用中药肉汤保存菌种的研究

用中药肉汤保存菌种的研究

庞璐1苏盛通1陈惠业1吴博文2许潘健1

庞璐1苏盛通1陈惠业1吴博文2许潘健1（1玉林市卫生学校广西玉林537000;2玉林市第一医院广西玉林537000）

【摘要】目的探讨简易效佳的菌种保存方法，以便临床、教学和科研工作之用。方法用中药芡实、山药分别加入营养肉汤中作为菌种保存液，对23种细菌进行滤纸冰冻法保存。结果保存2年后取出培养，各菌存活率达100%。结论芡实或山药肉汤作为菌种保存液，用滤纸冰冻法可较长时间保存菌种。

【关键词】培养基中药菌种滤纸保存

在医学微生物学检验、教学及科研工作中，菌种的保存是一项必不可少的工作。为了方便取用，大多数实验室采用斜面与半固体转代培养的常规方法保存菌种，但此法存在菌种保存时间短、易污染和易变异等缺点。为此，我们采用中药肉汤保存液对23种菌株进行滤纸冰冻法保存，效果满意。现将方法和结果介绍如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1菌种：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、福氏志贺菌、宋内志贺菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、新生隐球菌、白假丝酵母菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、白喉棒状杆菌（都来自武汉生物制品研究所）。微溶球菌、微球菌（来自原湛江医学院），小肠结肠炎耶尔森菌、嗜盐孤菌（来自原广西卫校），炭疽芽胞杆菌（来自广西医科大学），肺炎链球菌（来自玉林市红十字会医院）。

1.2.2滤纸片：新华定性滤纸剪成约35mm×3mm，高压蒸汽灭菌后备用。

1.1.3中药液取购自中药店的优质芡实、山药，分别研磨成粉后分别用蒸馏水配成100g/L浓度的芡实液和山药液，高压蒸汽灭菌后备用。

1.1.4营养肉汤（杭州天和微生物试剂有限公司生产）按常规方法制成，分装每瓶50ml，高压蒸汽灭菌并经无菌试验后备用。

1.1.5中药肉汤保存液:取上述芡实液（或山药液）1份与上述营养肉汤1份混匀，分别称为芡实肉汤、山药肉汤。将上层液分装到无菌小试管中，每管0.1ml，贴上菌名。

1.2方法

用接种环无菌操作挑取18～24h新鲜培养之各菌菌苔2至3环于上述相应保存液管中磨匀，再用无菌小镊子取上述滤纸片8条放入试管中吸取菌液,塞紧无菌橡皮塞,贴好标签，装入槽状活动封口塑料袋中,放置冰箱的冷冻室保存(温度为－18±1℃)

2结果

保存两年后取上述两种中药肉汤保存液中各菌滤纸条一条接种于营养肉汤管（苛养菌接种于血清肉汤管），培养24h后，再转种血平板培养。结果23个菌株全部存活，存活率达100％。取肉汤增菌培养物及其转种血平板上的各菌菌落进行革兰染色并做相应的生化反应，结果与原菌特性一致。

3讨论

3.1中药的作用山药[1]含薯蓣苷元、多糖、糖蛋白、游离氨基酸、淀粉、黏液质等。芡实[1]也含淀粉、蛋白质、脂肪、糖类、多种维生素和无机盐。二者营养丰富，都是药食兼用。推测其粘质性状及其营养作用可有效包裹保护菌体，利于细菌生存。

3.2保存简易，配方低廉保存液的制备取材容易，配方简单。芡实和山药都是药源充足、价格低廉的中药。二者保存菌种效果相当，可取其一。滤纸片低温法保存菌种，无需特殊营养添加剂，只需极少量的中药液与等量营养肉汤，开支少。存放于普通冰箱冷冻室中即可。无需低温冰冻干燥保存的全套设备，一般实验室都可做到。若用常规方法则需根据不同的菌种选用不同的培养基，并且传代周期短，费工费时。

3.3复苏方便复苏时夹取一条菌液滤纸条放入肉汤管培养即可，其余立即放入冰冻，并不会造成反复冻融。保存一次，可供多次使用，灵活简便。减少常规保存方法因经常转种容易造成污染与变异的机会。

3.4保存时间较长除了保存液中芡实、山药的粘质性状及其营养作用能有效包裹保护菌体外，尚因少量的菌液只吸附到滤纸条的一半，造成相对干燥环境，立即放入冰冻。一定程度地仿效低温快速干燥冰冻保存环境，故保存期较长。本实验室以往用常规方法保存的甲型链球菌、肺炎链球菌经常死亡，尤其经历了较长的暑假，待秋季期开学，往往因为菌种的死亡而影响教学实验的开出。限于本课题研究的时间，这些中药培养基对实验菌种的最长保存期限、、反复融冻耐受的最多次数以及多次传代保种是否存在变异等问题，有待进一步探讨。

总之，用中药改良培养基保存菌种，对于挖掘中药的用途与菌种保存的方法，都开拓了新路径。因其简便、价廉、效佳，有兴趣的实验室不妨一试。

参考文献

[1]王锦鸿，陈仁寿.临床实用中药辞典(M).北京：金盾出版社，2003，57：362.