简介:高质量mRNA的分离和纯化是转录组文库构建和基因表达调控等生物学实验的前提。为了调取较完整、纯度较高的mRNA,本研究采用磁性分离技术调取mRNA,磁性复合微粒通过其表面的功能团与oligo(dT)_(25)相偶联,形成杂交体-磁珠复合体,外加磁场来实现mRNA的快速分离,并经过不同试剂纯化后得到高质量的mRNA,用于构建转录组文库。结果表明:mRNA被调取后,使用不同的缓冲液纯化时对mRNA质量影响较大,经多次试验验证:结合缓冲液为2.5mol/LLiCl,洗脱缓冲液采用0.1mol/LLiCl和1%LiDS相结合进行纯化时,检测结果显示文库条带位于400~600bp之间,条带大小符合上机要求。高质量转录组文库的构建为高通量测序和基因克隆等实验提供帮助。
简介:MeCWINV6是木薯6个细胞壁转化酶基因之一。本研究中应用酵母单杂交技术筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子,为进一步研究该基因的表达调控提供基础。由MeCWINV6的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建木薯酵母单杂交cDNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子。构建的cDNA文库库容为7.08×106,插入片段大小在250~2000bp间。筛选大于1000bp的35个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析筛选出锌指蛋白、组氨酸蛋白H1.2和AT-hook核定位蛋白三个转录因子以及一个线粒体受体TOM5。为进一步研究MeCWINV6基因的表达调控机制提供了候选转录因子。
简介:《广东奶业》杂志是广东省奶业协会和广东省畜牧技术推广总站共同主办的奶业专业技术刊物。本刊设有行业要闻、奶业论坛、政策与法规、经营管理、育种与繁殖、营养与饲养、兽医保健、奶业机械、乳与乳品、市场与消费、国外奶业、信息文摘、会员天地、读者来信等专栏,欢迎奶业同行踊跃投稿。1稿件要求:1.1稿件要求主题明确、文字精炼、数据可靠、通俗易懂。来稿一般不要超过4000字,能用文字说明清楚的,请尽量不用图表。1.2文稿的书写顺序一般是:题目、作者姓名(原著作者及译者姓名)、作者单位、所在地和邮编、摘要、关键词、正文、参考文献。同时,请附作者简介(包括姓名、出生年份、性别、学