SSP－PCR检测HLA－B２７在强直性脊柱炎患者中的应用分析

SSP－PCR检测HLA－B２７在强直性脊柱炎患者中的应用分析

郭华１张海祥１赵院利１李高文２惠文斌３陈志龙３胡

郭华１张海祥１赵院利１李高文２惠文斌３陈志龙３胡军?１刘宗智?１１．陕西省人民医院陕西西安７１００６８;２．陕西省扶风县人民医院骨科陕西宝鸡７２２２００;３．延安大学陕西延安７１６０００作者简介:郭华(１９７７－),女,汉族,本科,主管检验师,陕西西安人,主要研究方向:医学检验.通讯作者:胡军,男,汉族,研究员,河南驻马店人,主要研究方向移植免疫学.刘宗智,男,汉族,主任医师,陕西扶风人,主要研究方向骨科学.

【摘要】目的对SSP－PCR检测HLA－B２７在强直性脊柱炎患者中的应用价值进行评价分析,为今后的临床诊断工作提供有价值的参考信息.方法选择２０１４年１月－２０１５年６月间我院收治的符合临床诊断标准的强直性脊柱炎患者６８例作为研究对象,另选择同期健康体检者７０例作为健康对照组,分别采取流式细胞术和SSP－PCR技术对受试者HLA－B２７进行检测,而后对检测结果进行统计分析.结果流式细胞术与SSP－PCR技术对强直性脊柱炎患者的检测结果比较差异不具有统计学意义(P＞０．０５);强直性脊柱炎患者HLA－B２７检测水平与健康对照组比较差异显著(P＜０．０５);强直性脊柱炎患者HLA－B２７阳性率明显高于对照组(P＜０．０５),且不同年龄、不同性别者检测结果也有所不同(P＜０．０５).结论HLA－B２７与强直性脊柱炎之间存在明显的相关性,经SSP－PCR方法对HLA－B２７进行检测的准确性较高,可为临床诊断和治疗提供可靠的参考依据.【关键词】强直性脊柱炎;人类白细胞抗原－B２７;流式细胞术;SSP－PCR【中图分类号】R５９３【文献标识码】B【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０７３９－０１

强直性脊柱炎为一类主要对骶髂关节、脊柱关节造成损伤的慢性炎症疾病,临床表现、CT检查为主要诊断手段,然而临床实践中发现,这一诊断方式的敏感性相对较低,从而导致强直性脊柱炎患者早期诊断困难,治疗被延误,预后效果受到严重影响.人类白细胞抗原HLA为组织细胞上受遗传控制的一类个体特异性抗原,分布较广,在人类皮肤、肾、脾、肺、肠和心脏等各个组织器官有核细胞的细胞膜上均可出现.B２７是HLA－B位点上的一个重要的等位基因,其特异性表达与多种临床疾病相关.现已发现,HLA－B２７抗原的表达与AS、ReA和AAU等,关系十分密切,其中强直性脊柱炎与HLA－B２７相关性明显.现阶段,HLA－B２７的临床检测手段中,主要包括微量淋巴细胞毒试验、酶联免疫吸附试验、流式细胞术等,这些方法在临床得到了广泛应用,但均存在不同程度的缺陷和诸多不便之处.序列特异性引物－聚合酶链反应(PCR－SSP)检测法,其敏感度较高,特异性好,近年来被广泛应用在HLA－B２７的检测,应用前景良好[１].本次研究对SSP－PCR检测HLA－B２７在强直性脊柱炎患者中的应用价值进行评价分析,为今后的临床诊断工作提供有价值的参考信息.

１资料与方法

１．１一般资料研究中资料来源于我院收治的符合临床诊断标准的强直性脊柱炎患者及其同期健康体检者,分别选择其中的６８例和７０例作为研究对象,强直性脊柱炎患者中,包括有男３９例,女２９例,年龄１０－８２岁,平均(３８．４±１４．３)岁;健康对照组中包括有男４５例,女２５例,年龄１５－６９岁,平均(３７．９±１２．５)岁.所有强直性脊柱炎患者均符合临床诊断标准[２],所有受试者均知情并自愿接受临床检查.１．２方法选择２０１３年１月－２０１５年６月间我院收治的符合临床诊断标准的强直性脊柱炎患者６８例作为研究对象,另选择同期健康体检者７０例作为健康对照组,分别采取流式细胞术和SSP－PCR技术对受试者HLA－B２７进行检测,然后对检测结果进行统计分析.１．３数据处理在数据处理工作中,采取SPSS１８．０统计学软件进行处理,患者年龄等计量资料经(X±s)形式表示,统计分析中,计量资料对比接受t检查,计数资料对比接受Χ２检验,P＜０．０５视为差异存在统计学意义,P＜０．０１视为差异存在显著统计学意义.

