简介：目的：构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法：采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMASPIN-400柱分级分离后,收集500bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果：经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2kb,平均插入片段长度大于1kb。结论：建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。

简介：为研究黄金茶出芽早的分子机制，本研究采用SMART-RACE技术，获得了与解除休眠相关的转录因子CsDAM2基因的全长eDNA序列，并进一步对该氨基酸序列进行了生物信息学分析。研究发现CsDAM2基因全长为1386bp，序列分析表明，该序列含有一个完整的编码区，大小为657bp，编码区GC含量为50．45％。此编码区可以编码分子量为24．86kD的亲水性蛋白，该蛋白由218个氨基酸组成，理论等电点（pI）为8．96。黄金茶CsDAM2蛋白有11个磷酸化位点，属跨膜蛋白，与毛白杨DAM3的相似性为71％，与已登录茶树MADS．box蛋白的一致性为35％。本研究为进一步揭示黄金茶春芽萌发早的分子机制提供了理论依据。

简介：为研究优质烟叶的分子基础,以翠碧一号不同生长时期的叶片为材料,CTAB法提取总RNA,利用SMART技术合成全长cDNA,之后按经修改的Clontech技术成功构建了烟草叶片全长cDNA文库。经鉴定,初级文库库容为3.85×10^6个克隆,重组率为100%,重组子插入片段集中在750-2000bp之间。随机挑取25个克隆测序后,经生物信息学分析表明,烟草上已经报道的基因占10条,11条为全长基因序列;20条序列有功能注释。综合分析表明,所构建的文库质量较高,达到了基因的分离、筛选和克隆的建库目的。

简介：硬酯酰辅酶A脱氢酶（Stearoyl-CoADesaturase,SCD）是参与脂肪酸脱氢反应的限速酶和关键酶,此酶编码基因SCD对增加膜磷脂的不饱和脂肪酸成分,提高细胞膜在低温下的流动性发挥重要作用,可能是抗寒过程中的关键基因成员。本研究采用cDNA末端快速扩增技术（RapidAmplificationsofcDNAEnds,RACE）克隆了鲤（Cyprinuscarpio）脑组织CcSCD基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在低温（6℃）和常温（23℃）条件下的转录表达差异,对其蛋白编码序列的结构和功能进行了预测分析。结果显示,CcSCD基因cDNA全长2618bp,包含一个由324个氨基酸残基组成的长度为975bp的阅读框（ORF）;蛋白分子进化树显示鲤的SCD和草鱼（Ctenopharyngodonidella）的SCD蛋白同源性最高,相似性达88%;实时荧光定量结果表明,低温刺激下（6℃）,CcSCD基因表达水平是常温条件下（23℃）的13.9倍,差异非常显著（P〈0.01）。本研究旨在为今后构建表达载体,通过遗传操作等研究手段鉴定其抗寒功能奠定基础。

简介：背景:肝纤维化病程迁延且药物治疗效果不理想,基因治疗将成为这一领域研究的热点.研究显示白细胞介素(IL)-10对肝脏具有保护作用,可阻止肝纤维化的发生、发展.目的:克隆并鉴定Sprague-Dawley(SD)大鼠IL-10基因的全长cDNA,为进一步构建大鼠IL-10腺病毒重组子和肝纤维化基因治疗的研究奠定基础.方法:自行设计IL-10上下游引物,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从SD大鼠脾脏单核细胞中扩增编码大鼠成熟IL-10肽链的cDNA片断.扩增产物与连接载体pMD-18T连接后转化感受态菌DH5α,构建重组载体pMD-18T-IL-10.结果:以SD大鼠脾脏单核细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出大小为540bp的大鼠IL-10cDNA片断.所构建的重组质粒经HindⅢ+KpnⅠ双酶切显示含有目的基因片段,测序结果证实扩增出的DNA片断与大鼠IL-10基因序列相符,表明编码区无基因突变.结论:成功地克隆了大鼠IL-10基因的全长cDNA,并构建了重组载体pMD-18T-IL-10.

