枳实炮制方法研究

枳实炮制方法研究

赵玉静

赵玉静（沈阳市皇姑区亚明社区卫生服务中心辽宁沈阳110031）

【摘要】目的研究枳实的炮制方法。方法利用甲醇提取，通过聚酰胺柱，用水洗脱，提取枳实中的辛弗林，并用HPLC方法对其进行测定，并对枳实生品及麸炒品中辛弗林进行测定和比较。结果:烘制、麸炒过程对枳实中辛弗林含量有一定的影响，烘制的方法作为枳实的炮制法具有可行性。

【关键词】辛弗林；HPLC

【中图分类号】R28【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2014）15-0274-02

枳实为临床常用中药，为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果。具有破气消积，化痰散痞等功效。临床用于积滞内停，痞满胀痛，泻痢后重，大便不通，痰滞气阻，胸痹，结胸，脏器下垂。鉴于枳实的良好活性作用，对枳实进行系统研究。本研究旨在研究传统炮制过程对枳实有效成分的影响。根据报道，枳实的主要有效成分为生物碱类的辛弗林，因此本实验研究炮制工艺对枳实辛弗林化学成分的变化，同时研究烘制法对枳实辛弗林化学成分的影响，确定枳实的炮制条件。

1.仪器与试剂：

1.1仪器P230II大连依利特（UV230II紫外检测器，EC2006-色谱数据处理工作站)，KQ3200超声波清洗器(江苏昆山)

1.2试药枳实药材(产地江西，经鉴定为芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果)；辛弗林对照品(中国药品生物制品检定所，纯度>98%)；高效液相色谱用水为纯净水，甲醇为色谱纯；磷酸二氢钾、十二烷基磺酸钠、冰醋酸等试剂为分析纯。

2.方法与结果

2.1辛弗林的含量测定方法

2.1.1色谱条件WelchUltimateLP-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾0.6g，十二烷基磺酸钠1.0g，冰醋酸1ml，加水溶解并稀释至1000m1)(50：50)为流动相，检测波长：275nm，流速：1.0mL/min；柱温：30℃。

2.1.2供试品溶液制备[3]取本品中粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率240W，频率45kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，通过聚酰胺柱(60～90目，2.5g，内径为l.5cm，干法装柱)，用水25ml洗脱，收集洗脱液，转移至25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.1.3对照品溶液制备[3]辛弗林对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的溶液，即得。

2.1.4空白试验吸取溶剂20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果无干扰。

2.1.5测定结果分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μL。依次进样，在上述色谱条件下测定，记录色谱图，如下（图1，2）。

图1对照品的HPLC色谱图

图2.供试品样1的HPLC图谱

图3.空白试验HPLC图谱

2.2含量测定方法学考察

2.2.1标准曲线的绘制精密称取辛弗林对照品适量，加甲醇制成0.028mg/ml的溶液。精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别至于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别量取20μl，注入HPLC色谱仪中，按上述色谱条件测定，测定峰面积。以对照品溶液的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=469.777492X-8.046891，r=0.9997。结果表明，辛弗林在0.28~1.40μg之间峰面积于进样质量有良好的线性关系。

表1线性范围试验结果

图4.标准曲线及线性范围

2.2.2精密度试验精密吸取对照品溶液，按照“标准曲线的绘制”项下，依法连续测定6次，RSD为0.50%，表明本方法精密度良好。

2.2.3稳定性试验取同一供试品溶液，于0、2、4、6、8、10h测定辛弗林色谱峰面积，测定结果RSD为1.05%，结果表明，溶液在10h内基本稳定。

2.2.4.重复性试验取样品，按2.1项下供试品溶液制备，根据2.3项下色谱条件及检测方法测定5次，记录峰面积，测定结果RSD为1.01%，表明方法重复性良好。

2.2.5回收率试验分别精密称取枳实样品1g，加3.5mg/ml对照品1ml，按2.1.2项下方法处理，按2.1.1项下色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算回收率，结果RSD值为1.41%，表明方法的回收率试验符合相关要求。结果见表5。

表5回收率试验试验结果

2.3枳实加热处理的方法[3-4]取净枳实生品10g，于粉碎机中粉碎5次（每次大约10秒），过筛，将粉末分成7份，留取一份作为未加热，编号为1，其中5份分别置于玻璃皿中，编号为枳实2，3，4，5，于电热鼓风恒温干燥箱内分别于80℃，100℃，120℃，140℃，160℃烘制40min，编号为7为麸炒。将上述7份样品置于干燥器内，在相同温度、湿度条件下放置48h后，精密称量枳实粉末1g，分别放于容量瓶中备用。不同枳实烘制方法，外观性状及称取重量见表6。

表6枳实烘制条件，外观性状及称取重量

2.4不同温度对辛弗林含量的影响结果

取芍药不同样品，按2.1.2方法进行处理，按2.1.1色谱条件进行含量测定，结果见表6，见图5。

图5.不同温度对辛弗林含量的影响

3讨论与结论

3.1通过预试验我们将实验温度梯度定为80℃，100℃，120℃，140℃，160℃。实验中观察到：随着温度升高，时间延长，样品的颜色加深，尤以160℃的现象最明显，其外观与传统麸炒最为接近。

3.2本实验结果表明，枳实烘制100℃时，辛弗林的含量有所提高，说明加热过程对辛弗林类成分的提高有促进作用，可能存在成分的转化过程。但也发现辛弗林的含量在140℃开始明显下降，到160℃时，达到较低水平，说明辛弗林在高温作用下，受到一定的破坏。因此在枳实的炮制中应严格控制温度、并要求火力均匀，避免有效成分的损失。

3.3枳实在160℃下烘制所得样品从外观上与传统麸炒最为接近，但其辛弗林含量较低，同时发现，枳实经传统麸炒后，但其辛弗林含量也降低的现象，这与传统的减毒增效的炮制作用不相符，这一结果有待进一步研究。

参考文献

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