EGF61*G/A基因多态性与胃癌的关系

EGF61*G/A基因多态性与胃癌的关系

林逊汀1吴国洋2傅锦波3

林逊汀1吴国洋2(通讯作者)傅锦波3

(1厦门大学附属中山医院消化内科福建厦门361004)

(2厦门大学消化疾病研究所福建厦门361004；3厦门市消化疾病中心福建厦门361004)

【摘要】目的研究表皮生长因子(EGF)61*G/A基因多态性与胃癌之间的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测胃癌及正常对照组的EGF61*G/A基因型。结果胃癌患者EGF61*G/G基因型或61*G等位基因明显高于对照组，G/G基因型在两组间差异有统计学意义（x2=5.442，P=0.020；OR=1.852，95%=1.101-3.114），G等位基因在两组间差异没有统计学意义（x2=5.861,P=0.015；OR=1.629，95%=1.096-2.421）。结论EGF61*G/G基因型与胃癌的生成相关。

【关键词】EGF基因多态性胃癌

【中图分类号】R730【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）32-0231-02

引言

表皮生长因子（Epidermalgrowthfactor，EGF）是最早发现的生长因子,对调节细胞生长、增殖和分化起着重要作用。人的表皮生长因子蛋白有53个氨基酸残基，三个二硫键。表皮生长因子通过与细胞表面的受体表皮生长因子受体(EGFR)结合而起作用，激发受体内在的酪氨酸激酶的活性，从而启动了信号传导级联而导致多种生物化学变化，细胞内钙水平上升，增加糖酵解与蛋白质合成,增加某些基因(包括表皮生长因子受体)的表达，最终导致DNA合成和细胞增殖。

胃癌是常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内平均每年死亡病例7000,000，因癌症致死的疾病中排名第二，仅次于肺癌。世界各地胃癌的发病率呈逐年上升趋势，其中约2/3病例发生在发展中国家，42%发生在中国。

表皮生长因子(EGF)61*G/A基因多态性与皮肤黑色素瘤、神经胶质瘤、原发性肝癌和结直肠癌相关[2-7],但EGF61*G/A基因多态性与胃癌发生关系的研究结果尚有矛盾[8,9]。本文将对EGF61*G/A基因多态性与胃癌的关系进行病例-对照研究，并将结果报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料

病例为我院普通外科2009年1月至2011年12月间收治的114例胃癌患者，男98例，女16例，年龄31～85岁。对照组为120例无癌肿的健康人，男95例，女25例，年龄36～67岁。所有胃癌患者经手术病理证实。

1.2方法

通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测EGF61*G/A基因型。胃癌患者及对照组健康人抽取的外周血液存于含枸橼酸钠的抗凝管中，放置于-80℃冰箱中冻存。用QIAGENTM公司DNA试剂盒提取DNA。PCR扩增含有EGF61*G/A基因的DNA片段，引物序列[2]分别为：(1)5'-TGTCACTAAAGGAGGT-3'(2)5'-TTCACAGAGTTTAACAGCCC-3'。50μl反应体系含：10*PCRbuffer5μl,10mMdNTP2μl,10uM引物各3μl,50mMMgCl23μl,TaqDNA聚合酶（5u/μl）0.4μl。反应体系经94℃5分钟变性后，以94℃1分钟，72℃1分钟循环35次，最后72℃延伸10分钟。Roche公司购买的限制性内切酶AluI（限制性内切点为AG▼CT）消化EGFPCR产物2小时。3%琼脂糖凝胶电泳分析酶切片段，确定EGF61基因型。

1.3统计学处理

统计学分析采用SPSS13.0软件进行。直接计数法计算EGF61*G/A基因型频率和等位基因频率。各组基因型和等位基因频率比较采用卡方检验。

2结果

2.1EGF61*G/A基因多态性酶切后3%琼脂糖凝胶电泳成像

EGF61*G/A基因PCR扩增片段为242bp。EGF61*A/A基因型可被酶切成102bp、91bp、34bp和15bp4个片段，EGF61*G/G基因型可被酶切成193bp、34bp和15bp3个片段，EGF61*A/G基因型可被酶切成193bp、102bp、91bp、34bp和15bp5个片段（见图1）。

图1.EGF61*G/A基因多态性酶切结果。

1EGF61*A/A

2EGF61*G/G

3EGF61*G/G

4EGF61*A/G

5DNAmarker

2.2胃癌患者EGF61*G/A基因多态性分布

在61位点，114例胃癌患者的G/G、G/A和A/A基因型分布分别是62（54.4％）、45（39.5％）和7（6.1％）；120例健康对照是47（39.2％）、59（49.2％）和14（11.7％）；胃癌患者和健康对照的G和A等位基因分布分别是169（74.1％），59（25.9％）和153（63.8％）和87（36.2％）。经卡方检验，G/G基因型在两组间差异有统计学意义（x2=5.442，P=0.020；OR=1.852，95%=1.101-3.114），G等位基因在两组间差异有统计学意义（x2=5.861,P=0.015；OR=1.629，95%=1.096-2.421）

表1.胃癌组和健康对照组中的EGF61*G/A基因型与等位基因分布

3讨论

EGF通过与靶细胞的EGF受体结合后发挥促进细胞增殖、分化的作用。尽管EGF可直接作用于肿瘤细胞，它也可以通过促有丝分裂作用促进内皮细胞增殖导致肿瘤形成[4]。EGF与受体结合后也能促进肿瘤细胞分泌VEGF。Shahbazietal[1](2002)首次在EGF基因的5’非翻译区鉴定出61位点存在A/G基因多态性，并报道EGF61*G/G基因型与皮肤恶性黑色素瘤的形成明显相关，而且从含EGF61*A等位基因来源的纯合子细胞比含EGF61*G等位基因来源的纯合子或杂合子细胞明显产生较少的EGF。此后得研究陆续报道EGF61*G/A基因多态性与皮肤黑色素瘤、神经胶质瘤[2-4]。我们的研究小组发现EGF61*G/A基因多态性与原发性肝癌和结直肠癌相关[5-7]。到目前为止有三个研究小组报道EGF61*G/A基因多态性与胃癌的相关性，Hamai等[8]在日本人群的研究表明EGF61*G/A和A/A基因型可以降低40%的胃癌发病风险，但Goto等[9]同样在日本人群的研究未能支持这一结果。JinGuangfu等在汉族人群的研究表明EGF61*G/A和A/A基因型可以降低胃癌发病风险。所以我们猜想EGF61*G/A基因多态性可能也与胃癌相关。

我们的结果也证实EGF61*G/G基因型和G等位基因与胃癌的发生相关。胃癌的EGF61*G/G基因型和G等位基因比例明显高于对照组，其差别有显著意义。由于已经有研究表明EGF61*G/G基因型个体可导致较高的EGF分泌，我们推测高分泌量的EGF产物与胃癌的发生有关联。EGF61*G/G基因型个体分泌高产量的EGF机制尚不清楚。Shahbazi推测它可能的原因为：(1)这基因多态性本身是功能性的。(2)碱基G对A的替换可能导致DNA折叠的改变或mRNA转录过程的改变。(3)EGF基因的61位点碱基改变引起基因其他位点多态性的改变[1]。

我们需要更进一步的研究以确定EGF61*G/G基因型个体患胃癌的危险性增加。或许EGF61*G/A基因多态性可作为检测胃癌的一个危险因素。

参考文献

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