简介：摘要目的探讨核小体装配蛋白1样1(NAP1L1)对鼻咽癌细胞增殖能力的影响及其机制。方法选取2017年1月到2021年1月新乡市中心医院收集的60例鼻咽癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用免疫组织化学分析癌旁组织和鼻咽癌组织NAP1L1蛋白表达水平。采用NAP1L1短发卡RNA(shRNA)慢病毒感染低分化鼻咽癌细胞SUNE-1，建立对照组和NAP1L1 KD组细胞系，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和体外移植瘤实验分析NAP1L1对鼻咽癌细胞增殖的影响。采用流式细胞术分析两组细胞周期水平；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析肿瘤组织和癌旁组织中周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)和细胞周期素D1(CCND1) mRNA和蛋白表达水平。组间计量数据比较采用t检验。结果NAP1L1蛋白主要表达于细胞核中。定量结果显示，癌旁组织NAP1L1蛋白表达强度(31.64±7.01)明显低于鼻咽癌组织NAP1L1蛋白表达强度(91.80±15.18)，差异有统计学意义(t＝27.87，P<0.05)。对照组细胞48 h和72 h吸光度(A)值(1.08±0.08、1.89±0.11)明显高于NAP1L1 KD组细胞48 h和72 h A值(0.79±0.08、1.31±0.05)，差异有统计学意义(t＝6.328、11.570，P<0.05)。克隆形成实验结果显示，对照组细胞克隆形成数量(109.50±14.45)明显高于NAP1L1 KD组细胞克隆形成数量(66.33±7.69)，差异有统计学意义(t＝6.462，P<0.05)。接种30 d后对照组细胞在裸鼠成瘤体积和重量[(1 072.90±114.87) mm3、(4.96±0.52) g]显著高于NAP1L1 KD组细胞[(855.90±55.54) mm3、(3.27±0.23) g]，差异有统计学意义(t＝5.387、9.425，P<0.05)对照组细胞G0/G1期比例[(55.03±3.09)%]明显低于NAP1L1 KD组细胞[(74.88±2.16)%]，差异有统计学意义(t＝12.890，P<0.05)。对照组细胞G2/M期比例[(5.61±0.63)%]明显低于NAP1L1 KD组细胞[(14.01±1.03)%]，差异有统计学意义(t＝17.080，P<0.05)。对照组细胞S期比例[(30.27±1.79)%]明显高于NAP1L1 KD组细胞[(11.44±2.34)%]，差异有统计学意义(t＝15.650，P<0.05)。对照组细胞CDK4、CDK6和CCND1蛋白表达水平(1.23±0.06、1.03±0.09、0.88±0.05)明显高于NAP1L1 KD组细胞(0.41±0.07、0.60±0.05、0.30±0.05)，差异有统计学意义(t＝21.330、10.560、19.980，P<0.05)。结论NAP1L1在鼻咽癌组织中呈高表达，通过调节与肿瘤细胞周期相关蛋白的表达水平，调节细胞周期变化，进而影响肿瘤细胞恶性增殖的能力。

简介：近年,由于发现多种神经变性疾病与α-共核蛋白病理性改变有关,α-共核蛋白越来越引起人们的关注.与α-共核蛋白病理性改变有关疾病的临床表型是多样的,其中最为常见的是帕金森综合征、自主神经功能障碍和痴呆.

简介：摘要核小体重塑与去乙酰化酶(NuRD)复合物是同时具有组蛋白去乙酰化和染色质重塑活性的独特复合物，在转录调节和DNA损伤修复过程中发挥重要功能。近年研究发现，NuRD复合物在γ珠蛋白的调控中，亦发挥重要作用。NuRD复合物中的多个亚基，如染色质螺旋酶DNA结合蛋白(CHD)、甲基化CpG结合蛋白(MBD)、GATA锌指结合域蛋白(GATAD)2、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)1/2，以及转移相关蛋白(MTA)亚基等，通过不同机制参与沉默γ珠蛋白表达，并且NuRD复合物与其他调控γ珠蛋白表达的转录因子之间亦有相互作用。基于提升γ珠蛋白的表达是治疗β血红蛋白病的策略之一，笔者拟就NuRD复合物及其亚基在γ珠蛋白表达调控中的具体机制的研究进展进行综述，旨在为治疗β血红蛋白病寻找新的分子调控靶点提供参考。

