RP-HPLC测定不同产地麦芽中的麦黄酮含量

RP-HPLC测定不同产地麦芽中的麦黄酮含量

江奋霞营大礼朱毛毛

江奋霞1营大礼1朱毛毛2

(1江苏连云港市第二人民医院222023;2江苏如东粮食局粮油质量检测中心226400)

【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）23-0062-02

【摘要】目的采用RP-HPLC法测定不同产地麦芽中麦黄酮的含量。方法色谱柱:ZorbaxC18(2.1×100mm，3μm)，流动相为甲醇-0.1%冰醋酸，检测波长350nm，进样量20μL，柱温为30℃，流速为0.2mL•min-1分析时间为10min。结果麦黄酮线性范围为0.0032～0.1002mg•mL-1(r=0.9998)；平均回收率为100.68％(RSD=2.02%)；安徽产地麦芽中麦黄酮含量最高，广东最低。结论不同产地麦芽中麦黄酮含量差异较大。

【关键词】麦芽麦黄酮高效液相色谱法含量测定

RP-HPLCdeterminationoftricininMaltsfromdifferentregionsFenXiajiang1,YingDali1,ZhuMaomao2(1..Thesecondpeople’shospitalofLianyungang,Lianyungang222023,2.Grain&oilqualitytestcenterofRudongCountyGrainBureau,Jiangsu,Rudong,226400)

【Abstract】objective:TocomparethecontentdifferenceoftricininmaltsfromdifferentregionsbyRP-HPLC.method:ZorbaxC18（2.1×100mm,3μm）wasutilizedfordetermination.Themobilephasewasmethanoland0.1%glacialaceticacid（45:55）,thedetectionwavelengthwas350nm,theinjectionvolumewas20μLwithaflow-rateof0.2mL•min-1.Thecolumntemperaturewas30℃.Analysistimewas10min.results:Thecalibrationcurvesoflinearrangeoftricinwas0.0032～0.1002mg•mL-1(r=0.9998);theaveragerecoverieswas100.68％(RSD=2.02%).ThecontentoftricininmaltfromAnhuiwashighestandGuangdong’swaslowest.conclusion:Thereisadifferenceontricincontentinmaltsfromdifferentregions.

【Keywords】MaltTricinRP-HPLCContentdetermination

麦芽为大麦HordeumvulgareL．的成熟果实经发芽干燥而得。在临床上生麦芽常用于健脾和胃、通乳[1]。麦芽主要含有α--淀粉酶，β-淀粉酶，催化酶，过氧化异构酶，大麦芽碱大麦芽胍碱A、B，腺嘌呤，胆碱，蛋白质，氨基酸，维生素D、D、E，细胞色素C，白栝楼碱等。麦黄酮为麦芽中主要的黄酮类成分，研究表明麦黄酮具有改善小鼠的学习记忆[1]，抗氧化[2]，保护糖尿病动物的神经功能[3]，保护肾缺血[4]等药理活性。市场上流通的麦芽的药效存在着差异，因此，本研究采用RP-HPLC法比较市场上流通的不同产地麦芽的麦黄酮含量的差异，为比较麦芽的质量差异提供实验依据。

1实验部分

1.1仪器与试药

Agilent1200型高效液相色谱仪，DAD检测器，四元泵，自动进样器，在线脱气系统。麦黄酮对照品购自上海康九化工有限责任公司（纯度≥98%）。不同批次生麦芽由连云港市第二人民医院药库提供。甲醇冰醋酸为色谱醇(TEDIA);水为乐百氏纯净水;其余试剂为分析纯。

1.2方法与结果

1.2.1色谱条件色谱柱:ZorbaxC18(2.1×100mm,3μm)，流动相为甲醇-0.1%冰醋酸=45:55，检测波长350nm，进样量20μL，柱温为30℃。分析时间为10min。色谱图见图1。

1.2.2溶液的配制

精密称取麦黄酮对照品适量，加10mL甲醇分别配成浓度为0.1002mg•mL-1的麦黄酮溶液。取不同产地生麦芽，精密称取1.0g，用20mL甲醇超声提取(2次，2h/次)，滤过，合并滤液，60℃旋蒸至一定体积，加甲醇定容至10mL，即得供试品溶液。过0.45μm滤膜，按分析条件进样分析。

