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  • 简介:在重组人胰岛素过程中,可以利用蛋白化学物质及相应纯化工艺对其进行相应纯化,对重组人胰岛素原核表达进行有机分析,可以为相应纯化制备奠定一定合理基础.在相应下游纯化工艺中,主要使用是一种复性溶液,其中含有一定比例乙醇及谷胱甘肽.

  • 标签: 重组 人胰岛素 下游纯化 工艺
  • 简介:目的:开发一种新培养人胚胎干细胞(hESCs)包被基质,使hESCs培养更加简便。方法用甲醇固定小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)作为包被基质,人胚胎干细胞系X-01在该基质上生长,每隔5~6d传代一次,培养10代后,对人胚胎干细胞特性进行检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因表达和分化能力。结果hESCs在新基质上生长良好,经10次传代后仍能保持典型hESCs克隆形态。碱性磷酸酶染色阳性,免疫荧光染色Oct4、SSEA4、Tra-1-60为阳性,体外分化可形成拟胚体。结论此种固定基质可以大量制备,长期保存,并可以长期维持hESCs未分化状态,为人胚胎干细胞体外扩增探索出了一个新途径。

  • 标签: 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 甲醇固定 基质 MEF蛋白质复合物
  • 简介:【目的】蛋白样品制备是获得良好双向凝胶电泳(2-DE)图谱前提,建立合理西花蓟马蛋白双向电泳体系,获得分辨率较高、重复性较好图谱,能够为后续研究提供有力支撑.【方法】实验以西花蓟马成虫为实验材料,对比了饱和酚法、TCA/丙酮法和直接裂解法3种蛋白提取方法,从中选出最适宜双向电泳分析一种蛋白提取方法.【结果】3种方法蛋白提取率差异显著,直接裂解法蛋白提取率最高,饱和酚法蛋白提取率最低;3种方法SDS-PAGE条带数差异不明显;TCA/丙酮法双向凝胶图谱效果最好,蛋白点最多.【结论】TCA/丙酮法能够有效去除西花蓟马蛋白中干扰物质,是最适合西花蓟马双向凝胶电泳蛋白提取方法,为后续西花蓟马在蛋白组学方面的研究奠定了基础.

  • 标签: 西花蓟马 双向凝胶电泳 蛋白质组学 蛋白提取
  • 简介:高血压病严重危害人类健康。在我国其患病率已从1959:5.11%-1979:7.73%-1991:11.9%、2001年:12.38%。据2004年统计,我国18岁及18岁以上高血压患病率已高达18.8%。与1991年相比,患病率上升了31%。即,当今我国每百个成年人中就有19人患有不同程度高血压。而目前,每年还以300万新增病例俱增。在我国至少有1亿6千万高血压患者,比1991年增加7000多万。而在世界范围内,大约有10亿人患高血压。数目惊人!

  • 标签: 高血压患者 危害 定义 组数 患病率 人类健康
  • 简介:荧光定量PCR(qRT-PCR)是研究分子生物学中基因表达一种新型核酸定量技术,具备快速高效、特异性强、重复性好、灵敏度高和自动化程度高等优点,因而根据相应实验材料选择适宜内参基因对于提高qRT-PCR分析准确性显得尤为重要。Actin基因表达范围广且表达稳定,常常作为内参基因应用于qRT-PCR表达分析中。前期利用转录组测序(RNA-seq)技术获得了西葫芦低温弱光转录组数据库,本研究从中筛选到1条长达2543bpcDNA,并对其进行了序列分析。生物信息学分析结果表明,该序列包含1个开放读码框(ORF),大小为2064bp,预测编码氨基酸数为682个,理论分子大小约为79.67kD,蛋白质等电点为6.28。WolfPsort分析发现,CpActin蛋白亚细胞定位于细胞核中。MotifScan分析显示,CpActin蛋白质氨基酸序列207~406位和558~682位分别为Actin中端和C端保守区域。同源性分析表明,基因编码蛋白质与同为南瓜属中国南瓜和印度南瓜同源蛋白相似性达到99%,具有高度保守性。基于所获得基因全长cDNA序列,设计了基因ORF全长引物对CpActin-F、CpActin-R,经PCR扩增得到一条特异、明亮条带,经测序验证,序列与RNAseq数据库cDNA序列一致,基因命名为CpActin,GenBank登录号为MH211008。在此基础上,设计了一对荧光定量PCR引物CpActin-Fq、CpActin-Rq,分析显示,该引物具有较高特异性和扩增效率,且在西葫芦不同组织(根、茎、花和果)和不同胁迫处理[正常(25℃,300μmol/m^2·s)、低温处理(4℃,300μmol/m^2·s)、弱光处理(25℃,80μmol/m^2·s)、低温弱光处理(4℃,80μmol/m^2·s)、强光处理(25℃,2000μmol/m^2·s)和高温处理(38℃,300μmol/m^2·s)]叶片中均能稳定表达,适合在西葫芦基因qRT-PCR表达分析研究中作为候选内参基因。

