使用不同方法检测乙肝表面抗原的对比分析

使用不同方法检测乙肝表面抗原的对比分析

陈开兰黄仕辉

陈开兰黄仕辉（贵州航天医院贵州遵义563003）

【摘要】目的：分析化学发光法（微粒子酶免法）与酶联免疫吸附实验（ELISA）及胶体金免疫沉析法检测乙肝表面抗原的差异性。方法：利用雅培i2000化学发光分析仪测定病人标本，记录乙肝表面抗原的定量结果，将同样的标本用酶联免疫吸附实验及胶体金检测，记录检测结果，经统计学处理，对三种方法的测定结果进行比较。结果：三种方法测定乙肝表面抗原的结果存在差异，化学发光法的阳性检出率较ELISA法及胶体金免疫沉析法高。结论：对ELISA法及胶体金免疫沉析法检测乙肝表面抗原处于临界状态的标本，应使用化学发光法检测，以提高结果的准确性，更好的为临床提供诊断依据。

【关键词】乙肝表面抗原微粒子酶免法ELISA胶体金免疫沉析法

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）15-0102-02

ComparativeAnalysisonHepatitisBSurfaceAntigenthroughDifferentDetectingMethods

ChengKailanHuangShihui(GuizhouAerospaceHospitalZunyiGuizhouProvince563000)

【Abstract】Objective：Analysisofchemiluminescence(microparticleenzymeimmunoassaymethod)andenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)andimmunoprecipitation,analysisofcolloidalgoldwasdetecteddifferencebetweenhepatitisBsurfaceantigen.Methods：Abbotti2000usingchemiluminescenceanalyzerpatientspecimens.RecordtheresultsofthequantitativehepatitisBsurfaceantigen,Willhavethesamespecimensbyenzyme-linkedimmunosorbentassayandcolloidalgolddetection,Recordtestresults,Statisticalanalysis,Determinationofthethreemethodswerecompared.Results：ThreeMethodsformeasuringtheresultsofhepatitisBsurfaceantigendifferences,ChemiluminescencethanthepositiverateofELISA,andimmunogoldmethodwithhighprecipitation..Conclusion：OnELISA,andimmuneprecipitationofcolloidalgoldassayofhepatitisBsurfaceantigeninthecriticalstateofthespecimens,Chemiluminescencedetectionshouldbeusedtoimprovetheaccuracyoftheresults,thebetterthebasisfortheclinicaldiagnosis.

【Keywords】HepatitisBsurfaceantigenMicroparticleenzymeimmunoassayMethodELISAImmungoldprecipitationmethod

近年来，随着医学检验技术的发展，乙肝表面抗原的检测已成为住院病人的普查项目，其操作方法越来越简便、快速、准确，大大提高了实验室的工作效率，也为临床诊断与治疗提供了可靠的依据。但是，由于乙肝表面抗原的检测方法多，并且各种方法的检测原理不尽相同，敏感性与特异性也存在差异，由于多数方法都是定性或半定量，检测结果不容易判断，特别是处于临界状态的标本，不同方法间存在着较大差异，因此，需要在不同方法间寻找一个相关性，以提高检测结果的准确性。目前，乙肝表面抗原的检测方法主要有：酶联免疫吸附实验（ELISA）、固相放射免疫法（SPRIA）、免疫荧光技术、微粒子酶免法及胶体金免疫沉析法，各种方法对乙肝表面抗原的检测敏感性和特异性有较大差别，因此，为了保证不同方法检测结果的一致性，更好的服务于临床，我们选择了100份住院病人标本，使用化学发光、ELISA及胶体金免疫沉析法分别测定，现将结果报告如下：

1材料与方法

1.1材料

1.1.1标本的来源：收集100例住院病人标本。

1.1.2仪器及试剂：美国雅培i2000全自动化学发光仪、北京普朗酶标仪、洗板机、美国雅培i2000全自动化学发光仪配套试剂、上海科华乙肝表面抗原诊断试剂盒、胶体金试剂盒、真空采血管、37℃恒温水浴箱。

1.2方法

1.2.1化学发光检测:采用病人血清标本，用雅培i2000化学发光仪检测。操作中使用雅培i2000全自动化学发光仪配套试剂，每日用原装进口质控全血严格进行质量控制。在采血后2小时内完成操作。记录其阴性及阳性结果。

1.2.2手工法（ELISA）:

1.2.2.1选择用美国雅培i2000全自动化学发光仪检测的病人标本100例。

1.2.2.2立即用手工法（ELISA）进行检测(使用上海科华乙肝表面抗原诊断试剂盒，严格依照其使用说明书操作)。使用北京普朗酶标仪进行测定，记录其阴性及阳性检测结果。

1.2.3胶体金免疫沉析法：将以上100例标本使用胶体金法严格按照操作说明书进行测定，记录其阴性及阳性检测结果。

1.2.4将上述三种方法的检测结果进行比较，分别计算其阳性率，进行比较。

2结果

2.1对化学发光仪、ELISA检测结果以及胶体免疫沉析法的检测结果进行比较，化学发光法与ELISA法比较（P<0.05）。化学发光法与胶体金免疫沉析法比较（P<0.05）见表1。所以化学发光仪的阳性率明显高于ELISA及胶体金检测结果：

