克班宁溶液和脂质体急性毒性研究

克班宁溶液和脂质体急性毒性研究

陈玲玲马云淑（通讯作者）

陈玲玲马云淑（通讯作者）

(保山中医药高等专科学校678000)

【摘要】目的：探讨克班宁溶液和脂质体对小鼠急性毒性的影响。方法：观察小鼠给药后的毒性反应，并计算半数致死量(LD50)。结果：克班宁溶液小鼠腹腔注射、灌胃和克班宁脂质体小鼠静脉注射LD50分别为30.058mg/kg，49.936mg/kg，LD50=16.085mg/kg。结论：改变给药途径或制成脂质体静注，均可以明显增加LD50，降低毒性。

【关键词】克班宁脂质体急性毒性半数致死量LD50

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）11-0257-02

克班宁（Crebanine,Cre）是一种异喹啉类阿朴菲型生物碱，主要存在于防己科千金藤属（Stephania）植物中[1，2]。本课题组前期药理学实验表明克班宁（5mg/kg与2.5mg/kg）具有良好的抗实验动物心律失常活性。但其静脉注射的半数致死量（LD50）为9.382mg/kg，静注LD50的95％可信限为8.314～10.600mg/kg[3]；且盐酸克班宁注射液及盐酸克班宁毫微粒的LD50分别为9.382mg/kg[4]和9.984mg/kg[5]。由于克班宁治疗指数较小，有较大的毒性且不够稳定，因而限制了其开发应用。

脂质体(1iposomes)是一种类似于生物膜结构的双分子层微小囊泡，可以包裹水溶性和脂溶性药物，主要材料是磷脂和胆固醇。脂质体作为药物载体能降低药物的毒性，同时也是一种很有临床应用价值的新剂型[6]。利用脂质体这一特点，课题组研究了克班宁脂质体最佳处方工艺，制作了合格的克班宁脂质体。

本文对克班宁溶液和其脂质体进行急性毒性研究，为进一步其开发利用和新药研究打下基础。

1材料

1.1药品与试剂

克班宁（Crebanine,Cre)实验室自制，纯度98.7%；氯化钡（BaCl2，AR，北京化工厂生产）；水合氯醛（AR天津科密欧化学试剂有限公司，批号20100430）；无菌生理盐水（昆明市宇斯药业有限责任公司，批号13022201）；克班宁脂质体（实验室自制，包封率81.15％）。注射器（湖南平安医疗器械有限公司）。注射器（湖南平安医疗器械有限公司）。

1.2实验动物

小鼠，雌雄各半，体重18-22g（四川简阳实验动物中心生产许可证：scxk（川）200824，合格证号：0017193，批号：0017193），饲养于云南中医学院实验动物室。

1.3实验仪器

2方法

2.1克班宁溶液的配制

精密称取克班宁结晶体125mg，用生理盐水溶解，用10%的HCL调PH4-6，超声30分钟使其完全溶解，配置成浓度为2.5mg/ml的Cre溶液。

2.2LD50(半数致死量)的测定

2.2.1预实验

将12只小鼠（雌雄各半）随机分成3组，组间给药剂量比值1:0.8，找出引起小鼠0%（Dn）和100%（Dm）死亡的剂量，观察并记录给药后小鼠出现的现象。

2.2.2正式实验

以预试实验测得的Dn和Dm为参照，组间比值为1:0.8-1：0.9来设置6-7个剂量组，每组10只（给药前禁食不禁水12小时）。腹腔按50mg/kg（最大剂量）、灌胃按80mg/kg（最大剂量）克班宁溶液，静脉注射按21.6mg/kg（最大剂量）给药剂量给予克班宁脂质体给药，并记录给药后密切观察动物的各种反应及死亡时间及死亡数。

2.2.3LD50计算

用Bliss法求出半数致死量（LD50）。

3结果

3.1克班宁溶液小鼠腹腔注射LD50

小鼠腹腔注射几分钟后，出现心动过速，跳跃、竖尾和惊厥、全身僵直，甚至小便失禁，个别出现口腔出血。Dn=24mg/kg，Dm=50mg/kg。回归方程y(Probit)=-18.694+16.031Log(D)；半数致死量LD50=30.058mg/kg，LD50(Feiller校正)95%的可信限=27.315-32.534mg/kg，LD5=23.733mg/kg，LD95=38.069mg/kg。结果见表1。

表1克班宁对小鼠腹腔注射剂量与死亡率表

4讨论

克班宁小鼠灌胃、腹腔注射半数致死量LD50分比为49.936mg/kg、30.058mg/kg；克班宁脂质体静脉注射的LD50为16.085mg/kg；和课题组［3］前期已进行的克班宁溶液静脉注射半数致死量LD509.382mg/kg相比较安全指数大大提高，可见改变给药途径或制成脂质体静注，均可以明显增加LD50，降低毒性。

参考文献

[1]马云淑,方波,张壮丽.云南含克班宁的千金藤属植物资源调查研究[J]云南中医学院学报,2005,(01)

[2]张壮丽,马云淑克班宁的研究进展(云南中医学院学报2003)

[3]马云淑,商庆节.克班宁注射剂的非临床药物动力学研究[J]云南中医学院学报,2006

[4]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第三十卷第一分册)[M].北京:科学出版社,1996.40-70.

[5]王宪楷,赵同芳.千金藤属植物中的生物碱[J].华西药学杂志,1990,5(1):39-43.

基金项目:国家自然科学基金项目“山乌龟亚属中阿朴菲类生物碱抗心律失常构效关系及给药系统减毒研究”(NO：81260651，2012.1-2015.12)