  • 标签: 西葫芦 内参基因 CpActin 表达分析
  • 简介:目的构建稳定过表达miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31表达变化情况并对在体miR-31过表达应用提供合格工具鼠。方法使用Gatewaycloning技术构建miR-31过表达载体,使用DNA显微注射技术将构建好载体注入受精卵内,随后转移至假孕母鼠内,待其自然生产。将新生小鼠提取尾部DNA,PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠,筛选阳性小鼠并饲养繁殖。另取阳性小鼠,提取主要组织器官miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31表达量。同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin表达和神经干细胞数量。结果成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上。各主要组织器官miR-31表达均升高且稳定表达。阳性小鼠Nestin表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠。结论通过使用Gatewaycloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,且在各代小鼠中miR-31表达稳定,神经系统内神经干细胞数量多于野生型小鼠,可为进一步研究miR-31过表达后在体内功能和神经系统疾病治疗提供良好工具小鼠。

  • 标签: MiR-31 转基因 FVB小鼠
  • 简介:目的研究昼夜节律改变对视网膜感光视蛋白melanopsin表达影响。方法出生14d(P14)C57BL/6J小鼠随机分为实验组和正常对照组,实验组每天给予24h持续光照,对照组模拟正常昼夜节律每天给予12h光照、12h黑暗环境,运用免疫荧光染色结合RT-PCR技术,分别检测实验组和对照组小鼠在光照1周后和8周后视网膜感光视蛋白melanopsin表达情况。结果免疫荧光染色结果显示感光视蛋白melanopsin主要位于视网膜神经节细胞层,少部分位于内核层。小鼠光照1周后melanopsin阳性细胞表达数目实验组少于对照组;RT-PCR结果示小鼠光照1周和8周时melanopsinmRNA含量实验组均少于各自对照组,两者具有统计学意义(P〈0.01)。结论持续光照可以减少视网膜感光视蛋白melanopsin表达,提示melanopsin阳性神经节细胞为光敏感性细胞,其表达可能对维持正常昼夜节律有重要作用。

  • 标签: 昼夜节律 视网膜神经节细胞 光感受作用 MELANOPSIN 小鼠
  • 简介:高校实验室建设与管理工作离不开一支高素质、善管理、懂技术、乐于奉献、勇于创新实验技术队伍。重视实验技术队伍建设,提高实验技术人员整体素质,是搞好高校实验室建设关键。

  • 标签: 高校 实验室建设 实验技术队伍建设 中国 素质培养 政策
  • 简介:目的:筛选和鉴定同源盒基因A10编码蛋白(HOXA10)靶调节基因。方法:以人子宫内膜细胞系AN3CA为实验对象,采用染色质免疫沉淀方法筛选HOXA10靶基因;采用平端克隆方法构建HOXA10靶基因库;采用DNA序列分析结合生物信息学方法鉴定HOXA10靶基因。结果:共获得含有HOXA10结合片段克隆197个,选取插入片段大于100bp质粒67个进行DNA序列分析,其中含有HOXA10结合序列TTAT基因16个。结论:初步筛选出16个HOXA10候选靶基因,为进一步研究HOXA10基因调节机理提供了新思路。

