ABO亚型血型定型方案探讨

ABO亚型血型定型方案探讨

蔡华英赖世平

（自贡市中心血站；四川自贡643000）

[摘要]目的:找到最合适的AB0亚型血型定型方法，以便正确定型。方法:对本站2016-2017年10例ABO亚型的标本采用两种不同厂家的抗血清试剂及人抗血清进行红细胞定型，自制A、B、0细胞进行血清定型，做吸收放散试验、唾液血型物质鉴定等补充试验进行验证。结果：1、10例标本中有6例标本不同厂家的抗血清与标本红细胞凝集强度不同，抗血清效价高的大于效价低的。2、10例标本血清与O细胞、自身细胞均无凝集，导致正反定型不符是由于抗原减弱或血清中出现意外抗体（抗-A1、抗-B）。结论：1、日常进行血型检测时，必须采用ABO正反定型鉴定血型，怀疑正反定型不符是由ABO亚型所致时应加做抗AB、抗H、抗A1等多种血清。2、ABO亚型鉴定应采用两种不同厂家的试剂用于验证红细胞上弱的抗原。3、必要时做吸收放散试验和唾液中血型物质检测帮助推测ABO亚型，防止亚型红细胞的漏检，确保结果的准确性。4、ABO亚型的判断应依据红细胞与抗-A、抗-A1、抗B、及抗-AB的凝集强度；红细胞上H物质活性的强弱程度；血清中是否存在抗-A1；分泌型人的唾液中A、B和H物质综合判断。

[关键词]ABO、亚型、定型

DiscussiononbloodgroupingschemeofABOsubtype

CaiHuaying,?LaiShiping,?Zigong?Blood?Center

Ziliujing?District?of?Zigong?City,?643000

[Abstract]Objective:tofindthemostappropriateABOsubtypebloodtypingmethod,inordertocorrectstereotypes.Methods:?10?cases?of?the?ABO?subtype?specimens?using?two?antisera?reagent?and?people?from?different?manufacturers?was?red?cell?shape,?made?A,?B?and?0?cells?were?serum?types,?do?absorption?elution?test,?saliva?blood?group?substance?identification?supplementary?test.Results:?1,10?samples?of?6?samples,?the?agglutination?strength?of?antiserum?from?different?manufacturers?was?different?from?that?of?specimen,?and?the?titer?of?antiserum?was?higher?than?that?of?low?titer.?2,?10?samples?of?serum?and?O?cells,?autologous?cells?are?not?agglutinate,?leading?to?positive?and?negative?stereotypes?is?due?to?antigen?weakening?or?unexpected?antibodies?in?the?serum?anti?-B).?Conclusion:?1.?When?routine?blood?group?testing,?we?must?use?ABO?positive?(anti?anti?identification?blood?type?identification,?suspected?positive?and?negative?stereotypes?inconsistent?with?ABO?subtype?is?caused?by?anti?AB,?anti?H,?anti?A1?and?other?serum.?2,?ABO?subtype?identification?should?be?used?in?two?different?manufacturers?of?reagents?to?verify?weak?antigen?on?red?blood?cells.?3,?if?necessary,?do?absorption?test?and?saliva?blood?group?substance?detection?to?help?speculate?ABO?subtype,?prevent?subtype?red?blood?cell?undetected,?ensure?the?accuracy?of?the?results.?4,?ABO?subtype?judgment?should?be?based?on?red?blood?cells?and?anti?-A,?anti?-A1,?anti?B?and?anti?AB?coagulation?erythrocyte?agglutination?intensity;?degree?of?H?activity;?the?presence?of?anti?-A1:?secreted?in?the?saliva?of?A,?B?and?H?in?serum?of?material?comprehensive?judgment

[Keywords]ABO,?subtype,?typing

ABO血型鉴定是确保临床输血安全极其重要的环节，ABO定型错误会导致溶血性输血反应，轻者可能导致无效输血，重者危及受血者的生命[1]。从近几年的献血者血型来看，ABO血型亚型是造成正反定型不符的主要原因之一，有报道由亚型造成正反定型不符达到21.74%[2]。这给血型鉴定造成干扰，增加了工作人员的难度，同时也造成了血液的浪费，因为临床上很难找到相同亚型的患者，其采集的部分成分血最终得以报废。为了能正确定型，避免因血型鉴定错误导致的输血反应发生，本文就10例ABO亚型血型结果进行分析，以便找到最适合的定型方法，报告如下。

1、材料和方法

1.1标本来源10例标本全部来自无偿献血者，均为ABO亚型血型标本，年龄18-55周岁，平均年龄41.8±9.9,无输血史。

1.2试剂

抗A、抗B标准血清（生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司）

抗A、抗B标准血清（生产厂家：北京金豪制药股份有限公司）

抗H、抗A1标准血清(生产厂家:上海血液生物医药有限责任公司)

人抗A、抗B、抗AB血清（本站自制）5%A、B、O红细胞悬液（本站自制）

1.3方法：

1.3.1血型定型实验：采用两个不同厂家的标准血清和自制的人抗血清分别与待检红细胞反应做正定型，自制的A、B、O红细胞与待检血清反应做反定型。具体操作方法见《全国临床检验规程》第4版[3]。