简介：启动子是调控外源基因在植物体内表达的“开关”。随着植物转基因技术的广泛应用，无论是基础研究还是应用研究，人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内的表达，使目的基因的“开”和“关”、表达的“多”和“少”、在“何地”和“何时”表达等。能够听从人的指挥，以实现植物育种的分子设计。因此，快速分离和鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究的热点和难点。本文在互补末端连接反向PCR（CELI—PCR）技术基础上建立起…种快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列的新方法。该方法利用CELI—PCR进行染色体连续步移，获取足够长的目的基因及其上游基因组DNA序列，再根据转录起始位点是目的基因转录本和启动子的分界点，其下游转录本中的外显于可通过RT-PCR扩增，而上游启动子序列则不能被RT-PCR扩增这一特点，借助RT-PCR进行cDNA连续步移，直到获得全长cDNA，确定启动子基因5’非翻译区的位置，进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确的启动子序列和全长cDNA序列。因此，建立在CELI，PCR基础上的RITIS技术，可绕过繁琐的构建cDNA库和5＇-RACE等方法快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列。

简介：安全长大，是我们每一个做子女的责任和义务。因为，我们是含苞待放的花朵，是振翅欲飞的雄鹰，是冉冉升起的朝阳。父母、老师对我们寄予厚望，我们是父母注视的焦点，我们是老师培养的重点对象，父母和老师都在尽全力提高我们的学习和生活水平，希望我们早日成为国家的人才。

简介：

简介：对木头开发和形成的分子的生物研究是相关基因的发现的最近的年，而是步里的焦点，他们在木头性质的控制的函数是慢的。它在另外的工具上的高产量能力，敏感，和可靠性的优点为调查能够的基因表示patternsis开发了的microarraytechniquewith很快assaying几千基因。在这研究，从开发白杨木部纸巾的二个cDNA图书馆准备的cDNAmicroarray从Populusdeltoides的主要的茎在不同高度在不成熟的木部纸巾习惯于试金基因表示模式(15?岁)，它被证实有不同木头性质(microfibrillar角度，木质的密度)旁边X光检查。有在薄片之间的微分表示侧面的274个抄本外面被屏蔽，并且单个克隆受到5定序。用生物信息的分析，我们识别了可以影响白杨木头性质的候选人基因，许多哪个属于各种各样规章并且信号transduction基因家庭例如锌手指蛋白质抄写因素，DNA有约束力的抄写因素，乙烯反应因素等等。结果建议这些基因可以调整涉及木头形成的酶。进一步的工作将被执行克隆这些基因并且决定他们怎么影响白杨木头性质。

简介：Phytohormoneabscisicacid(ABA)wascriticalformanyplantgrowthanddevelopmentalprocessesincludingseedmaturation,germinationandresponsetoenvironmentalfactors.WiththepurposetodetectthepossibleABArelatedsignaltransductionpathways,wetriedtoisolateABA-regulatedgenesthroughcDNAmacroarraytechnologyusingABA-treatedriceseedlingasmaterials(undertreatmentfor2,4,8and12h).Of6144cDNAclonestested,37differentialclonesshowinginductionorsuppressionforatleastonetime,wereisolated.Ofthem30and7wereup-ordown-regulatedrespectively.Sequenceanalysesrevealedthattheputativeencodedproteinswereinvolvedindifferentpossibleprocesses,includingtranscription,metabolismandresistance,photosynthesis,signaltransduction,andseedmaturation.6cDNAcloneswerefoundtoencodeproteinswithunknownfunctions.RegulationbyABAof7selectedclonesrelatingtosignaltransductionormetabolismwasconfirmedbyreversetranscriptionPCR.Inaddition,somecloneswerefurthershowntoberegulatedbyotherplantgrowthregulatorsincludingauxinandbrassinosteroid,which,however,indicatedthecomplicatedinteractionsofplanthormones.PossiblesignaltransductionpathwaysinvolvedinABAwerediscussed.