  • 标签: 同源盒基因A10 靶基因 染色质免疫沉淀技术
  • 简介:利用已克隆植物R基因NBS序列中保守基序设计简并引物进行PCR扩增是克隆NBS有效方法。从广东普通野生稻HLW028中克隆出3条序列,经同源性分析均为NBS,序列号为DQ272573~DQ272575。从NCBI中下载普通野生水稻和功能已知水稻NBS—LRR类基因,与本试验所提交NBS进行聚类分析。这些NBS可分为5大类,其中DQ272574是一个新NBS基因类型。从野生水稻中克隆NBS基因存在P—loop、RNBS。A、kin-2、RNBS.B、RNBS—C和PLAL基序。RT—PCR结果表明,培矮64中Pikh表达量比2种野生稻中高。从培矮64中扩增出1个完整读码框cDNA。

  • 标签: NBS.LRR 普通野生水稻 聚类分析 表达
  • 简介:目的:构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α(EF-1α),测定其对体外蛋白翻译影响。方法:通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出蛋白含量。结果:测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增EF-1α-Flag基因序列正确,所构建重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白翻译。结论:从哺乳动物细胞中纯化EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α功能奠定了基础。

  • 标签: 延伸因子1α Flag肽置换 蛋白翻译
  • 简介:目的评价肝移植术后曲霉气道定植及其发生侵袭性感染风险。方法回顾2003—2004年南京八一医院和上海长征医院56例肝移植患者进行连续组织学检查和曲霉培养结果。结果24例患者被分离出曲霉,2例发生侵袭性烟曲霉感染。这2例患者在移植后6个月内都有烟曲霉定植,并且都死亡,占所有移植后死亡29%。无曲霉定植者都未发生侵袭性曲霉感染。结论肝移植术后侵袭性曲霉感染较为少见,但常致死,曲霉定植常见但为一过性,由于气管侵袭性曲霉感染只发生在有烟曲霉定植移植后6个月内患者,所以在此期间进行预防性治疗能否有效降低侵袭性曲霉感染值得研究。

  • 标签: 肝移植 曲霉定植 真菌培养
  • 简介:α7nAChR是配体门控离子通道蛋白超家族典型代表,烟碱型乙酰胆碱受体一个重要亚型,是复杂五聚体跨膜蛋白,介导Na^+、Ca^2+流入,K^+流出,尤以对Ca^2+通透性高。α7nAChR分布广泛且功能多样,不仅分布于中枢和外周神经系统,介导神经元快速突触传递,其在许多非神经元细胞和组织中亦有表达,包括内皮细胞,支气管上皮细胞,皮肤角蛋白细胞,膀胱上皮细胞,血管平滑肌等,并参与其功能调节及功能障碍相关疾病病理生理过程,如可调节细胞质运动和细胞间黏附,细胞增殖,血管生成以及肿瘤侵袭和迁移。本文主要介绍烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型在不同胚层来源上皮组织细胞中表达及其功能特征,以期通过激活或抑制α7nAChR表达来降低与其密切相关疾病发生率。

  • 标签: 非神经性胆碱能系统 烟碱型乙酰胆碱受体 α7 NACHR 上皮细胞 功能特征
  • 简介:以11个转外源基因(Cry1Ac+API-B)系为材料,受体亲本陆地棉品种鄂抗9号为对照,研究其在抗棉铃虫性、产量和纤维品质性状上差异。结果表明:11个转基因系抗棉铃虫效果明显,达到中抗和高抗水平;转基因系及其受体、转基因系之间在单铃重等10个性状上均存在极显著性差异;和受体亲本相比,各个转基因系变异方向比较一致性状有:衣指、衣分降低;而株高、单株结铃数、单铃重、子指、皮棉产量、纤维长度、断裂比强度、马克隆值、伸长率等性状变化方向不定。

  • 标签: 棉花 抗虫性 遗传变异 CrylAc+API-B
  • 简介:瓜实蝇BactroceracucurbitaeCoquillett是世界上重要检疫性害虫,通过在14、18、22、26、30、34℃温度下孵化和饲养实验,测定该虫卵、幼虫、蛹、产卵前期、世代发育起点温度和有效积温分别是8.0982℃、4.5245℃、4.5245℃、7.4751℃、10.0019℃和28.8506、162.7462、145.7249、166.5126、503.8343日度。根据该虫致死温度和有效积温模型,运用数学分析和地理信息系统技术,预测了瓜实蝇在中国适生区和年发生代数,结果表明:该虫可在中国48.96%地区发生(气象站点所代表地区),1年发生2-12代,以4~6代为主。

