复明片对兔糖尿病性白内障血清及晶状体中MDA含量和SOD活性影响的研究

复明片对兔糖尿病性白内障血清及晶状体中MDA含量和SOD活性影响的研究

丁文君郭媛曹野唐树玲刘利利彭声援

丁文君郭媛曹野唐树玲刘利利彭声援(徐州市第六人民医院眼科221006)

【摘要】目的研究复明片对白内障兔血清及晶状体中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。方法采用硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法对模型组、治疗组及对照组兔血清及晶状体中MDA含量和SOD活性进行检测。结果1.治疗组Ⅰ、治疗组Ⅱ血清中MDA含量明显低于模型组,差异具有显著性(P<0.01),治疗组Ⅱ血清中MDA含量明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。2.治疗组Ⅰ、模型组血清中SOD活性均明显低于对照组,差异具有显著性(P<0.05,P<0.01,治疗组Ⅱ血清中SOD活性明显高于模型组,差异具有显著性(P<0.05)。3.晶状体中MDA含量差异无显著性(P>0.05)。4.治疗组Ⅰ、治疗组Ⅱ晶状体中SOD活性明显高于模型组,差异具有显著性(P<0.05)。结论复明片有明显降低白内障兔血清中MDA含量,且能明显升高白内障兔血清及晶状体中SOD活性。

【关键词】丙二醛超氧化物歧化酶复明片白内障晶状体

复明片由槟榔、车前子、地黄、茯苓、枸杞子、谷精草、关木通、黄连、蒺藜、菊花、决明子、羚羊角、牡丹皮、木贼、女贞子、人参、山药、山茱萸、石斛、石决明、熟地黄、菟丝子、夏枯草、泽泻24味中药组成,具有滋阴补肾，清肝明目的功能，对于肝肾两亏，阴虚火旺导致的内障目暗和视物昏花具有良好的功效。本文通过生物化学的方法研究并阐明复明片对白内障兔血清及晶状体中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)的活性变化。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试剂及复明片溶液的配制①四氧嘧啶溶液：将四氧嘧啶用生理盐水稀释成质量分数为2.5%的溶液，用0.22um纤维素膜滤过以达除菌效果，实验前新鲜配制；②复明片溶液：取复明片溶于蒸馏水中，配制质量浓度为50mg/ml及100mg/ml的复明片混浊液置4℃冰箱保存备用。

1.1.2主要仪器及材料四氧嘧啶（美国Sigma公司），复明片（西安碑林药业股份有限公司），血糖分析仪（美国强生公司），血糖试纸（美国强生稳豪公司），长效胰岛素注射液（甘精胰岛素注射液，Sanofi-AventisDeutschlandGmbH，Germany），丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(上海生物制品研究所)，CT-2300型紫外可见分光光度计(安徽皖仪科技有限公司)，数显恒温三用水箱(广东东莞捷程仪器设备有限公司)，微量移液器(北京青云卓立精密设备有限公司)，BQ900裂隙灯显微镜(重庆康华瑞明科技股份有限公司)。

1.2方法

1.2.1糖尿病兔模型的建立将配制完毕的四氧嘧啶溶液按90mg/kg的计量，一次性从新西兰大白兔耳缘静脉推注，监测临时血糖浓度，当血糖持续两周维持在大于12mmol/L的高血糖水平，为建模成功。

1.2.2兔晶状体混浊程度的观察复方托吡卡胺滴眼液点双眼1次,10s后将兔置入乙醚蒸汽罐，使之吸入乙醚蒸汽而麻醉,使用BQ900裂隙灯显微镜观察晶状体,每周根据晶状体混浊程度进行分级,分级标准按照牛津大学眼科实验室晶状体分级方法进行[1],标准如下:0级为透明晶状体;Ⅰ级为轻度混浊,晶状体周边可以发现空泡;Ⅱ级为中度混浊,晶状体周边的空泡向中心扩散,核出现雾状混浊;Ⅲ级为高度混浊,空泡扩散到核区,核区雾状混浊的程度加重;Ⅳ级为核完全混浊并发展为成熟白内障。