２结果

２．１强直性脊柱炎患者与健康对照组检测结果比较经统计发现,采取SSP－PCR技术检测,强直性脊柱炎患者HLA－B２７检测水平与健康对照组比较差异显著(P＜０．０５);强直性脊柱炎患者HLA－B２７阳性率明显高于对照组(P０５).详见表１.

３讨论

人类白细胞抗原(HLA)是组织细胞上受遗传控制的一类个体特异性抗原,分布于人类皮肤、肾、脾、肺、肠和心等组织器官有核细胞的细胞膜上.B２７是HLA－B位点上的一个重要的等位基因,其特异性表达与多种临床疾病相关.１９７３年Brewerton和Schiosstein发现HLA－B２７抗原与强制性脊柱炎(AS)有非常强的相关,它是AS的临床诊断依据之一.现有证据表明,HLAB２７抗原的表达与AS、反应性关节炎(ReA)和急性前葡萄膜炎(AAU)等均密切相关.尤其在AS中,该疾病的诊断以往主要依据临床症状和放射线检查,但早期由于受累关节未发生明显改变,容易漏诊或误诊,一般患者要在发病后７年左右才能被诊断,故早期诊断成为争取其良好预后的关键[３].HLA－B２７的临床检测手段主要有序列特异性引物聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验、微量淋巴细胞毒试验、流式细胞术等.而从分子(等位基因)水平上探讨疾病的发病机制,诊断和鉴别、预测预后、预防疾病、指导治疗已成为主要的临床医疗技术之一.序列特异性引物聚合酶链反应(SSP－PCR),它是一种新的基因多态性分析技术,是根据基因座某一碱基的差异设计一系列引物,在确定某一碱基为该等位基因所特有的基础上设计一对引物,两引物３’端的第一个碱基均与等位基因特异碱基互补,特异性引物仅扩增与其相应的等位基因,而不扩增其他的等位基因.因此,PCR扩增产物有无是鉴定特异性等位基因的基础,这种特异性的PCR扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳检出.同时SSP－PCR法检测HLA－B２７还具有:(１)留取标本不受时间的限制,陈旧血、冷冻血也可用于DNA的提取;(２)DNA的遗传稳定性可长期保存以供复核或送其它实验室验证;(３)技术成熟,判断结果客观准确,特异性强,灵敏度高,稳定性好;(４)实验操作快速、简便,适合在我国现有条件下一般实验室开展.本次研究中出于对SSP－PCR检测HLA－B２７在强直性脊柱炎患者中的应用价值进行评价分析,为今后的临床诊断工作提供有价值的参考信息的目的,对我院收治的符合临床诊断标准的强直性脊柱炎患者和健康体检者分别采取不同手段进行HLA－B２７检测,并对检测结果进行了对比分析,结果发现,流式细胞术与SSP－PCR技术对强直性脊柱炎患者的检测结果比较差异不具有统计学意义;强直性脊柱炎患者HLA－B２７检测水平与健康对照组比较差异显著;强直性脊柱炎患者HLA－B２７阳性率明显高于对照组,且不同年龄、不同性别者检测结果也有所不同.这一结果与相关文献[４]报道结果相似,由此证实,HLA－B２７与强直性脊柱炎之间存在明显的相关性,经SSP－PCR技术对HLA－B２７进行检测的准确性较高,可为临床诊断和治疗提供可靠的参考依据,值得关注并推广.参考文献[１]刘波,邱萌．HLA－B２７表达阴性的早中期强直性脊柱炎患者调查[J]．中国医药导报,２０１１,８(１２):６３－６４．[２]孙芳．人类白细胞抗原－B２７检测在临床诊断强直性脊柱炎中的应用价值[J]．国际检验医学杂志,２０１０,３１(１１):１３０１－１３０２．[３]SHEEHANNJ．HLA－B２７:what’snew[J]．Rheumatology(oxford),２０１０,４９(０４):６２１－６３１．[４]RUDWALEITM．Newapproachestodiagnosisandclassificationofaxialandperipheralspondyloarthritis[J]．CurrOpinRheumatol,２０１０,２２(０４):３７５－３８０．