1.3.2吸收放散实验：用标定的抗A、抗B血清分别与等量的待检红细胞混匀，混合物4℃放置1h，离心混合物，移去上层抗血清，用冷盐水洗涤3-5次，留末次洗涤液做对照试验。取洗净的红细胞，加少量0.9%的生理盐水，56℃振荡水浴中放散10min,离心，取放散液及末次洗涤液各自分装入3支试管做好标记，分别加A、B、O细胞各1滴，观察结果。

1.3.3唾液血型物质检测：取漱口后自然分泌的唾液2ml，离心后煮沸10分钟，取上清液装入3支试管，分别加入抗-A、抗-B，抗-H血清各1滴，混匀后于室温条件下中和5min,再加入A、B、O细胞各1滴，混匀离心，观察结果。

2、结果

2.110例标本中不同厂家抗血清与待检红细胞反应强度不同，抗体效价高的抗血清凝集强度大于抗体效价低的抗血清，血清学反应格局见表1

3、讨论

3.1ABO血型系有其他血型系所没有的独特的性质，表现在：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原[4]。常规检测中，必须正反定型相符才能确定血型，这即是《临床输血技术规范》的基本要求，也是确保血型鉴定结果准确的必要条件。单独的正定或反定型都易导致血型鉴定错误，输血时还会导致严重的输血反应，正反定型结果可相互验证，易于发现和纠正血型错误，使血型鉴定结果更为准确；可以发现亚型或疾病因素导致的抗原或抗体的改变，防止某些A、B亚型的漏检。对怀疑为ABO亚型的标本做正定型时应加做抗AB、抗H、抗A1等多种血清，以便正确鉴定血型。

3.2ABO亚型实际上是A、B基因位点突变，导致合成氨基酸序列发生变异，使转移酶活性或功能改变而产生，其红细胞携带的A或B抗原数量比较少，与抗-A、抗-B的反应比较弱，一般是由正反定型不符而被发现[5]。红细胞上弱的抗原与不同效价的抗血清有不同的凝集结果：

效价低的抗血清检测不处，效价高的血清往往有很强的凝集，从而干扰血型的鉴定。从表1可见，上海厂家生产的抗血清较金豪和人抗血清与红细胞的凝集强度强，如果单看一种抗血清结果，势必会造成血型误定，如1、3号标本，仅用金豪厂家的血清，很容易将AB亚型误判为B型，该红细胞输给B型的患者，可能导致溶血性输血反应。因此，应采用两种不同厂家的试剂用于验证。

3.3从表2可见，1-5号标本红细胞经标准的抗血清吸收放散后，放散液与A、B细胞反应，结果显示有凝集，证明红细胞上有A、B抗原；6-8号标本红细胞经标准的抗血清吸收放散后，放散液与B细胞反应，结果显示有凝集，证明红细胞上有B抗原；9-10标本红细胞经标准的抗血清吸收放散后，放散液与A细胞反应，结果显示有凝集，证明红细胞上有A抗原。ABO亚型主要是由于血型基因突变引起，ABO抗原表达性弱是其主要特征，正定型出现凝集弱或不凝集，而血清中却出现了对应的弱抗-A1或抗-B,除了增加抗AB、抗H、抗A1等多种血清来区分外，同时还应进行吸收放散试验来确定受检者红细胞上的ABO抗原表达，对于分泌型的受检者还可以进行唾液血型物质检测，从而推测受检者红细胞上的抗原表达，正确进行ABO血型定型。

3.4临床ABO亚型的确认仍采用血清学方法进行区分，通常正定凝集强度应4+,反定凝集强度>2+即可以判定血型。若正定凝集强度弱于4+，反定凝集强度<2+,或存在不规则抗-A、抗-B提示可能是亚型。抗-AB与弱A、B抗原亲和力强，会产生较强反应，抗-A1用于区分A亚型，不同亚型红细胞上H物质活性的强度不同，一旦出现正反定型不符时，应采用多种血清学方法进行检测，并考虑亚型的可能。因此,ABO亚型的判断应依据红细胞与抗-A、抗-A1、抗B、及抗-A、B的凝集强度；红细胞上H物质活性的强弱程度；血清中是否存在抗-A1；分泌型人的唾液中A、B和H物质综合判断，以确保临床输血安全。

血型鉴定的正确性直接影响到输血的安全性，特别是ABO亚型，它不仅造成血型鉴定的干扰，而且影响输血相容性的检测。对于亚型患者应输注O型洗涤红细胞，AB型血浆，献血者红细胞以洗涤红细胞发往临床，血浆报废，以确保输血安全。

参考文献：

[1]范瑾,输血前不规则抗体筛查的临床意义[J].上海医药，2012，33（7）：24-25.

[2]胡晓玉，吴学忠，吕蓉等，83例疑难ABO血型鉴定及分析[J].国际检验医学杂志，2013,34(18):2396-2397.

[3]尚红，王毓三，申子瑜等主编.全国临床检验操作规程.北京：人民卫生出版社，2015；118-119.

[4]王培华，输血技术学，北京：人民卫生出版社，1998；133

[5]段福才，王明禄，周克礼，等，ABO血型B2和AB2亚型血清学特征及人群分布研究[J].中国实验血液学杂志，2010,18（5）：1331-1334.