图1生麦芽(A)、麦黄酮对照品(B)和阴性空白(C)HPLC图

Fig.1TheHPLCfingerprintsofmalt,tricinandblankcontrol

1.2.3线性关系考察取配制好的对照品溶液，麦黄酮依次用甲醇稀释成0.1002、0.0501、0.0250、0.0125、0.0063、0.0032mg•mL-1，按色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归处理。麦黄酮的回归方程为Y=94667X+101.75，线性范围为0.0032～0.1002mg•mL-1(r=0.9998)。

1.2.4精密度试验取同一样品溶液，连续进样6次，每次20μL，测定峰面积，计算麦黄酮峰面积的RSD值分别为2.33%。结果表明仪器精密度良好。

1.2.5重复性试验精密称定同一产地生麦芽样品6份，按供试品溶液制备方法制备，测定麦黄酮峰面积，计算峰面积的RSD值分别为2.71%，表明此方法重复性良好。

1.2.6稳定性试验取同一样品溶液，分别于0，2，4，6，8，12，24h依法测定，考察其稳定性。测定峰面积，麦黄酮平均峰面积的RSD值分别为2.15%。结果表明供试品溶液在24h内稳定。

1.2.7加样回收率试验称取已知麦黄酮含量的生麦芽9份，每份1.0g，分别加入样品中麦黄酮（0.0032mg•mL-1）1.6mL、1.4mL、1.2mL(n=9)，制备供试品溶液，得供试品溶液。按上述色谱条件进样分析，结果见表1。

表1麦黄酮的加样回收率结果

1.3含量测定

取不同产地麦芽，制备样品溶液，测定麦黄酮的含量。结果见表2。从表中可以看出，不同产地麦芽中麦黄酮含量存在着显著的差异。其含量次序依次为：安徽＞浙江＞四川＞江苏＞河北＞湖北＞湖南＞江西＞广西＞河南＞广东，结果表明，虽同为市场上所用的药材，但是其麦黄酮含量存在着差异，这可能是其临床上药效差异的原因之一。

表2不同产地样品中麦黄酮的含量

2讨论

麦黄酮是中药材麦芽中的重要活性成分，目前对其测定主要是HPLC方法[5,6]。在以往的研究中，未见对其不同产地的麦芽进行HPLC成分比较。因此，在本研究中，从市场上采取了11个产地的麦芽样本，建立HPLC分析麦黄酮方法，比较之间麦黄酮含量的差异，从而为质量控制提供实验依据。

本研究中，流动相组成的选择分别考察：乙腈-水；甲醇-水；乙腈-0.1％磷酸；甲醇-磷酸；甲醇-0.5%冰醋酸；乙腈-0.1%冰醋酸；甲醇-0.1%冰醋酸溶液梯度洗脱。通过比较发现甲醇-0.1%冰醋酸流动相使目标峰与其他峰有效分离，且分离度较好，无其他峰干扰，故选择甲醇-0.1%冰醋酸为流动相。分别考察了215nm，252nm，280nm，330nm，350nm波长下色谱分离情况。从研究结果看，350nm波长为最佳检测波长。本研究建立的分析方法，能为生麦芽的质量控制提供参考依据。

不同产地麦芽中麦黄酮含量差异的主要原因包括：①不同的生长条件，包括土壤，水质，光照，天气等因素；②采制工艺，包括采收时间及原药材的预处理等因素；③药材的存储条件，包括湿度、温度、时间等。这些因素都会对生麦芽中麦黄酮含量构成影响。因此，不同产地的生麦芽中麦黄酮的含量存在着较大差异。

参考文献

[1]凌俊红,王楠,任玉珍,等.HPLC法测定大麦芽中麦黄酮[J].中草药,2005,36(11):1632-1634.

[2]许钢.苦荞麦黄酮提取最佳条件及抗氧化研究[J].中国食品学报,2008,8(3):78-83.

[3]陶胜宇,徐峰,闫泉香.苦荞麦黄酮对糖尿病大鼠神经功能的影响[J].实用药物与临床,2006,9(4):219-221.

[4]李玉田,徐峰,闰泉香.苦荞麦黄酮对家犬肾缺血的影响[J].中药材,2006,29(2):169-172.

[5]周惠燕,李士敏.竹叶中麦黄酮的分离鉴定及含量测定[J].中药材,2006,29(12):1301-1302.

[6]赵善仓,赵领军,谷小红,等.超高效液相色谱串联质谱法测定小麦籽粒中麦黄酮[J].分析化学,2009,37(6):873-876.