1.2.3兔血清和晶状体生化指标的测定实验结束时,用空气栓塞法处死各组实验大白兔,收集血液于离心管内,将离心管放置数小时待血液凝固,然后以3000r/min离心6min分离血清待测MDA含量和SOD活性。小心剥离晶状体，称取双眼球晶状体放入10ml匀浆杯内,按比例加进8.6g/L冰生理盐水，用控温多用高速组织捣碎机以10000r/min捣碎2min制成3.5%晶状体匀浆,后以2000r/min低速离心10min,分离上清液待测MDA含量和SOD活性。取血清80μl和晶状体匀浆上清液80μl检测MDA的含量,取血清40μl和晶状体匀浆上清液40μl检测SOD的活性,具体操作按MDA和SOD测试盒说明书进行操作。用CT-2300型紫外可见分光光度计进行比色测定。

1.2.4统计学处理各组所有实验数据采用均数±标准差（x-±s）表示,组间比较用t检验。P<0.05表示差异具有显著性。

2结果

兔血清及晶状体中MDA含量和SOD活性的比较(-x±s)

与对照组比较，ΔΔP<0.05,#P<0.05,与模型组比较，ΔP<0.01，ΔΔP<0.01，#P<0.05，*P<0.05，**P<0.05。

3讨论

许多研究已经证实，白内障的首要危险因素是氧自由基的损伤，其发生的产生机制为由于晶状体内的自由基浓度超出了自身的抗氧化能力[2]。较典型的H2O2可以通过一系列的转化而分解为化学性质活泼的OH-和O2-自由基，其对细胞质膜和核酸都具有较大的破坏作用[3]。高血糖作用下的兔处于氧化应激状态，早期血清中的转化生长因子、自由基及其中间产物等升高明显，虹膜血管内皮层水肿较正常血糖者明显，血管壁抵抗力降低，血管脆性增加，手术等创伤更易引起其血—房水屏障的损伤，从而加快了白内障的进程[4]。本文通过对脂质过氧化物的降解产物MDA含量的检测发现,治疗组Ⅱ血清中MDA含量明显低于对照组(P<0.05),治疗组Ⅰ、治疗组Ⅱ血清中MDA明显低于模型组(P<0.01)。而晶状体中MDA含量差异无显著性(P>0.05)。MDA是脂质过氧化物的最终降解产物,可以通过对细胞膜的破坏来使细胞发生肿胀，最后发生坏死[5]，这说明利用复明片治疗白内障兔血清及晶状体中MDA含量的高低可反映机体内脂质过氧化的反应程度。机体一方面通过酶系统反应与非酶系统反应产生活性自由基,另一方面又有一系列有效的抗氧化防御系统,如:SOD、谷胱甘肽过氧化物酶、维生素A、E、C、谷胱甘肽等,生成和清除的同步性使氧自由基达到了动态平衡[6]。

SOD在视网膜抗氧化系统中发挥重要作用,它在机体内将超氧阴离子歧化生成过氧化氢，这是氧自由基对机体损伤的首道防线[7]。本文通过对SOD活性的检测发现,治疗组Ⅱ血清中SOD活性明显高于模型组,差异有显著性(P<0.05)。治疗组Ⅰ、模型组血清中SOD活性均明显低于对照组,差异具有显著性(P<0.05,P<0.01),治疗组Ⅰ、治疗组Ⅱ晶状体中SOD活性明显高于模型组差异有显著性(P<0.05)。复明片主要单味药为人参、枸杞子、茯苓，人参其含人参皂苷，蛋白质合成促进因子，多种维生素及微量元素。枸杞子其含枸杞多粮，胡萝卜素，谷甾醇。茯苓其含茯苓聚糖，三萜羧酸茯苓酸，卵磷脂。它们都能够阻断自由基对眼晶状体氧化损伤，抑制老年早期白内障的形成[8]。复明片治疗白内障的作用机制还能够从多方面进行实验探究,例如对脂类过氧化的作用,对晶体上皮细胞的保护等，有待于进一步研究探索。

参考文献

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[4]黄煜，郭海科，孟倩丽，等.氧化应激机制在眼科疾病研究中的新进展[J].眼科新进展,2012,32(1):91-94.

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[7]王存波，柳旭丽，碱性成纤维细胞生长因子对大鼠视网膜挫伤治疗作用的实验研究[J].中国中医药咨询,2011；2（3）：1-2.

[8]郭小兰，门永锋.复明片治疗初发期老年性白内障的临床观察[J].内蒙古中医药,2010；29（13）：62.