HPLC测定小儿清解冲剂中梓醇及绿原酸的含量

HPLC测定小儿清解冲剂中梓醇及绿原酸的含量

刘涛吴琳

湖南省衡阳市食品药品检验检测中心湖南衡阳421001

【摘要】目的：建立测定小儿清解冲剂中盐梓醇和绿原酸含量的HPLC法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Thermo（HypersilGOLDC18），流动相：乙腈—0.1%磷酸溶液（1：99）测定地黄中梓醇含量；流动相：乙腈—0.4%磷酸溶液（13：87）测定金银花中绿原酸的含量。结果：梓醇的平均加样回收率为98.8%，RSD为1.2%；金银花的平均加样回收率为98.2%，RSD为0.8%。结论：所建鉴别方法专属性强，定量方法简便、准确，能有效地控制制剂的质量。

【关键词】小儿清解冲剂；HPLC；梓醇；绿原酸

小儿清解冲剂为收载于《中药成方制剂第八册》第24页，由金银花、连翘、地骨皮、青黛、白薇、地黄、广藿香和石膏8味组成，具有除瘟解毒，清热退烧的作用。各地零售药店都有出售，老百姓使用较多，但其标准依然老旧。为了有效控制该制剂的质量，采用HPLC法测定了地黄中梓醇的含量；金银花中绿原酸的含量。为该制剂的质量控制提供了实验依据，可进一步完善其质量标准，以确保其临床安全有效。

1.仪器与试药

岛津高效液相（SIL-20A自动进样器、LC-20AT四元泵、SPD-M20A二极管阵列检测器、CBM-20A系统控制器），MettlerAe240电子分析天平。小儿清解冲剂（哈尔滨儿童制药厂有限公司，批号为160401）；处方中药材（衡阳市药材公司）；梓醇对照品（批号110808-200305），绿原酸对照品（批号110753-200413），均由中国生物制品鉴定所提供；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它所用试剂均为分析纯。

2梓醇的含量测定[1]

2.1色谱条件：色谱柱：Thermo（HypersilGOLDC18）柱（250mm×4.6mm，5um）；流动相：乙腈—0.1%磷酸溶液（1：99）；流速：1.0ml/min；检测波长210nm；柱温：30℃；进样量10ul。

2.2对照品溶液的制备：精密称取梓醇对照品3.13mg，分别至25ml量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，用甲醇稀释至刻度，作为对照品的储备溶液。精密取对照品储备溶液1ml，用甲醇稀释至10ml的容量瓶中至刻度，即得。

2.3供试品溶液的制备：取本品研细，混匀，取约2g，精密称定，置锥形瓶中加甲醇50ml，称定重量；加热回流1.5小时，放冷，称定重量后，用甲醇补上减失的重量，摇匀，滤过；量取续滤液10ml，至水浴上浓缩近干；残渣加流动相超声溶解，再转移至10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4线性关系的考察：精密吸取上述梓醇对照品贮备溶液0.10，0.50，1.00，2.00，3.00，6.00置10ml量瓶中，加流动相至刻度。分别精密吸取10ul注入液相色谱仪中测定。线性回归方程分别为Y=37945X-323，r=0.9998，r=0.9990。结果表明梓醇进样量在0.0125～0.7512ug范围内与峰面积线性关系良好。

2.5空白试验：取不含地黄的阴性样品，按供试品溶液制备方法提取，并按上述条件检测。结果在梓醇对照品相同保留时间处无干扰峰出现。（见图1）

2.6精密度试验：取供试品溶液10ul，连续测定进样6次。结果峰面积的RSD为0.95%（n=6），说明仪器的精密度良好，供试品中梓醇含量0.1088%。

2.7稳定性试验：取供试品溶液，分别在2，4，8，10，12，24h依法测定。结果峰面积的RSD为0.85%（n=6），说明供试品溶液制备后在24小时内稳定。

2.8加样回收试验：取经上面已测得含量的供试品，添加梓醇对照品适量，按上述拟定色谱条件进行测定，根据测得量，计算加样回收率，结果见表1。

表1梓醇加样回收试验结果（n=6）

3绿原酸的含量测定[1]

3.1色谱条件：色谱柱：Thermo（HypersilGOLDC18）柱（250mm×4.6mm，5um）；流动相：乙腈—0.4%磷酸溶液（13：87）；流速：1.0ml/min；检测波长327nm；柱温：30℃；进样量10ul。

3.2对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品5.04mg，至25ml量瓶中，加50%甲醇超声溶解并稀释至刻度，作为对照品储备溶液。精密量取对照品储备溶液1ml至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。

3.3供试品溶液的制备：取本品研细，混匀，取约2g，精密称定，置锥形瓶中加50%甲醇溶液20ml，精密称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇溶液补足减失重量，摇匀，静置，取上清液滤过，即得。

3.4线性关系的考察：精密吸取上述绿原酸对照品贮备液0.10，0.50，1.00，2.00，3.00，6.00置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度。精密吸取10ul注入液相色谱仪中测定。线性回归方程分别为Y=557185X-32277，r=0.9980。结果表明绿原酸进样量在0.0202～1.2096ug范围内与峰面积线性关系良好。

3.5阴性对照品试验：取不含金银花的阴性样品，按供试品溶液制备方法提取，并按上述条件检测。结果在绿原酸对照品相同保留时间处无干扰峰出现。（见图2）

3.6精密度试验：取供试品溶液10ul，连续测定进样6次。结果峰面积的RSD为0.85%（n=6），说明仪器的精密度良好，供试品中绿原酸含量0.0422%。

3.7稳定性试验：取供试品溶液，分别在2，4，8，10，12，24h依法测定。结果峰面积的RSD为1.13%（n=6），说明供试品溶液制备后在24小时内稳定。

3.8加样回收试验：取经上面已测得含量的供试品，分别添加绿原酸对照品适量，按上述拟定色谱条件进行测定，根据测得量，计算加样回收率，结果见表2。

表2绿原酸加样回收试验结果（n=6）

4讨论

4.1测定地黄时，选择流动相甲醇—0.1%磷酸溶液、乙腈—0.4%磷酸溶液及乙腈—0.1%磷酸溶液。发现使用乙腈—0.1%磷酸溶液（1：99）流动相时，待测成分分离度较好，且峰形佳。在提取方法选择使，选择了超声提取，回流提取，以甲醇提取和50%甲醇提取。经过比较，甲醇加热回流1.5小时提取效果完全。

4.2测定金银花时，选择流动相甲醇—1%乙酸溶液、乙腈—1%磷酸溶液及乙腈—0.4%磷酸溶液。发现使用乙腈—0.4%磷酸溶液（13：87）流动相时，待测成分分离度较好，且峰形佳。在提取方法选择使，选择了超声提取，回流提取，以甲醇提取和50%甲醇提取。经过比较，50%甲醇超声30分钟提取效果完全。

4.3方法学研究证明，HPLC法稳定性、重现性好，精密度、回收率都较满意，因此，可作为小儿清解冲剂的质量控制方法。

参考文献：

[1]WS3-B-1494-93，中华人民共和国卫生部药品标准?中成药成方制剂（第八册）[S].

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典：2015年版.（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.124，221.

[3]汪程远，张浩，孟莉，等.HPLC测定地黄及其制剂中梓醇的含量[J].华西医学杂志，2003（02）：134-135.

[4]刘明斌，童巧珍，谢振宇.HPLC法测定金银花中绿原酸的含量[J].医学临床研究，2006（5）：759-760.

图1梓醇高效液相色谱色谱图