  • 标签: 瓜实蝇 有效积温 适生性 年发生代数
  • 简介:目的探讨Fonsecaeamonophora黑素理化性质及其合成途径。方法通过化学分析、紫外光谱、红外光谱和电子顺磁共振波谱等明确F.monophora黑素理化性质;通过比对F.monophora菌株在基础培养基(马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基、L-DOPAPDA培养基)和含黑素抑制剂培养基(DOPA黑素抑制剂培养基、DHN黑素抑制剂培养基)菌落生长情况,采用BioTek酶标仪EON定量分析其黑素合成,以明确F.monophora黑素合成途径。结果F.monophora黑素与合成L-DOPA黑素理化性质相似;菌株在含L-DOPA培养基较PDA培养基产生更多黑素,且在含DOPA黑素抑制剂叠氮化钠及DHN黑素抑制剂苯肽、三环唑培养基中其黑素合成均明显降低。结论F.monophora黑素主要为LDOPA黑素,可能共同存在DOPA黑素和DHN黑素合成途径。

  • 标签: Fonsecaea monophora 黑素 理化性质 合成途径
  • 简介:采用多样性指数分析了102份山东水稻地方品种抽穗期、株高、穗长等13个农艺性状和蛋白质含量、直链淀粉含量、胶稠度及RVA谱特征值等12个品质性状多样性。结果表明,山东地方水稻品种农艺性状存在较高多样性,多样性指数(H')范围为1.42~2.05,株高、穗颈长、每穗粒数多样性指数较高,分别为2.01、2.02、2.05;品质性状多样性指数范围为0.99~2.04,其中蛋白质含量、胶稠度、最高粘度、热浆粘度、崩解值多样性指数分别为2.00、2.04、2.04、2.01、2.04。结果表明,山东地方水稻农艺性状与品质性状存在较为广泛多样性,可为山东地方水稻品种有效利用提供依据。

  • 标签: 水稻 地方品种 农艺性状 品质性状 RVA谱 多样性指数
  • 简介:【背景】白花鬼针草为农区恶性杂草,原产于美洲,现已广泛分布于世界热带及亚热带地区,但其在全球和中国适生区域及适生等级还不明确.【方法】利用MaxEnt生态位模型对白花鬼针草在全球以及中国潜在适生区进行预测.【结果】白花鬼针草在全球分布更多受到温度因素影响.白花鬼针草适生区主要集中在北半球和南半球15°-30°之间热带和亚热带地区.其中,北美南部、南美中南部、非洲南部、东南亚北部以及大洋洲中南部沿海地区为白花鬼针草中、高度适生区.白花鬼针草在中国适生区主要位于广东、广西、海南、云南、福建、台湾.到2070年,白花鬼针草在全球适生区面积与当前相似,但在中国适生区有所增大.【结论】白花鬼针草在我国有进一步扩张风险.

  • 标签: MAXENT 白花鬼针草 潜在分布区 预测
  • 简介:用于防治器官移植排斥反应药物CsA发挥作用必须由体内受体蛋白亲环素(CyP)来介导。CyP是一个功能相关蛋白家族,具有肽基脯氨酸顺/反异构酶(PPIase)活性,能催化细胞内蛋白质折叠、装配和运输。CyP自身抗体与某些自身免疫病也有关系。亲环素A(CyPA)是免疫抑制剂CsA在体内主要受体蛋白。本研究对CyPA基因进行了克隆和序列测定,并构建了表达载体,在大肠杆菌中获得高水平表

  • 标签: 亲环素A 肠杆菌 基因的克隆 肽基脯氨酸顺 自身免疫病 表达载体
  • 简介:目的寻找能调节T细胞功能相关分子,进行与T细胞介导自身免疫性疾病相关研究。方法从BALB/c小鼠骨髓中收集树突状细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系。筛选得到很多株能调节T细胞功能杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖杂交瘤细胞系进行了进一步深入研究。结果显示其目标分子是CD45,同时增殖实验结果显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应。结论抗CD45单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导自身免疫性疾病相关预防及治疗中。

  • 标签: CD45 单克隆抗体 抑制 T细胞增殖 树突状细胞 小鼠