20-HETE诱导ROS产生加重心肌缺血再灌住损伤

20-HETE诱导ROS产生加重心肌缺血再灌住损伤

唐红

唐红

（长春医学高等专科学校生理教研室吉林长春130031）

【摘要】目的：分析2-羟二十万四烯酸（20-HETE）诱导心肌细胞内活性氧（ROS）产生,加重心肌缺血再灌注损伤的机制。方法：选取Wistar成年雄性大鼠，离体心脏缺血前灌流20min平衡，行30min全心缺血，再经15min灌注。将浓度30mM的20-HETE加入KH液内，查看其给大鼠心脏功能造成的影响。对照组KH液内仅加入对应浓度乙醇。测定两组ROS、脂质过氧化及心肌组织Nox2mRNA表达情况。结果：观察组荧光强度明显高于IR对照组（P＜0.05），经统计，20-HETE（30nM）荧光强度相较于对照组上升21%；观察组蛋白质羟基化产物水平比对照组升高（20.0±3.1）%，NOX2亚基mRNA表达比对照组升高（76.3±2.6）%。结论：20-HETE导致心肌缺血再灌注损伤加重可能和激活Nox2氧化酶，致使其衍生ROS水平增加有关。

【关键词】心肌缺血再灌注损伤；2-羟二十万四烯酸；活性氧

【中图分类号】R453【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）10-0071-02

缺血再灌注损伤指的是心肌缺血恢复灌流之后功能、结构并未改善，反而受到严重损伤的现象，多发生在脑溶栓、血管搭桥、心肌梗死治疗之后[1]。近年来有研究[2]发现，兔和犬等动物心脏缺血再灌注后，20-HETE在冠状静脉血管内的水平显著升高，当对其生成加以抑制后，可促使心肌缺血再灌注损伤后的功能显著恢复。也有研究人员[3]通过对大鼠体心肌缺血再灌注试验发现，20-HETE可诱导心肌细胞凋亡，其过程是在ERK1/2信号通路介导之下发生的。从这一结果可以看出，20-HETE和心肌缺血再灌注损伤的发生有一定关联，其具体作用机制目前的研究还较为少见。为分析其作用机制，笔者选取56只雄性大鼠，展开动物实验分析，报道如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取Wistar雄性成年大鼠56只，所有大鼠均来自我市某大学基础医学院实验动物中心。

1.2方法

（1）心脏离体灌流：以1g/kg的乌拉坦对大鼠腹腔注射麻醉，开胸取心脏后，对主动脉套管，将之放在Langendorff心肌灌流系统之上逆行灌流。离体心脏缺血前灌流20min平衡，行30min全心缺血，再经15min灌注。

（2）心肌细胞内ROS测定：对两组大鼠的离体心脏组织进行冰冻切片，将各组细胞放在2μM、37℃DHE内进行30min孵育，以20%PBS甘油进行封片，在荧光显微镜下观察。

（3）丙二醛（MDA）检测：计算公式为：组织内MDA含量为（测定管吸光度-测定空白管吸光）/（标准管吸光度-标准空白管吸光）×标准品浓度/蛋白含量。

（4）Nox2mRNA检测：利用Trizol法提取RNA，以RT-PCR试剂盒操作说明书为依据，对样本展开逆转录及聚合酶链式反应，测定扩增产物吸光度值，对其比值计算。

1.3统计学分析

利用统计学分析软件SPSS16.0对相关数据展开统计学分析，以（x-±s）形式表示所有数据，组间对比行t检验，P＜0.05表示差异显著，且有统计学意义。

2.结果

2.120-HETE促使IR后ROS生成增加

离体心脏缺血前灌流30min达到平衡，进行30min全心缺血之后再展开15min灌注，以荧光探针DHE法对心肌中ROS生成检测，观察组荧光强度为121±6.5，比对照组为100±6.4，观察组荧光强度明显高于IR对照组（t=3.8560，P=0.0362），经统计，观察组荧光强度相较于对照组上升21%。

2.220-HETE促使IR后脂质过氧化形成

经TBA法检测，对照组蛋白质羟基化产物水平为（0.40±0.05）nmol/mg，观察组为（0.48±0.06）nmol/mg，两组差异显著（t=4.2366，P=0.0203），观察组脂质过氧化水平升高（20.0±3.1）%。

2.3心肌组织NOX2mRNA的表达

将20-HETE（30nM）加入后，观察组心肌Nox2亚基mRNA表达为（0.67±0.08）%，对照组为（0.38±0.06）%，两组差异显著（t=4.0075，P=0.0218），观察组相较于对照组提高（76.3±2.6）%。

3.讨论

本实验通过分析发现，20-HETE可促使离体心脏缺血再灌注损伤加重，这是由本文所得研究结果所支持的。在这些结论中，均可发现20-HETE可促使心肌缺血再灌注损伤加剧，而这一作用的发生机制可能是激活了Nox2氧化酶，致使其衍生ROS水平增加所致。大量研究[4]发现ROS在心肌缺血再灌注损伤中有主要作用，给予抗氧化剂将ROS清除后可促使心肌缺血再灌注后功能显著改善，缩小梗死面积，且因心脏内无抗氧化酶，故其对ROS敏感性比其他组织及器官更高，过量的ROS可给细胞中多数脂质造成不可逆氧化损伤，而脂质过氧化损伤则可直接导致心肌细胞的凋亡[5]。

通过本次实验我们认识到，20-HETE可促使心肌组织的病理改变加剧，促使缺血再灌注后ROS合成加剧，导致脂质过氧化形成，对心肌缺血再灌注损伤的发生及进展有重要意义。

【参考文献】

[1]卜丽梅，关凤英，乔萍等.没食子酸对大鼠缺血再灌注损伤后细胞凋亡的保护作用及机制研究[J].中国实验诊断学，2012，14（11）：1693-1695.

[2]鲍玉艳.20-HETE经线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡的研究[D].吉林：东北师范大学，2010.

[3]吴锦，吴平生.心肌缺血/再灌注损伤与细胞凋亡[J].医学综述，2011，17（19）：2961-2963.

[4]陈辉，郑敏，叶华山.心肌缺血再灌注损伤机制及治疗研究进展[J].湖北科技学院学报：医学版，2015，29（3）：262-265.

[5]韩勇.20-HETE对心肌缺血再灌注损伤及细胞凋亡的作用及机制研究[D].吉林：东北师范大学，2013.

[6]周本学，田立生.预先应用甲状腺激素心肌缺血—再灌注损伤保护作用的实验和临床研究，中国老年学杂志：，2013，11（3）：22-23.