小儿腹泻粪便标本中轮状病毒ELISA与PAGE检测及比较

小儿腹泻粪便标本中轮状病毒ELISA与PAGE检测及比较

李明

李明

湖南省湘潭市第二人民医院411100

【摘要】目的比较ELISA与PAGE检测法在小儿腹泻粪便标本中轮状病毒检测中的应用价值，为临床选择合理有效的检测手段提供依据。方法选取我院儿科2013年12月～2015年12月收治的腹泻患儿192例，分别采用酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）法和聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE）法对患儿粪便标本中轮状病毒进行检测，以荧光PCR法作为检测金标准，观察比较2种方法对患儿轮状病毒检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确率。结果192例腹泻患儿粪便标本中，作为金标准的荧光PCR法共检出轮状病毒阳性121例，阴性71例，检出率为63.02%。ELISA法检出轮状病毒阳性130例，阴性62例，灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为100%、87.32%、93.08%、100%和95.31%。PAGE法检出轮状病毒阳性130例，阴性62例，灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为100%、66.20%、83.45%、100%和87.50%。结论ELISA法对小儿腹泻粪便标本中轮状病毒检测的特异度、阳性预测值、符合率方面均优于PAGE法，诊断价值更高。

【关键词】酶联免疫吸附测定法；聚丙烯酰胺凝胶电泳法；小儿腹泻；轮状病毒

【Abstract】objectivetocomparativeELISAandPAGEtestininfantilediarrheastoolspecimensofitsapplicationindetectingrotavirusvalue，providethebasisforclinicalchoosereasonableandeffectivedetectionmethods.MethodsselectourhospitalofpediatricsinDecember2013toDecember2015wereanalyzedin192casesofdiarrhea，respectively，usingenzyme-linkedimmunosorbentassay（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）methodandpolyacrylamidegelelectrophoresis（polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE）methodforchildrenwithrotavirusinstoolspecimensfortesting，withfluorescentPCRmethodtotestforthegoldstandard，comparetwomethodsfortestingthesensitivityofchildrenwithrotavirus，specificdegree，positivepredictivevalue，negativepredictivevalueandaccuracy.Resultsof192casesofchildrenwithdiarrheastoolspecimens，asthegoldstandardintheintensefluorescencePCRdetectionofrotaviruspositive121cases，71casesofnegativedetectionrateof63.02%.ELISAmethodfordetectionofrotaviruspositive130cases，62casesofnegative，sensitivity，specific，positivepredictivevalue，negativepredictivevalueandthecoincidencerateisrespectively100%，87.32%，93.08%，100%and95.31%.PAGEmethoddetectedrotaviruspositive130cases，62casesofnegative，sensitivity，specific，positivepredictivevalue，negativepredictivevalueandthecoincidencerateisrespectively100%，66.20%，83.45%，100%and87.50%.ConclusionELISAmethodforinfantilediarrheastoolspecimensofrotavirusdetectioninspecificdegree，positivepredictivevalue，andissuperiortocoincidenceratePAGEmethod，higherdiagnosticvalue.

【Keywords】enzyme-linkedimmunosorbentassay；Polyacrylamidegelelectrophoresis；Infantilediarrhea；rotavirus

腹泻是儿科常见疾病，在所有病原菌中，轮状病毒是引起小儿腹泻的最常见致病菌[1]。据报道，全球每年50万以上5岁以下儿童死于轮状病毒性肠炎，严重威胁到儿童生命健康[2]。为此，笔者选取我院儿科2013年12月～2015年12月收治的腹泻患儿192例进行研究，以比较ELISA与PAGE检测法在小儿腹泻粪便标本中轮状病毒检测中的应用价值，取得了满意的结果，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取我院儿科2013年12月～2015年12月收治的腹泻患儿192例，均采用ELISA法和PAGE法对患儿粪便标本中轮状病毒进行检测，均以荧光PCR法作为检测金标准。其中，男患儿99例，女患儿93例；年龄范围：7个月～6岁；平均年龄：（3.4±0.5）岁。

1.2纳入和排除标准

纳入标准：所有患儿均符合方鹤松《小儿腹泻病学》[3]中关于小儿腹泻病的诊断标准。排除标准：①心、肝、肾等重要脏器功能严重损害者；②有既往病史的患儿；③有药物过敏史的患儿。本研究经过我院医学伦理委员会批准同意后进行，所有患儿家属均协商后同意患儿参与并签署知情同意书。

1.3方法

1.3.1检测方法

192例患儿均先后采用ELISA法、PAGE法及荧光PCR法检测粪便标本中的轮状病毒。ELISA法：从粪便标本中提取dsRNA，经PAGE后硝酸银染色，根据轮状病毒的特征核酸带型检测病毒；PAGE法：应用A组轮状病毒ELISA试剂盒（兰州生物制品研究所）；192例患儿在轮状病毒检测过程中均以荧光PCR检测作为检测金标准。以上检测方法均参照说明书指示进行操作。

1.3.2计算公式

2种检测方法诊断真实性相关指标的计算：①灵敏度=真阳/（真阳+假阴）×100%；②特异度=真阴/（真阴+假阳）×100%；③阳性预测值=真阳/（真阳+假阳）×100%；④阴性预测值=真阴/（真阴+假阴）×100%；⑤诊断符合率=（真阳+真阴）/（真阳+真阴+假阳+假阴）×100%。

