小儿厌食脾失健运证患者D-木糖排泄率的测定

小儿厌食脾失健运证患者D-木糖排泄率的测定

刘庆1钟义华2刘兆龙1

刘庆1钟义华2刘兆龙1

（1新疆维吾尔自治区中医医院新疆乌鲁木齐830000;2新疆乌鲁木齐市中医医院新疆乌鲁木齐830000）

【摘要】目的对小儿厌食脾失健运证患者进行D-木糖醇排泄率的测定。方法将中医辨证属脾失健运证患者纳入实验，空腹口服D-木糖醇，留2小时全部尿，用比色法测定D-木糖醇排泄率。结果小儿厌食脾失健运证患者的D-木糖醇排泄率为14.11±4.07%。明显低于正常值。结论D-木糖醇排泄率可用于诊断和评价小儿厌食脾失健运证患者，是临床上具有应用价值的一个实验指标。

【关键词】脾失健运证D-木糖醇排泄率比色法

D-木糖吸收试验是通过检测小肠对木糖吸收程度来反映小肠吸收功能的一种重要方法。D-木糖口服后经空肠吸收，不能在体内代谢，迅速从肾排出［1］。本试验用比色法检测尿样中D-木糖排泄率，并对此做了系统的方法学考察。结果表明次方法简便、可靠、易于操作，适于在临床和基层单位推广使用。

1仪器与试剂

1.1仪器紫外-可见光光度计Cintra-20（澳大利亚GBC）、AG-135电子天平（瑞士：0.01mg）、AL204电子天平（梅特勒-托利多有限公司：0.1mg）、DZKW型电子恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器厂）。

1.2试药D-木糖对照品（天津市光复精细化工研究所，批号：20020611）；硫脲、冰乙酸、苯甲酸、对溴苯胺均为分析纯；水为蒸馏水。

2方法

2.1试液的制备

2.1.1D-木糖标准液的配制

（1）饱和苯甲酸溶液：称取苯甲酸0.5g溶于100ml蒸馏水中（苯甲酸溶解度：0.30g/100g）

（2）D-木糖标准液的配制：精确称取25mgD-木糖于容量瓶中，用饱和苯甲酸溶液的上清液溶解并稀释至刻度，配成浓度1mg?ml-1的溶液。

2.1.2对溴苯胺试剂配制（使用当天配制）

（1）硫脲饱和的冰乙酸：称取10g硫脲溶于100ml冰乙酸中。（硫脲溶解度：9.18g/100g）

（2）对溴苯胺试剂配制：将2g对溴苯胺溶于100ml硫脲饱和的冰乙酸上清夜［2，3］。

2.2测定方法

要求受试者于试验前一天22∶00时开始至次日晨试验结束前完全禁食（可以喝水），试验当天先排空尿，将1gD-木糖溶于200～300ml温开水中，空腹口服服下。留2小时全部尿样，测总量，取尿样30～50ml左右，将2小时尿样用蒸馏水按比例稀释。准备两个试管，标明对照管和测试管。各管加入已稀释的尿样1ml，再加入对溴苯胺试剂5ml，测定管置于70℃恒温水浴锅中保温10min，取出室温放置70min后，以对照管为空白，在520nm处测定吸光度。

2.3计算

D-木糖排泄量（mg）＝测试样浓度值×稀释倍数×2小时尿样

D-木糖排泄率＝（D-木糖排泄量/1000）×100%

3结果

3.1标准曲线的制备

分别精密量取D-木糖标准溶液0ml、0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml置10ml容量瓶，加入饱和苯甲酸溶液的上清液定容，配成浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4mg?ml-1的溶液。从6个容量瓶中分别量取D-木糖标准溶液1ml，再加入对溴苯胺试剂5ml。置于70℃恒温水浴锅中保温10min，取出室温放置70min后，以0号为空白，立即照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录VA），在520nm波长处测定吸光度，测定结果见表1。以浓度C对吸光度A进行回归，得线性回归方程为：

