简介:摘要 :水粉画并不是水彩画的附庸,更不是由中国特有发明的产物,而是在不同历史时期交织缠绕的发展的,并且曾大量应用。 在 我国 ,粉质绘画在纯粹艺术上的发展尽管受到一定的边缘,但仍是 被认为具有独立价值与表现力的绘画种类 ,虽只有近百年的历史 ,依旧 显示出了强大的生命力。
简介:摘要:目的 分离培养经血来源间充质干细胞 (Menstrual Blood-Derived Mesenchymal Stem Cells, MenMSCs),检测胚胎干细胞转录因子 (octamer-binding transcriptionfactor- 4, Oct4)的表达。方法 通过密度梯度离心和差速帖壁法分离间充质干细胞,体外传代培养,通过倒置相差显微镜观察细胞的粘附、生长情况。取对数生长期的细胞在酶标仪 450nm波长处检测吸光度值,绘制细胞生长曲线 ,有限稀释法观察克隆形成,免疫细胞化学方法检测干细胞表面标志的表达。结果 经血间充质干细胞在体外培养体系中增殖迅速,免疫细胞化学染色Oct4、 CD44阳性。结论 经血间充质干细胞增殖能力强,具有成体干细胞和胚胎干细胞的特性。
简介:摘要二维(2D)贴壁培养是间充质干细胞体外扩增的标准技术,但其局限性也很明显,比如组织特异性的结构、生物学行为及细胞间的相互作用在2D环境中缺失。三维(3D)培养是一种模拟体内生长环境的细胞培养方式,通过让细胞聚集成3D球体或者将细胞在成分结构类似于实体组织的3D结构载体上黏附、伸展和生长,从时间和空间上共同调控细胞的增殖和分化,使特性和功能得以较大程度保留。与2D培养相比,3D培养增强了细胞与细胞之间以及细胞与胞外基质之间的相互作用,更准确地模拟细胞在体内的自然微环境。3D培养也解决了MSCs在体外增殖能力减低的问题,MSCs成脂、成骨和成软骨的能力增强。MSCs球体的制备(微球体黏附培养)被认为是提高MSCs细胞疗法的优化方式之一,MSCs球体的形成能增强抗炎作用、增强血管生成、增加组织再生和修复作用并提高MSCs移植后的存活率。本文就微球体黏附培养MSCs的生物学特性及其应用进展进行综合阐述。
简介:摘要目的探讨寡脱氧核苷酸 (ODN) MT01对大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSCs) 形态、增殖及成骨分化的影响。方法4周龄清洁级SD雄性大鼠5只,以全骨髓贴壁法培养SD大鼠BMSCs,通过观察不同代次的细胞形态、流式细胞仪检测表面相关标志物和成骨分化潜能,对所提取的干细胞进行鉴定。设立PBS组(对照组)和不同浓度 (0.5、1.0、2.0、4.0 μg/ml) ODN MT01组进行对照研究,每组实验重复3次。通过DAPI和鬼笔环肽荧光染色观察各组BMSCs细胞核及骨架的形态变化;通过CCK-8法检测不同时间各组BMSCs的增殖活性;成骨诱导培养基培养7 d和21 d, 分别行碱性磷酸酶染色及其活性检测和茜素红染色鉴定各组BMSCs的成骨分化程度。组间两两比较采用 t 检验,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果随着代次增加,BMSCs纯度越来越高,第3代细胞整体呈鱼群样分布。流式细胞仪分析结果显示,细胞高表达CD29 (99.8%)、CD44 (96.1%),低表达CD11b (1.03%)、CD45 (1.74%)。成骨诱导7 d后碱性磷酸酶染色及21 d后茜素红染色均为阳性。细胞核及骨架染色显示,ODN MT01浓度为4.0 μg/ml时会导致BMSCs皱缩并降低伸展性。CCK-8结果显示,培养4 d时对照组吸光度值为0.446±0.018,1.0、2.0 μg/ml ODN MT01组分别为0.505±0.019、0.528±0.014,与对照组比较差异有统计学意义 (t=2.954、4.083,P=0.033、0.008),培养7 d时对照组吸光度值为0.514±0.027,1.0、2.0 μg/ml ODN MT01组分别为0.607±0.007、0.636±0.023,与对照组比较差异有统计学意义 (t=4.664、6.091,P=0.009、0.008),BMSCs增殖能力较对照组明显升高,而4.0 μg/ml ODN MT01 (0.427±0.013) 对BMSCs增殖能力具有抑制作用 (t=4.332,P=0.015);诱导BMSCs成骨分化过程中随着ODN MT01浓度的升高,蓝色团块和矿化结节均显著增加,培养7 d后的碱性磷酸酶活性升高趋势与ALP染色结果相类似,对照组碱性磷酸酶活性为1.207±0.023,0.5、1.0、2.0、4.0 μg/ml ODN MT01组分别为1.747±0.095、2.200±0.136、3.560±0.088、3.490±0.144,与对照组比较差异均有统计学意义 (t=4.313、7.934、18.800、18.240,P=0.005、0.001、<0.001、<0.001),而2.0、4.0 μg/ml组的诱导效果相比基本无差异 (t=0.562,P=0.590)。结论在不影响BMSCs形态的情况下,浓度为2.0 μg/ml的ODN MT01可显著促进BMSCs的增殖和成骨分化。
简介:摘要目的探讨中性鞘磷脂酶2对缺氧预处理骨髓间充质干细胞来源的外泌体生物学特性的影响。方法分离并体外扩增6周龄C57BL/6小鼠来源的骨髓间充质干细胞,收集细胞上清,分离来自缺氧处理的外泌体(ExoH)和常氧下培养来源的外泌体(ExoN),并鉴定其生物学特性。比较ExoH和ExoN在体内实验中对心肌细胞保护作用的差异,同时收集在缺氧预处理状态下加入中性鞘磷脂酶2抑制剂GW4869来源的外泌体(ExoH+GW),并在体外实验中比较ExoN、ExoH和ExoH+GW对心肌细胞抗凋亡及血管新生能力的作用。结果ExoH组小鼠心肌梗死后28 d的射血分数显著高于ExoN组(44.12%±8.12%比20.73%±7.32%,n=20,t=11.95,P<0.05)。同时发现,缺氧增加中性鞘磷脂酶2的表达,而ExoH+GW组在体外管腔形成及心肌细胞保护方面明显弱于ExoH组,并且其微小RNA-210含量显著减低。结论缺氧预处理骨髓间充质干细胞来源的外泌体拥有更好的心脏保护能力,中性鞘磷脂酶2可能是主要的作用机制,可能通过影响外泌体内有益微小RNA的含量来发挥生物学作用。