高效液相色谱法测定质控盲样中的合成色素

高效液相色谱法测定质控盲样中的合成色素

罗志刚唐昊天孙伯文

罗志刚唐昊天孙伯文

（长沙铁路疾病预防控制中心410007）

【摘要】目的探讨盲样（饮料）中合成色素测定的有效途径。方法采用高效液相色谱法（HPLC）直接测定质控盲样中的未知合成色素。结果色素分离效果理想，线性关系良好，相关系数均大于0.9999,回收率在95~101%之间，相对标准差小于3%。结论HPLC法简单、快速，灵敏度高，分离度好，适用于盲样中合成色素的同时测定。

【关键词】质控样品；高效液相色谱；合成色素；梯度洗脱

DeterminationofSyntheticPigmentsinQualityControlSamplesbyHPLCLuozhigang,Tanghao-tian,Sunbo-wen(ChangshaRailwayCenterforDiseaseControlandPrevention,Changsha410007,China)

【Abstract】Objective:ToexploreaneffectivewayofdeteminingSyntheticpigmentsinqualitycontrolsamples(drink).Methods:HPLCwasusedtodeterminetheSyntheticpigmentsinqualitycontrolsamples．Result：Thesyntheticpigmentswereseparatedfromeachother.Thelinerrelationshipofstandardcurvewasgood.Thecorrelationcoefficientwasmorethan0.9999.TheRSDwaslessthan3%.Theaveragerecoverieswere95%~101%.Conclusion：HPLCisfastandaccurategoodreproducibility.Soitissuitableforthedeterminationofsyntheticpigmentsinqualitycontrolsamples.

【Keywords】Qualitycontrolsamples；High-performanceliquidchromatography(HPLC)；Syntheticpigments；Ｇradientelution

【中图分类号】TS277【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2011）09-1117-02

人工合成色素作为一类重要的食品添加剂被广泛用于食品生产加工，我国批准使用的食用合成色素有二十余种，其中最常见的有柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝等，其本身无营养价值，又具有一定毒性，是食品监测常规分析项目，也是常见的盲样考核项目之一（本次考核只说明2～3种色素，未注明何种色素）。因HPLC法为国标法，HPLC仪器已广泛应用，故本文选用反相高效液相色谱法同时测定盲样中未知色素，结果令人满意。现报告如下。

1实验部分

1．1主要仪器

LC一2010AHT高效液相色谱系统(自动进样器、四元梯度泵、双波长紫外检测器)；LC-Solution色谱工作站；KQ-100DB超声波清洗器(昆山)；HP-01真空泵(天津奥特赛恩思仪器有限公司)；全玻抽滤器。

1．2主要试剂

甲醇；0.02mol／L乙酸铵溶液；5种合成色素(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝)标准贮备溶液由国家标准物质中心提供，浓度均为0.5mg/ml，5种合成色素混标使用液为10.0μg/ml。以上试剂除甲醇为色谱纯外，均为优级纯，且均需经0.45μm滤膜过滤后方可使用，实验用水PROD值18.32мΩ·cm。

1．3色谱条件

色谱柱：C185μm,4.6×250mm；检测波长：254nm；柱温：30℃；流动相：0.02mol／L乙酸铵溶液一甲醇(梯度洗脱)；流量：1rnl／min。

1．4样品制备样品处理：0.45μm滤膜过滤

1．5标准曲线采用5种合成色素混标使用液，进样量分别为：1、2、5、10、15μl；

2结果与讨论

2．1梯度洗脱条件的选择选用0.02mol／L乙酸铵溶液与甲醇进行梯度洗脱，连续大批量的进样，当每次残留量的累计达到一定程度后，会严重影响后面的峰形。为了达到更好的定性定量分析的洗脱要求，把流动相平衡时间调整到22分钟后，每次都得到了很好的峰形，5种色素的分离效果好（图1）。本方法选用的梯度洗脱条件为：开始时甲醇20％；5min时为35％；12min时为98％；18-40min时为20％。

图15种色素混标色谱图

2．2流动相pH的选择用磷酸调节流动相(pH分别为4.0，4.5，5.0)及不调pH而直接用乙酸铵溶液(酸度计测定pH为6.0)，在以上4种pH下做色素混合标准液测定，随pH变小，测定保留时间提前，影响分离效果。流动相pH过低或过高对色谱柱和仪器不利，最终确定流动相pH为6.0，即直接用不调pH的乙酸铵溶液。

2.3定性实验：采用标准纯物质对照定性和双波长定性

2.3.1保留时间定性：在254nm波长下，首先用5种合成色素混标使用液、质控盲样分别进样3μl，得到2组谱图（质控盲样含有大量干扰物质），根据相对保留时间和峰面积初步判定质控样品中可能存在的合成色素种类（作业书告知5种色素中的2～3种）和色素含量范围。根据谱图可初步认为质控盲样中可能含有胭脂红、日落黄和亮蓝3种色素。

2.3.2峰面积增加法：再用质控样和5种合成色素混标使用液等比混合，进样6μl，得另一组色谱图，与混标使用液色谱图和质控盲样色谱图进行比较，发现胭脂红、日落黄的峰面积成比例增加，而亮蓝的峰面积没有成比例增加，说明质控盲样中可能存在胭脂红、日落黄。

2.3.3双波长定性：为了确定峰的一致性，分别用胭脂红、日落黄的特征吸收波长217nm、480nm两波长，分别对质控盲样品进行检测（进样3μl），所得色谱图分别与前254nm质控盲样色谱图的峰面积进行了比较，发现胭脂红和日落黄两色谱峰面积分别有较大增加，详见表1，综上几点可以定性质控盲样中含有胭脂红和日落黄2种人工合成色素。

2.4定量实验：

用外标法定量，本次考核盲样为饮料中合成色素的检测，实验测得的结果与省CDC的参考结果进行比较，符合省CDC的质控考核要求，详见表2、表3。

3结语

经过以上定性和定量分析，笔者认为HPLC法是测定盲样（饮料）中人工合成色素理想方法，定性简单便捷，定量准确快速，样品无需特殊处理，多色素可同时一次性快速检测。

参考文献

[1]冯慧，梅利华，谢继安.高效液相色谱检测蜜饯中合成色素的最佳波长研究[J].中国食物与营养，2007，3（9）：39-41.

[2]GB/T5009.35-2003．食品卫生检验方法理化部分(一)[s]．

[3]谷岩，曲明．高效液相色谱法测定饮料中食用色素[J]．化学分析，2004，13(1)：42-43．

作者简介

罗志刚，男,1964,主管检验师，主要从事卫生理化检验工作。