简介：FemaleinflorescenceofBetulaplatyphyllawassampledatanintervalofeachtwodaystoanalyzethebackgroundofgeneexpressioninfloralphase.OnthebasisofSMARTstrategy,thedrivercDNAwasobtainedfromtotalRNAofthelastsampleandthetestercDNAwasfromthatoftheothersbyRT-PCRwhichweresubsequentlyusedtoconstructasubtractedcDNAlibrary.TheresultoftheESTs(expressionsequencetags)blastXshowedthatthegenesinthesubtractedcDNAlibrarycouldbemainlyclusteredinto5groupsrelatedtometabolism,transportationandsignaltransduction,cellcycle,stressresponse,andregulation.Therelationshipbetweengeneexpressionanddevelopmentwasalsodiscussed.

简介：Objective:Toclonemultidrugresistance(MDR)relatedgenesinlungadenocarcinomacelllines.Methods:ThedifferentiallyexpressedcDNAfragmentsbetweenA549andA549DDPcellswereanalyzedbymRNAdifferentialdisplayPCR(DDRT-PCR).ThefragmentsthusobtainedwerefurtheranalyzedbyDNAsequencingandNorthernblotting.Results:ThreedifferentiallyexpressedcDNAfragmentswereobtainedandconfirmedbyNorthernblot.Sequenceanalysisrevealedthattwoofthemwerenovelandonewas100%identicalwithICEgene.Conclusion:AnalyzingdifferentiallyexpressedfragmentbetweenA549andA549DDPcellsmaybehelpfulforfindingnewMDRrelatedgenes.ThedrugresistanceofA549DDPcellsmayberelatedtotheinhibitionordown-regulationofICEgene.

简介：目的：克隆COPS3基因cDNA,构建其原核融合蛋白表达载体并表达和鉴定。方法：从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得COPS3基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定。将COPS3基因插入pET28a融合蛋白表达载体中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析。免疫印迹法鉴定COPS3蛋白的表达。结果：cDNA测序证明,获得了COPS3基因cDNA,其序列与Genebank中报道序列完全一致。酶切分析表明,成功构建了含COPS3基因的pET28a融合蛋白表达载体。SDS-PAGE以及免疫印迹法鉴定分析表明,COPS3蛋白获得高效表达,分子质量为51Ku,表达量约占菌体总蛋白的30%。结论：成功克隆和表达了COPS3cDNA。

简介：摘要锚杆是地下工程中常用的支护材料，但是目前而言能够精确监测锚杆工况的装置并不多，本论文探讨一种全长锚固锚杆的工况监测装置。该装置通过测定锚杆杆体应力状态，根据mises准则，准确判定锚杆工况。

简介：一、全面推进运输安全的法制化建设。（一）增强法制观念，贯彻执行《安全生产法》实践证明：铁路安全工作走向法制化管理轨道，是实现安全长治久安的根本途径。实现法制化管理，对于落实安全管理责权、规范安全管理行为、强化安全监督工作，具有决定性的作用。我们要以实施《安全生产法》为契机，大力推进铁路安全法制化建设，做到依法生产经营，依法规范安全管理，依法履行安全监督职能，教育广大干部职工依法维护自己在安全生产方面的权利，履行应尽的义务。

简介：TherootofPanaxginsengplantundergoesaspecificdevelopmentalprocesstobecomeabiosynthesisandaccumulationtissueforginsenosides.Toidentifyandanalyzegenesinvolvedinthebiosynthesisofginsenoside,weconstructedandcharacterizedafull-lengthcDNAlibraryfor6-year-oldNorthAmericanginseng.ThetiterofprimarycDNAlibraryis1.2×106pfu/mL,thetiterofamplifiedlibraryis2.6×1010pfu/mLandtherateofrecombinantisabove86%.Theinsertsizerangesfrom0.3to2.0kb.Sequencingresultsshowthat18of58genesarehighhomologoustothegenes(GBR5,GBR3andGBR1)knowninGenBank,whichareinvolvedinbiosynthesisofginsenosideinNorthAmericanginsengplant;16of58genesarenovelgenes.Thefull-lengthcDNAlibraryofNorthAmericanginsengroottissuesisessentialforthecloningofgenesknownanditisalsoaninitialkeyforthescreeningandcloningofnewgenes.