简介：目的探讨血清抗核小体抗体（AnuA）水平与狼疮肾炎活动性、肾脏病理改变的关系及其治疗前后的变化。方法用酶联免疫吸附法检测活动期狼疮肾炎患者40例（观察组）和同期健康体检者40例（对照组）血清AnuA水平，分析其与系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI）、肾脏病理改变及其他实验室参数的相关性，并比较狼疮肾炎患者治疗前后血清AnuA水平的变化。结果观察组治疗前血清AnuA水平为（110．23±80．48）ku／L，较对照组的（10．45±8．20）ku几明显升高（P〈0．05）；40例狼疮肾炎患者均行。肾穿刺活检，Ⅱ型4例，Ⅲ型8例，Ⅳ型23例，Ⅴ型5例。经KmskM．Wallis秩和检验显示，各病理类型间血清AnuA水平比较差异有统计学意义（P〈0．05），其中Ⅳ型血清AnuA水平显著高于其他病理类型（P〈0．05）；血清AnuA水平与SLEDAI、尿蛋白定量及抗双链DNA（dsDNA）抗体滴度呈正相关性（r=0．462、0．521、0．394，P〈0．05），与补体C。、C。水平呈负相关性（r=-0．403、-0．489，P〈0．05）；观察组治疗后血清AnuA水平为（32．45±18．31）ku几，较治疗前[（110．23±80．48）kU／L]明显降低（P〈0．05）。结论血清AnuA水平不仅与狼疮肾炎活动性相关，而且在一定程度上能反映肾脏病变程度，检测血清AnuA水平可以为临床治疗及判断预后提供重要依据。

简介：

简介：摘要目的探讨血清抗核小体抗体(AnuA)检测在狼疮性肾炎(LN)患者中的临床意义。方法采用免疫印迹法检测26例LN和32例系统性红斑狼疮(SLE)无肾炎患者血清AnuA。并跟踪分析了11例LN患者治疗过程中血清AnuA与尿蛋白、尿红细胞、血清白蛋白的相关性。结果LN组与SLE无肾炎组患者AnuA阳性率差异极显著性(P<0.001)，LN组患者血清AnuA阳性率显著高于SLE无肾炎组（P<0.01）；AnuA与LN患者的尿蛋白、尿红细胞呈正相关（P<0.01）；血清AnuA与LN患者血清白蛋白呈负相关（P<0.01）。LN患者血清ANuA随着病情的好转，由强变弱直至转阴。结论血清AnuA的检测对于LN的诊断及疗效评价具有重要意义。

简介：摘要目的研究和评价血清抗核小体抗体(AnuA)在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的临床意义。方法用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测50例SLE组患者、39例非SLE疾病对照组患者血清AnuA，同时用间接免疫荧光法检测患者血清抗核抗体(ANA)和抗双链(ds-DNA)抗体、酶免疫条带法检测其抗Sm抗体，进行统计学分析，评价抗核小体抗体在SLE诊断中的临床意义。结果AnuA的敏感性和特异性分别为76.0%和98.6%，敏感性低于ANA(P<0.01)，高于抗ds-DNA抗体（P>0.05）、以及抗Sm抗体（P<0.01）；特异性高于ANA（P<0.01），与抗ds-DNA抗体相同（P>0.05），低于抗Sm抗体（P>0.05）；AnuA在抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体阴性的SLE患者中检出的阳性率分别为47.6%和73.8%。结论抗核小体抗体对SLE的敏感性和特异性较高，与ANA、抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体等自身抗体联合检测对SLE的诊断具有重要的临床意义和应用价值。

简介：摘要目的研究抗核小体抗体（AnuA）在系统性红班狼疮（SLE）诊断中的应用价值。方法使用线性免疫分析法对60例系统性红班狼疮患者，38例其他患有风湿性病患以及15例健康体检合格者进行检测，检测内容主要是系统性红班狼疮（SLE）诊断中的抗核小体抗体（AnuA）在系统性红班狼疮（SLE）的使用疗效，掌握其和其他本身存在抗体之间的联系。结果抗核小体抗体（AnuA）在系统性红斑狼疮（SLE）病患中的应用效果显著，阳性率在系统性红班狼疮（SLE）病患中为72.4%，在疾病对比组中是2.3%，健康对比组是0%，红班狼疮病患的阳性率明显比疾病对比组以及正常对比组要高出许多性（p<0.01），抗核小体抗体在红班狼疮中的特异性以及敏感性分别是98.7%以及72.4%。结论抗核小体抗体对于红斑狼疮具有较高的敏感度以及特异效果，抗核小体抗体对红斑狼疮的诊断具备十分关键的临床价值1。