A＝-0.0096+7.9697C（r＝0.9998）线性范围4.2μg.ml-1

表1线性关系考察结果

3.2放置时间对结果的影响

精密量取尿样1ml置于燥具塞试管中，共做六份样。标明对照管和测定管，各管均加入对溴苯胺试剂5ml，测定管置于70℃恒温水浴中保温10min，取出室温分别放置10min、30min、50min、70min、90min、110min后，以对照管为空白，在520nm处测定吸光度。测定结果显示：测定管于70℃置恒温水浴中保温10min，取出室温放置，随时间的延长，吸光度逐渐加大。在70min时，吸光度值比较稳定，以后吸光度值逐渐减小。因此本试验选择室温放置70min时测定。

3.3精密度考察

将同一样品在同一天内重复测定5次，连续测定5日，计算日内日间精密度。日间精密度RSD1.06%。日内及日间精密度均小于2%，说明本测定方法比较稳定，且仪器的精密度较好。

3.4重现性考察

取尿样稀释5倍，精密量取1ml置于干燥具塞试管中，共做5份样。标明对照管和测定管。各管均加入对溴苯胺试剂5ml，测定管置于70℃恒温水浴中保温10min，取出室温放置70min后，以对照管为空白，在520nm处测定吸光度。测定结果见表2。

表2重现性实验结果

3.5临床应用

3.5.1小儿厌食症西医诊断标准

（1）长期食欲不振，见食不贪，入量较病前减少1/3～1/2以上，发病最短时间为2周以上，排除其他系统疾病。

（2）体重增长停滞或减轻，有不良饮食习惯或喂养不当史。

3.5.2中医脾失健运证辩证标准

（1）主要症状：食欲不振、食量减少。

（2）次要症状：嗳气泛恶、脘腹饱胀、大便不调。

（3）舌质淡红，苔簿白或簿腻，脉尚有力。

3.5.3对自治区中医医院儿科符合小儿厌食症西医诊断标准级中医脾失健运证辩证标准的门诊及住院患儿入选47例。实验当天先排空尿，侧总量，取尿样30～50ml左右，用比色法进行测定，计算D-木糖排泄量。47例患儿D-木糖排泄率为14.11±4.07%，本试验所测小儿厌食症患儿D-木糖排泄率明显低于正常值。

4讨论

4.1D-木糖吸收试验用于评估肠道吸收功能有助于肠道疾病的诊断，在文献报道中有二羟基家本法、还原法，但均未做系统研究和方法学考察。有文献报道用高效液相色谱法测定血样、尿样中D-木糖含量，此法比较灵敏，但成本高、周期长，不宜于在临床中推广应用。本试验用比色法测定尿样中D-木糖含量，操作简单，易于掌握，重复性、稳定性较好。一般实验室均可开展，有利于在临床合基层中广泛推广。

4.2比色法测定尿样中D-木糖的原理：D-木糖在酸性溶液中加热形成糠醛，糠醛与对溴苯胺反应生成粉红色复合物，再用分光光度法测定。此法呈线性关系的浓度值范围较地（4.2μg?ml-1～66.7μg?ml-1），而D-木糖吸收是严重的尿液浓度通常超过此范围，因此在实际操作中须根据样品的测定结果确定稀释比例。

4.3D-木糖是一种戊糖，在小肠吸收后不被肝脏利用，大部分从尿中排出，故口服木糖后尿中排出量即反映小肠相对吸收量。对我院47例小儿厌食症患儿进行检测，患儿木糖排泄率明显低于正常儿童，有一定的临床意义。表明木糖吸收试验是一项反映上段空肠糖类吸收机能交精确的方法，且对溴苯胺法测定尿样中D-木糖含量简便，重复性好，不需要特殊仪器，病人无痛苦，标本易收集。各医院均可展开，因此可考虑作为消化系统、肠道疾病诊断的一个筛选标准，并可以作为治疗后判断疗效的一个客观指标。

参考文献

[1］李镤，何先奇，王兰香.慢性胃炎及消化性溃疡病患者的D-木糖排泄率观察[J].中国中西医结合脾胃杂志，1999，7(3)：136.

[2］盛惟，黎明，杨志燕.木糖吸收实验方法的探讨[J].时珍国医国药，2001，12（2）：112-114.

[3］李幼生，刘放南，盛学勤等.血清或尿液木糖快速测定及应用[J].陕西医学检验，1995，10（2）：1-2.