简介:目的探讨人骨形成蛋白-2(BMP-2)全长基因的克隆,及其真核表达重组子构建方法。方法采用Trizol法从人髁状突骨组织中提取制备总RNA,利用逆转录技术转录出BMP-2cDNA,以其为模版,PCR扩增出BMP-2全长基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接.构建真核表达重组子pcDNA3.1(+)/BMP-2.经酶切和序列分析鉴定重组子的构建情况。结果PCR扩增产物在1200000处有扩增条带.与目的基因大小相符.重组质粒经限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切后。得到5400000和1200000的BMP-2条带,BMP-2基因已成功克隆且成功与pcDNA3.1(+)连接。结论成功克隆出人BMP-2基因,并构建其真核表达重组子pcDNA3.1/BMP-2,为进一步研究BMP-2的功能、BMP-2基因在骨髓间充质细胞(hMSCs)中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础.
简介:摘要目的构建miR-7-1启动子核心序列的真核表达载体,并初步探讨其意义。方法根据5’端缺失实验原理,设计引物,PCR法分别扩增含不同长度启动子序列和相同miR-7-1成熟体序列的产物;纯化、经KPNI和XHOI双酶切后将它们分别亚克隆入pGL3.0-Basic真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将三个构建成功的pGL3.0-miR-7载体(分别命名为p-1189-miR-7,p-1731-miR-7,p-2192-miR-7)体外瞬时转染小鼠乳腺癌4T1细胞;用Real-timePCR检测各组中miR-7成熟体的表达水平;CCK-8法检测细胞生长的变化;最后,利用TRANSFAC数据库预测结合miR-7-1启动子核心序列的潜在转录因子。结果酶切和测序验证成功构建了p-1189-miR-7、p-1731-miR-7、p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体;与表达载体p-1189-miR-7、p-1731-miR-7转染组相比,表达载体p-2192-miR-7瞬时转染4T1细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制4T1细胞的体外生长(p<0.05),提示miR-7启动子序列-1593位点到-2024位点为核心序列;最后,预测结果显示NK2-同源盒-5(NK2-Homebox-5,NKX2-5)和肝细胞核因子4(hepatocytenuclearfactor4homeobox,HNF-4)可能是结合该核心序列的转录因子。结论成功构建了p-1189-miR-7,p-1731-miR-7,p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体,并筛选到miR-7-1启动子的核心序列(-1593位点到-2024位点),为后续深入研究miR-7-1在乳腺癌发生中的作用及机制提供了前期实验基础。
简介:“USO目标失踪啦!”红红瞪着圆圆的眼睛对我说。我抬起头,看到红红的荧光屏上白花花一片。我叹着气轻声道:“不是目标失踪,是重力定位失灵!”“什么,你怀疑重力定位?”正在埋头操作仪器的亮亮像是被谁踩住了似的怒气冲冲地说着,“就让‘先锋’号紧急起浮,看看我们还在不在33号海区活动?”
简介:[上期讲到李中尉在导弹舱里发现了一个昏迷的蒙面人,并把他背到了高个青年和亮亮所在的舱里。蒙面人苏醒后,嘴里说着谁也听不懂的话。高个青年打开他装有多种语言翻译器的电脑。于是,李中尉他们就能用汉语和蒙面人交谈了。]
简介:摘要:核电是保障国家能源安全,实现“碳达峰、碳中和”的关键,对国家的国防安全和经济社会发展起着不可替代的重要作用。核安全是关系到国家事业发展,关系到公共利益,关系到社会稳定,关系到国家前途命运。党的二十大报告中指出,要积极、安全、有序地发展核电,强化能源产供储销体系建设,确保能源安全。要强化核安全监督,要对国家核安全的内涵和外延有一个准确的把握,要将其放在中国式现代化的大局之中,要将其放在生态文明建设的大局之中,要将其作为一个整体来进行规划,要将其纳入到国家安全战略之中,要将其作为一个整体来进行,要在新的时代背景下,对核安全工作提出了新的要求。本论文的重点是对核安全文化和核安全监督的分析。