简介：目的：构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α（EF-1α）,测定其对体外蛋白翻译的影响。方法：通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量。结果：测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译。结论：从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础。

简介：目的比较抗心磷脂抗体（anticardiolipinantibody，ACA）、抗核小体抗体（anti-nucleosomeantibody，AnuA）、抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、免疫球蛋白、补体在狼疮肾炎中的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附法检测抗心磷脂抗体，线性免疫分析法检测抗核小体抗体、抗Sm抗体，间接免疫荧光法检测抗ds-DNA抗体，免疫散射比浊法检测免疫球蛋白及补体。结果ACA、AnuA、抗-dsDNA抗体阳性率在狼疮肾炎组明显高于无肾脏表现组，而且2组患者之间比较差异有统计学意义（P〈0．05），而抗sm抗体在2组患者之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。IsG水平在狼疮肾炎组和无肾脏表现组均高于对照组（P〈0．05），而且狼疮肾炎组和无肾脏表现组比较也有统计学意义（P〈O．05）；补体c3、c4水平在狼疮肾炎组和无肾脏表现组均低于对照组（P〈0．05），而且狼疮肾炎组和无肾脏表现组比较也有差异统计学意义（P〈0．05）。狼疮肾炎患者ACA、AnuA、抗-dsDNA、IgG、C3、C46项指标的阳性率比较差异无统计学意义坼=9．099，P〉O．05）。结论ACA、AnuA、抗-dsDNA、IgG、C3、C4均可以反映sLE患者有肾脏损伤，但是由于作用机制各不相同，此6项指标间无相关性，联合检测可以显著提高狼疮肾炎的确诊率，为早期治疗提供实验室依据。

简介：摘要NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3）炎症小体是参与炎症反应的一种复合物，已被证实参与了急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的发生、发展，其激活机制非常复杂，线粒体活性氧（reactive oxygen species, ROS）以及线粒体DNA（mitochondria DNA, mtDNA）的积累会激活NLRP3炎症小体，但线粒体在NLRP3炎症小体介导ALI过程中所发挥的作用远不止如此，阐明临床上各种类型的肺损伤激活线粒体-NLRP3炎症小体通路的完整机制可能为未来治疗相关疾病提供新的思路。文章就NLRP3炎症小体的结构、线粒体-NLRP3炎症小体通路的激活机制及其在ALI中的作用展开综述，为ALI的临床治疗提供新的思路与策略。

简介：据2012年5月31日GuoLT[PLoSPathog，2012，8（4）：e1002659]报道，加拿大多伦多大学研究者揭示Nlrplb的蛋白酶解加工需要炎性小体（inflammasomes）的活化。炎性小体是一种多重的蛋白质复合物，可以推进前细胞凋亡蛋白酶对于病原体相关的分子模式（PAMPS）内源性危险相关的分子模式（DAMPS）产生必要的应答。Nlrplb是一种NOD样受体．可以检测炭疽致死毒素的催化活性，随后通过共寡聚体化来激活前细胞凋亡蛋白酶－1的活化。

简介：摘要目的探讨抗核小体抗体(AnuA)在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的临床意义。方法采用免疫印迹法检测58例SLE患者，41例其他风湿性疾病患者和30例健康人血清中AnuA、抗ds-DNA抗体及抗Sm抗体,并比较分析各组血清中的三种抗体的关系。结果AnuA在SLE患者中的阳性率为72.4％，疾病对照组中为2.3％，健康对照组中为0％；SLE组患者AnuA阳性率显著高于疾病对照组及正常对照组(P<O.01)，AnuA在SLE中检测的敏感性和特异性分别为72.4％和97.7％。抗ds-DNA与抗Sm抗体阴性的SLE患者中AnuA阳性率分别为55.5％、51.6％。结论感AnuA对SLE诊断的敏感性高、特异性强，AnuA测定对SLE的诊断具有重要的临床价值。