表1三种方法检测乙肝表面抗原的阳性率

方法检测数阳性数阳性率

化学发光法1003636%

ELISA1003225%

胶体金免疫沉析法1003227%

2.2对乙肝表面抗原阳性检测率，化学发光法（微粒子酶免法）的敏感性较ELISA及胶体金免疫沉析法高。

3讨论

目前，乙肝表面抗原的检测方法有许多，其广泛应用于临床的主要有：酶联免疫吸附实验（ELISA）技术、固相放射免疫法（SPRIA）、免疫荧光技术、微粒子酶免法及胶体金免疫沉析法。

20世纪70年代将ELISA方法开始引入至国内，其方法简便、廉价、适合一般实验室推广，该法常利用底物循环、酶联级放大、生物素-亲和素、微颗粒体系等放大技术来提高灵敏度，它采用单克隆抗-HBS包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBS-HRP,当标本中存在表面抗原时，该表面抗原与包被的表面抗体结合，并与抗-HBS-HRP结合形成抗-HBS-HBsAg-抗-HBS-HRP复合物，然后加入TMB底物，产生显色反应，反之则无显色反应。其发展迅速，很快覆盖了医学检验的诸多领域。双抗体夹心法是其中的代表。单克隆抗体的加人增加了检测的特异性，用辣根过氧化物酶标记链亲合素(替代卵亲合素以降低本底)与生物素标记的一抗(单克隆抗体)联用构成了高特异性、高敏感度的放大系统，在临床检测中构成了一道独特的风景线。E11SA以灵敏度高、特异性强、重复好为突出优点，对HBsAg的检测灵敏度可达0.5ng/ml[1]。目前国内成熟的ELISA肝炎试剂，已被卫生部临床检验中心作为标准，与美国ABBOTT试剂在灵敏度、特异性上都非常接近，所以ELISA被广泛应用于肝炎、HIV和HCV等各种免疫学检测，其最大优势在于该法避免了对环境和人体的危害；操作简便并且试剂有效期较长，同时也由于无放射性污染逐步取代了一些放射免疫方法。

微粒子酶免法(MEIA)是近年来新发展起来的一种新的抗原抗体检测技术，该方法对HBsAg检测灵敏度为0.17-0.2ng/ml。该方法利用微粒内因子与待测物形成微粒内因子复合物后，与碱性磷酸酶共扼化合物结合成微粒内因子共扼复合物，再与底物反应生成带荧光的产物而被测定。临床上用雅培AXSYM的MEIA法测定乙肝病毒血清学标志物是公认参考法。其特点是:全自动，操作时环境不易被污染，但由于仪器和试剂成本高，在基层医院尚不能普及。

胶体金免疲层析法是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术，该法所用试剂全部为干试剂，多个试剂被结合在一个约6mmX70mm的塑料板条上，试纸条两端附有吸水材料，成为单一试剂条，实验过程短，是“床边检验”的主要方法之一。它用胶体金标记抗原、抗体后以层析方法进行检测，突出优点为快速、试剂便于保存、检测不需要特殊设备，并可以单份检测[2,3]，适合急诊检测。但灵敏度和特异性稍差，比较适合用于基层医疗单位和标本初筛。目前已有成熟的胶体金试纸条如HCG金标纸条广泛应用于临床检测。在乙型肝炎重要标志物之一的HBsAg检测中，国外较好的金标试纸的检测灵敏度已接近ELISA，国内也有较成熟的胶体金试纸条被广泛应用，国产的HBsAg胶体试纸条检测灵敏度已达到1ng/ml[4]，但与国外产品相比仍存在一定差距有待于进一步提高[3]。若能进一步提高检测灵敏度和特异性，实现检测多元化，进行定量和半定量检测，胶体金纸条将会更加广泛地应用于各个领域。

我们比较了雅培i2000化学发光仪和ELISA及胶体金免疫沉析法检测乙肝表面抗原的结果。三种方法中化学发光法的敏感性最高，被认为是乙肝表面抗原测定的参考方法。但试剂成本高，在基层医院尚不能普及。一般认为，ELISA的敏感性较胶体沉析法高，但本次研究中并没有体现。ELISA虽然敏感性较胶体金法高，由于是半定量方法，在阴阳性结果的判断上存在一定的误差，易造成漏检和假阳性。由于其检测成本低，可以推广使用。胶体金沉析法操作方便，整个检测过程耗时短，适用于其他方法检测阳性结果的复查。

综上所述，化学发光法的敏感性都较ELISA及胶体金免疫沉析法高，能检测出较微量的乙肝表面抗原，有助于临床发现早期病例，在有条件的情况下，适用于临床标本的检测。ELISA敏感性理论上较胶体金法约高，并且检测成本低，适用于小型医疗机构的普查使用；胶体金沉析法操作方便，检测用时短，无需特殊设备并且可单份检查，适用于临床急诊标本和对临床检测阳性的标本复查确认。

参考文献

[1]王浩丹，周申.生物医学标记示踪技术[M].北京：人民卫生出版牡，1995.99.

[2]王培之，徐克沂，皮国华.胶体金免疫结合试验在检验医学中的应用[J].中华检验医学杂志.2000,23(5):30.

[3]曾章新，刘文星，朱忠勇，等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价[J].中华医学检验杂志，1999,22(6):327.

[4]周继文，戎广亚，扬守纯，等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原[J].中华医学检验杂志，1998,21(1):30.

[5]ChenRW,PiiparinenH,SeppsmenM,etal.Real-timePCRforde-tectianandquantitationofhepatitisBvirusDNA[J].JMedVim,2001,65(2):250--256.

[6]郭红亮.酶联免疫一步法试剂检测乙型肝炎表面抗原的钩状效应及其对策[J].实用全科医学，2003,1(1):72-73.