质粒共转染人胚肾T细胞（293T）细胞，获得病毒。将其感染MDA-MB-231细胞．用嘌呤霉素筛选，获得稳定表达的细胞株。采用蛋白印迹法检测稳定转染的细胞株中PTEN基因的表达情况，用软琼脂克隆形成实验检测细胞株的克隆形成能力。结果：在甲状腺癌和肺癌中发现PTEN突变体：蛋白印迹检测结果证实野生型和突变型PTEN的慢病毒表达体系构建成功．突变型PTEN的克隆形成能力强于野生型PTEN。结论：发现了PTEN突变体．并成功构建了野生型和突变型PTEN基因的可诱导慢病毒表达体系，突变型PTEN不但有抑癌作用．还有致癌作用。