简介：目的克隆并表达人心肌肌钙蛋白I(cTnl)cDNA，为高效获得大量蛋白、制备抗体打下基础。方法采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PcR)和分子生物学技术克隆人cTnI基因，重组构建pcDNA3-cTnI真核表达载体，转染人胚肾(HEK)293细胞，并用单克隆抗体检测特异性cTnI蛋白表达．结果克隆了cTnI的全长基因，构建了pcDNA3-cTnI真核表达载体并成功地在真核细胞中获得了蛋白表达结论所表达的蛋白证明具有正确的cTnI免疫原性，为规模化制备cTnI蛋白奠定了基础。

简介：摘要炎症小体是在细胞应激或感染时而活化组装的多蛋白复合物，是介导炎症反应的重要成分之一。炎症小体过度活化与多种人类疾病密切相关。目前发现，自噬是参与调控炎症小体活化的重要机制。因此，研究炎症小体以及自噬参与炎症小体调控的机制对于理解多种人类疾病的发病机理以及寻找治疗靶点提供重要依据。

简介：摘要： 目的 获得人载脂蛋白 A-I (apoA-I)重组蛋白原核表达的最佳条件。方法 研究由诱导温度、 IPTG终浓度、 IPTG诱导时间等对 apoA-I重组蛋白表达量的影响。 结果 SDS-PAGE验证各不同条件下获得目的蛋白条带为 29kd;结果显示重组大肠杆菌菌株的最佳条件为 32℃、 IPTG诱导浓度为 1.0mmol/L以及 IPTG诱导时间为 3h。结论 成功在大肠杆菌中诱导表达出来 apoA-I，并筛选出 apoA-I原核表达的最优条件。

简介：摘要目的获得人载脂蛋白A-I(apoA-I)重组蛋白原核表达的最佳条件。方法研究由诱导温度、IPTG终浓度、IPTG诱导时间等对apoA-I重组蛋白表达量的影响。结果SDS-PAGE验证各不同条件下获得目的蛋白条带为29kd;结果显示重组大肠杆菌菌株的最佳条件为32℃、IPTG诱导浓度为1.0mmol/L以及IPTG诱导时间为3h。结论成功在大肠杆菌中诱导表达出来apoA-I，并筛选出apoA-I原核表达的最优条件。

简介：为了进一步明确苹果茎痘病毒（Applestempittingvirus,ASPV）的分子变异及株系分化,制备相应特异性抗血清。本研究以库尔勒地区种植的感染ASPV的鸭梨（Y）枝条韧皮部为试材,采用RT-PCR技术扩增ASPVCP基因,克隆、测序,获得了鸭梨分离物外壳蛋白（ASVPCP-Y）基因,将该CP基因连接到表达载体PET-28a上,转化到大肠杆菌BL21（DE3）,1mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析。研究结果表明,获得的鸭梨ASPVCP基因全长1194bp,推测编码397个氨基酸,与已报道的ASPV分离物的氨基酸序列同源性为70%左右。进化分析结果显示,ASPVCP基因的分离物可聚为三个类群：第一类群的寄主为苹果,第二类群的寄主为梨（除了NC_003462,苹果）,ASPVCP-Y归入第三类群。CP基因在大肠杆菌中诱导表达,其融合蛋白分子量约为42kD。克隆的鸭梨ASPVCP基因及构建的原核表达载体为制备ASPV重组CP基因多克隆抗体及ASPV的分子生物学的进一步研究奠定了基础。

简介：目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。

简介：丝氨酸乙酰转移酶(serineacetyltransferase,SAT)是甲硫氨酸和半胱氨酸合成途径的关键酶,利用该基因提高作物中甲硫氨酸水平具有广阔的应用前景。为了研究拟南芥SAT1(ArabidopsisthalianaSAT1)基因的蛋白表达情况及相关功能,构建了带有His标签的AtSAT1基因原核表达载体pET-30b(+)-SAT1-His(6)。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经固定化金属离子亲和层析(IMAC)纯化获得了抗原蛋白SAT1-His(6)。该抗原蛋白经免疫兔子,成功制备了具有较高特异性和灵敏性的SAT1蛋白多克隆抗体。Westernblotting表明,该抗体可用来检测转AtSAT1基因的转基因玉米株系中SAT1蛋白的积累量,为后期对该基因开展进一步深入研究具有重要意义。