1.4观察指标

①荧光PCR法检测结果；②ELISA法与PAGE法检测轮状病毒的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率。

1.5统计学处理

本次研究所有结果数据均采用SPSS16.0forWin7进行统计学处理，采用χ?检验或t检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1荧光PCR法（金标准）检测结果

192例腹泻患儿粪便标本中，荧光PCR法共检出轮状病毒阳性121例，阴性71例，检出率为63.02%（121/192）。

2.2ELISA法与荧光PCR法检测结果比较

ELISA法检出轮状病毒阳性130例，阴性62例。灵敏度为100%（121/121），特异度为87.32%（62/71），阳性预测值为93.08%（121/130），阴性预测值为100%（62/62），符合率为95.31%（183/192）。见表1。

3讨论

小儿腹泻病是我国儿科疾病中发病率较高的一种。好发于秋季，在婴幼儿及学龄前儿童中多见[4]。据相关文献[5-6]报道，腹泻病患儿常表现为大便次数增多，大便呈白色稀水便或黄色蛋花样便，伴有恶臭。该病可累计全身，引起神经系统、呼吸系统、循环系统等多系统症状。为指导临床明确有效的治疗，对轮状病毒的高效率检测及确诊手段显得尤为重要[7]。范晓琴[8]对腹泻患儿进行病原学检测的结果进行分析后发现，感染性腹泻患儿感染的主要病原体以轮状病毒为主，其次为细菌。腹泻患儿的病因较复杂，进行准确的病原学检测能为腹泻患儿治疗方案的设计提供可靠的依据，保证其治疗的安全性、有效性，提高其用药的合理性，避免抗生素滥用情况的发生，具有重要的临床意义。司玉枝[9]运用ELISA法对患儿大便中的轮状病毒进行检验，研究小儿秋季腹泻发病中轮状病毒的检验及临床意义，并总结导致小儿秋季腹泻的主要原因，研究发现，所有患儿均顺利完成检验，在100例腹泻患儿中，62例检出轮状病毒，检出率为62.0%，说明在诱发小儿秋季腹泻的诸多因素中，轮状病毒是其主要原因，并且男、女患儿的轮状病毒检出率分别为60.0%和64.4%，比较差异无统计学意义（P＞0.05）。该研究结果证实，轮状病毒感染是引发小儿秋季腹泻的主要原因。因此临床治疗小儿腹泻时，务必及时找出发病原因，以给予针对性治疗措施，从而提高治疗效果，改善患儿预后。

本次研究中，笔者选取我院儿科2013年12月～2015年12月收治的192例腹泻患儿，分别采用酶联免疫吸附测定ELISA法和PAGE法对患儿粪便标本中轮状病毒进行检测，发现192例腹泻患儿粪便标本中，作为金标准的荧光PCR法共检出轮状病毒阳性121例，阴性71例，检出率为63.02%。ELISA法检出轮状病毒阳性130例，阴性62例，灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为100%、87.32%、93.08%、100%和95.31%。PAGE法检出轮状病毒阳性130例，阴性62例，灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为100%、66.20%、83.45%、100%和87.50%。由此可见，ELISA法对小儿腹泻粪便标本中轮状病毒检测的特异度、阳性预测值、符合率方面均优于PAGE法，诊断价值更高。以上学者研究结果与本次研究结论基本一致。

综上所述，ELISA法对小儿腹泻粪便标本中轮状病毒检测的特异度、阳性预测值、符合率方面均优于PAGE法，诊断价值更高，值得临床推广应用。

参考文献：

[1]RenXiaoFeng，Suo，S.，JangYongSuketal.DevelopmentofaporcineepidemicdiarrheavirusMprotein-basedELISAforvirusdetection.[J].BiotechnologyLetters，2011，33（2）：215-220.

[2]PhillipsG，LopmanB，TamCCetal.DiagnosingrotavirusAassociatedIID：UsingELISAtoidentifyacut-offforrealtimeRT-PCR.[J].Journalofclinicalvirology：TheofficialpublicationofthePanAmericanSocietyforClinicalVirology，2009，44（3）：242-245.

[3]方鹤松.小儿腹泻病学[M].北京：人民卫生出版社，2009：215-286，643-659.

[4]孙丹丹，刘晓华.小儿腹泻病原检测分析与临床微生物学研究[J].中外医学研究，2014，21（6）：81-81，82.

[5]吕莉莎，梁湘辉，张庆水等.轮状病毒感染与小儿腹泻的关系[J].实用预防医学，2012，19（12）：1882-1883

[6]吴瑞.轮状病毒检测在小儿腹泻诊断中的运用[J].吉林医学，2014，35（5）：1000-1001.

[7]阳正东.0~5岁小儿急性腹泻病原微生物检验结果分析[J].蚌埠医学院学报，2014，22（8）：1107-1109，1110.

[8]范晓琴，沈冬梅.对腹泻患儿进行病原学检测结果的分析及其临床意义探讨[J].当代医药论丛，2014，18（16）：280-281.

[9]司玉枝.小儿秋季腹泻发病中轮状病毒的检验及临床意义[J].中国实用医药，2016，11（4）：23-24.