胃肠道恶性肿瘤患者CK20mRNA表达及其临床意义

胃肠道恶性肿瘤患者CK20mRNA表达及其临床意义

宋立梅杨青

宋立梅杨青

（山东省胶州市人民医院山东胶州266300）

【关键词】CK20mRNA胃癌结直肠癌

【中图分类号】R735【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）04-0194-01

由于恶性肿瘤患者的生存期主要与是否存在转移有关，因此早期诊断、早期发现转移灶对于治疗及判断患者预后存在重要的意义。而微转移灶的存在与否也因此成为决定患者生存率和复发率的关键因素。所谓的微转移一般指非血液的恶性肿瘤在发展过程中，散播并存活于淋巴系统、血循环、骨髓、肝、肺等组织器官中的微小肿瘤细胞灶。此时患者无任临床表现，常规检查方法如CT、MRI、单抗放射显影技术、普通病理检查等都很难发现。CK20mRNA作为肿瘤细胞微转移的分子标志物在多种上皮源性实体瘤外周血中能检测到，特别在胃肠道肿瘤外周血中表达更高，表达率最低27.3%[1]，最高82.5%[2]。

1CK20

细胞角蛋白20(cytokertin20,CK20)是由MOLL等[3]于1990年发现的一种多肽，它含424个氨基酸，分子量为48533，等电点5.66，其编码DNA总长18Kb，含8个外显子，7个内含因子局限于上皮细胞，是上皮源性恶性肿瘤微转移检测的敏感标志。

CK20的合成首先出现于8周胚胎肠粘膜上皮中，以后扩散到几乎所有的杯状细胞及数目不定的绒毛细胞中。不同于其他CK,CK20具有严格的上皮特异性，正常组织中CK20见于胃粘膜及幽门腺体细胞，十二指肠粘膜，泌尿道伞状细胞，表皮Merkel细胞，舌味蕾细胞，而非上皮细胞或组织如乳腺、平滑肌、血细胞、淋巴细胞、造血细胞均为阴性。但在许多癌中，如胃肠道、乳腺癌等CK20表达增强。CK20在侵袭、转移、扩散到其他组织器官时始终保持稳定，被认为是检测循环癌细胞的敏感标记物。

2CK20在结直肠癌患者表达及其意义

对于结直肠癌肝转移检测有许多的途径，临床术后随访的主要依靠影像学及外周血CEA的检测，对肝脏的诊断率为50%-90%。但遗憾的是在诊断时往往因癌灶过大或与血管的密切关系，而失去了进一步治疗的机会，对于直径小<1cm的微小转移灶，则很难做出明确的诊断。由经典的PCR技术发展而来的RT-PCR,可检测某一基因在mRNA水平的表达情况，能在106-107个细胞中检测出1个肿瘤细胞，使肿瘤的微转移的检测成为可能。

在结肠癌患者中，肿瘤的肝转移是治疗失败的主要原因，也是结肠癌患者治愈率不能提高的主要影响因素之一。因此，在结肠癌患者中检测出肿瘤早期肝脏转移／微转移的指标具有一定的临床意义。细胞角蛋白(cytokeratin，CK)是上皮细胞骨架的组成部分，CK至少有20种，其中CK20表达范围较特异，仅局限在胃肠上皮细胞，几乎全部胃肠道肿瘤以及在侵袭、转移、扩散到其它组织器官时，CK20均保持稳定表达。因此，当门静脉血中有恶性肿瘤细胞存在时，则可能检测到CK20mRNA。检测肿瘤转移的方法包括利用肿瘤细胞膜表面抗原的单克隆抗体检测外周血、骨髓、淋巴结中的肿瘤细胞；应用流式细胞仪技术检测患骨髓中存在的微转移肿瘤细胞以及免疫组织化学技术等。但上述方法均存在敏感度或特异度不足的缺点。随着分子生物学的飞速发展，运用RT—PCR检测患者血液中某些特异性基因的表达已成为一种判断有无异位肿瘤细胞存在的重要手段。

3CK20在胃癌患者表达及其意义

胃癌是临床发病率较高的恶性肿瘤，根治手术的治愈率低于30%，这可能与病人手术后的淋巴系统、血循环、骨髓、干、肺等组织器官中存在者微小的细胞灶有关。以此微转移的检测对于转移早期发现、及时采取有效的综合治疗，改善预后具有相当重要的意义。CK20是细胞角蛋白的一种组分，在正常骨髓、血液淋巴结中均无表达，在几乎所有的胃肠道肿瘤中均明显表达，且在肿瘤侵袭、转移、扩散到其他组织器官时，CK20mRNA的表达始终保持稳定。Nlert[4]等报道40％的胃癌患者外周血中检测到CK20mRNA。有研究显示，正常对照及胃良性病变组均未检测到CK20mRNA表达，而胃恶性肿瘤组有48．1％的表达，证实了CK20表达的特异性。因此，外周血CK20mRNA阳性表达可作为癌细胞血行播散的标志。

Na等用RT-PCR方法检测到54．3％胃癌患者外周血有CK2OmRNA表达，表达水平与临床分期及是否有淋巴结转移有关。有研究结果也证实，有淋巴结转移组CK20mRNA的表达量及表达率均较未转移组显著升高；随着肿瘤临床分期的增加，CK2OmRNA的表达量也明显升高，同时明cK20IA的表达与肿瘤临床分期与预后密切相关，而其表达量的变化对临床判断胃肠道恶性肿瘤的转移和预后估计更具有参考价值。

因此，采用RT-PCR检测外周血中CFA、CK20基因的表达，可能是一种较理想的无创性胃癌诊断、转移检测方法，亦便于临床及时判断胃癌患者预后。

RT-PCR方法是灵活很高的检测手段，并且简便准确。CK20作为标志基因对胃肠道恶性肿瘤外周血微转移进行检测，对于早期发现微转移，及时采取综合治疗，挺高生存率正确判断预后，有着极其重要的意义。

参考文献

[1]keguchiM,OhroS,MaedaY,etal.Detectionofcancercellsintheperipheralbloodofgastriccancerpatients.IntJMolMed,2003,11(2):217-221.

[2]GuoJ,XiaoB,JinZ,etal.Detectionofcytokeratin20mRNAintheperipheralbloodofpatientswithcolorectalcancerbyimmunomagneticbeadenrichmentandreal-timereversetranscriptase-polymeraschainreaction.JGastroenterolHepatol,2005,20(8):12792-1284.

[3]MollR,SchilerDL,FrankeWW.IdentificarionofproteinIToftheintestinalcytoskdelonasnoveltypelcytokeatinwithlmusualperpertiesandexpressionpatems(J).JCelBid,1990,III(7):567.

[4]nlertB，FeinM，Ottoc，ela1．Dissminatedtumorcellsinthebloodpatientswithcancreareanindependentpredictivemarker0fpoorSprognosis[J].ScandJGastoenteml,2005,40(7):843.