降压片质量标准的修订

降压片质量标准的修订

冯菲

冯菲(河南中医学院第一附属医院药学部,河南郑州450000)

【摘要】目的：修订降压片的质量标准。方法：釆用TLC法对降压片中龙胆、当归进行定性分析。另采用HPLC法测定降压片中大黄素、大黄酚的含量。结果：在TLC色谱中检岀龙胆、当归；大黄素线性范围为0.01112-0.0556μg，r=0.9996；大黄酚线性范围为0.02224-0.1112μg，r=0.9996。平均回收率为101.7%，RSD为1.82%。结论：所俢订的方法简便可行，重现性好，可有效地用于降压片的质量控制。

【关键词】降压片；薄层色谱法；高效液相色谱法【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-7165（2015）19-0450-02

降压片是由龙胆、大黄、当归等中药材组成，具有清肝泻火、利湿化痰、健脾益气、养阴熄风的功效。原质量标准对方中君药大黄中的大黄素只进行了薄层色谱定性，为进一步保证用药安全有效，我们采用HPLC法对降压片中大黄素、大黄酚进行含量测定，并对方中龙胆、当归进行了TLC鉴别。

1材料岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪。龙胆苦苷对照品（批号110770-201013）、大黄素对照品（批号110756-200110）、大黄酚对照品（批号110796-201017）及当归对照药材均由中国食品药品检定研究院提供。降压片（河南省中医药研究院奥林特制药厂，批号20130302，20131016，20131210）。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层色谱鉴别2.1.1龙胆薄层鉴别取本品10片，除去包衣，研细，加正己烷20ml，水浴上回流1小时滤过，残渣加丙酮20ml，水浴上回流30分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇20ml，浸渍12小时，滤过，滤液浓缩至2ml，加在中性氧化铝柱（120目，10g，内径10mm）上，用甲醇洗脱至无色，洗脱液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成毎1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010年一部附录VIB试验，吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿－甲醇－水（20﹕2﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。供试液色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点。另按工艺制备缺龙胆本品，同法制成缺龙胆阴性对照液，同时层析，色谱中无上述斑点检岀。

2.1.2当归薄层鉴别取本品20片，除去包衣，研细，置烧瓶中，加水150ml，接挥发油提取器，侧管中加少量水及2ml醋酸乙醋，加热回流提取30分钟，放冷，分取醋酸乙酯层，作为供试液。另取当归对照药材1g，加乙醚20ml浸渍过液，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，制成对照药材溶液，照薄层色谱法《中国药典》2010年版及附录VIB试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于硅胶G薄层板上，以苯－醋酸乙酯（9﹕1）为展开剂，展开，取岀，晾干，置紫外灯UV365nm检视。供试液色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。另按工艺制备缺当归本品，同法制成缺当归阴性对照液，同时层析，色谱中无上述斑点检岀。

2.2含量测定2.2.1色谱条件色谱柱：C/N5020-39103S/N.OJ8701-16柱（5μ）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（85﹕15）；流速1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长254nm；保留时间15min，进样量：5μl2.2.2对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品1.39mg，大黄酚对照品2.78mg置50ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀（每1ml含大黄素0.0278mg，含大黄酚0.0556mg）。精密吸取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀（每1ml含大黄素0.00556mg，含大黄酚0.01112mg），作为对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，精密称取0.25g，准确加入甲醇25ml，精密称定，加热回流30分钟，补足原重，滤过，取续滤液10ml，置50ml烧瓶中，挥干，残渣加10%HCL20ml，回流水解30分钟，迅速冷却，加氯仿25ml，回流1小时，分取氯仿层，酸水层再加氯仿25ml，回流1小时，用少量氯仿洗涤烧瓶，合并，蒸干，残渣加甲醇定容于10ml量瓶中摇匀，制成供试品溶液。

2.2.4空白对照试验按处方比例和工艺，制备缺大黄空白样品，按供试液制备方法制成空白对照液，按上述方法进行测定。结果表明，处方中其他药材及辅料对大黄测定无干扰。

2.2.5标准曲线的制备精密吸取对照品溶液2μl，4μl，5μl，6μl，8μl，10μl，按色谱条件测定。以大黄素，大黄酚的进样量为纵坐标，峰面积为横坐标，计算回归方程和相关系数，分别为Y=2.91391×10-7X+0.000845947，r=0.9996，线性范围0.01112-0.0556μg，Y=1.895×10-7X+0.00184537，r=0.9996，线性范围0.02224-0.1112μg。

2.2.6精密度试验取20130302批供试液进行精密度试验考察，吸取供试液5μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，重复进样6次，计算6次结果的大黄素RSD=1.29%，大黄酚RSD=1.08%，说明有良好的精密度。

2.2.7重现性试验取20130302批样品平行制备6份供试液，进行含量测定，结果大黄素RSD=1.21%，大黄酚RSD=1.08%，表明重现性良好。

2.2.8稳定性试验取20131016批样品，取供试品溶液，分别在0，1，2，4，8，12，24h进行测定，结果大黄素RSD=1.48%、大黄酚RSD=2.29%，表明供试品溶液在室温条件下放置24h稳定性良好。

2.2.9回收率试验取20131210批降压片除去包衣，研细，精密称取0.25g,加入大黄素，大黄酚对照品溶液（大黄素0.0232mg/ml，大黄酚0.0466mg/ml）5ml，精密加入甲醇25ml，称定，按供试液制备方法操作，定容于25ml量瓶中，制成加样供试液。精密吸取加样供试液7ul，对照品溶液（大黄素0.00556mg/ml，大黄酚0.01112mg/ml）5ul，分别按上述色谱条件测定其含量，计算加样回收率，结果大黄素平均回收率100.9%，大黄酚99.6%。

3讨论3.1降压片质量标准研究在2000年初已完成，但随着《中国药典》2010版的颁布实行，原标准中有些检验项目与新版药典的要求有一定差距，集中体现在对方中君药大黄的含量测定项上。《中国药典》2010年版（一部）大黄项下的含量测定采用高效液相色谱法测定大黄素，大黄酚含量，而原标准中仅采用薄层色谱发对大黄素进行了测定。为适应新的要求，特对降压片的质量标准中含量测定项进行相应的修改。结果表明，修改后的方法重现性好，可作为控制降压片内在质量指标。

3.2原标准中龙胆的薄层色谱是参考有关报道【１】【２】制定的，但试验中发现方中黄柏，大黄中的成分对起干扰较大，色谱不十分理想。经过文献查阅【３】，我们最后选用正己烷，丙酮除杂，上中性氧化铝小柱制备试液的方法，结果其薄层色谱较为理想。

3.3原标准中的当归的薄层鉴别是采用乙醚提取，制备供试液，其色谱中大黄蒽醌类成分斑点对当归的特征斑点干扰严重，采用本文中的供试液制备方法后，当归的薄层色谱中干扰斑点明显减少，使其更具鉴别意义。

【参考文献】[1]林明辉．药学杂志，1976；96；356[2]台宝山等．中成药研究，1986；（7）：32[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典（2010年版）一部．北京：中国医药科技出版社，2010：428．