简介：Objective:Toanalyzethechangesofgeneexpressioninphenylbutyrateinduceddifferentiationofgliomacells.Methods:Theexpressionlevelsof14000genesingliomacellsbeforeandafterinducementwithsodiumphenyl-butyratefor2hor6dayswereevaluatedbycDNAarraytechniqueandprovedbymulti-dotblotting.Results:expressionof98genesingliomacellsshowedchangesaftertheinducement.Somegenesinvolvedintranscriptionandtranslationandsomeoncogenesaredown-regulated,whilesomegeneinvolvedindifferentiationorapoptosisareup-regulated.18unknownexpressionsequencingtag(EST)changedtoo.Conclusion:Ageneexpressionprofileassociatedwithdifferentiationofgliomacellswasestablished.

简介：Throughexploitingthehighhomologyofcerealcropgenes,membranouscDNAmicroarrayscontaining3311uniquericetranscripts(including1639cndosperm-derivedtranscriptsand1672maturestem-derivedtranscripts)wereusedformonitoringtheexpressionprofilesofl-leafstageseedlingsof4cerealcropspecies:rice,maize,sorghumandbarley.Afterhybridizingwith[P]labeledprobes,73.6%ofthearrayedgenesgeneratedreliablesignalsinallofthefourcerealcrops.Furtheranalysisrevealedthatamongthearrayedgenes,ahigherpercentageoftheendosperm-derivedtranscripts(86.6%)expressedthanthatofthematurestem-derivedgenes(60.9%),indicatingthatmostoftheendospermexpressedgenesfunctionedinyoungseedlingswhilcconsiderableamountofmaturestemtissueexpressedgenesdidnotexpress.Theseresultsalsoinferredthatsomegenesmightfunctiononlyatcertaindevelopmentalstages.Bycomparingtheobtainedprofdes,84geneswereidentifiedconstantlyexpressedinallthefourcerealcrops.Manyhousekeepinggenes,suchaspolyubiquitin,ubiquitinconjugatingenzymeandribosomalproteinswereincludedinthiscatalogue.Theexperimentalsoidentified14riceseedlingspecificallyexpressedgenes,including3bioticandabioticstressinducedgenesand1apoptosissuppressorencodinggeneBaxinhibitor-1.Thisinvestigationprovidedinvaluableinformationforcomparativegenomicsofgramineaemembers.

简介：Twostarch-branchingenzyme(SBE)inrice,isknowntobeakeyenzymeinamylopectinbiosynthesis.ThecDNAoftwoSBE(starch-branchingenzyme)genesSheIandShedencodingSBEⅠandSBEⅢ(twomajorisoformsinrice)wereclonedbyanimprovedRT-PCRtechnique,fromatemplatecDNAlibray,derivedfromthetotalmRNAsextractedfromtheimmatureseedsofajaponicariceWuyunjing7.DNAsequenceanalysisshowedthatthesizeoftheclonedSheIandShedcDNAswere2490and2481bplong,respectively,includingtheirentirecodingsequences.ComparisonanalysisindicatedthatthenucleotidesequenceofShe3wasthesameasthatofshed(GenbankAccessionNo.D16201)asreportedpreviously.Therewereonlyfourbase-pairsdifference,whichresultedinchangesoftwodeducedaminoacidsbetweentheclonedShe1cDNAandthereportedshe1(GenbankAccessionNo.D11082).TheclonedSheIandShedcDNAsmakeitpossibletoimprovericestarchqualitythroughgeneticengineering.

简介：目的通过实验探索一期再造全长指的手术设计和方法.方法在6只食蟹猴上,在掌指关节处切除示指,应用带足背皮瓣和跖骨的第2足趾复合移植一期再造全长示指.结果再造12个全长指术后全部成活,后因感染仅4个再造指存活,随访12个月,存活再造指恢复大部分功能及较好的外观.结论利用带足背皮瓣和跖骨的第2足趾复合移植再造全长示指的方法可行,但需设法提高存活率.