EGCG对人肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响及机制

EGCG对人肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响及机制

汤明忠

内蒙古呼和浩特市第一医院010030

[摘要]目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)作用肝癌细胞体外增值与凋亡的机理，探讨抗癌功效。方法：在体外培植人肝癌细胞，将EGCG作用在培植好的肝癌细胞，对肝癌细胞增殖能力用MTT法观察；对肝癌细胞凋亡用流式细胞仪观察。结果：肝癌细胞的增值力在表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)作用下显著降低，而肝癌细胞凋亡的显著增高结论：表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有一定抗癌的功能，建议临床推广应用。

关键词EGCG；肝细胞；体外增殖；凋亡影响；机制

目前茶叶是公认的健康饮品，经过研发发现广泛的功效，其中抗癌功效被人们愈加关注，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是从茶叶中提取的，具有生物活性，研究表明是发挥一定抗癌功效的主要生物活性物质，需要我们在进一步的研究与开发，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对抗癌机制研究发现针对癌细胞增值和凋亡两方面有一定的功效。肝癌在亚洲和非洲是一种患病率极高的肿瘤，其死亡率占癌症死亡率的第三位。手术治疗是肝癌的有效治疗方式，但是因为肝癌细胞的高转移性使得术后病人的术后生存率非常低[1-2]。肝癌的发生机制复杂，目前尚未明确，经探讨的主要机制有原癌基因失活，抑癌基因激活，癌基因的突变、癌细胞增殖分化凋亡异常等都参与癌症的发生、发展、转变及其他变化，人们在不断攻克癌症的研究中，发现SMMC-7721细胞增殖能力与凋亡参与肝癌的调控，而表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对这两种癌细胞有一定的功效，得出茶叶具有一定的抗癌功能。

1.材料与方法：

1．1一般资料细胞株：体外培植肝癌细胞；试剂:MTT;提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG);流式细胞仪凋亡试剂盒;

1．2方法细胞培养：在含10%特级胎牛血清、青霉素和链霉素各100U/ml、pH7.3的DMEM培养液；37℃，饱和湿度，5%CO2的培养箱中培养培植SMMC27721细胞。将对数生长期的SMMC-7721细胞以2.0×104/ml浓度接种于96孔培养板中，每孔180μl，培养箱中孵育24h；待细胞贴壁后，将细胞分为以下几组：空白对照组,阴性对照组,不同EGCG浓度组(加入后终浓度)2、4、8、16、32、64、128、256μg/ml,每孔加入处理物20μl后孵育72h;72h后吸去各孔中的培养液,换上200μl无血清的DMEM培养液,同时加入20μl的MTT(5mg/ml),轻振培养板,放回培养箱再孵育;4h后细胞内黄色的MTT被还原为紫蓝色结晶;吸尽每孔中的液体,加DMSO200μl/孔,振荡器上振荡10min,酶标仪测量每孔570nm处的吸光光度值A，MTT法对肝癌细胞生长检测。将SMMC27721细胞接种于6孔板，每孔接种细胞3×104/ml。37℃、5%的CO2培养，24h加入不同浓度的EGCG，继续培养48h后，收集细胞，70%乙醇固定，-20℃保存。检测时，离心弃乙醇，酸盐缓冲液(PBS)洗涤1次，加入PI及RNase，4℃避光，采用PI染色法，流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。

1.3统计学方法:数据用(x±s)表示,定量数据用方差分析和t检验作统计学处理。结果采用SPSS11.5软件包分析。

2结果人肝癌细胞生长在表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的作用下表现出抑制作用，通过MTT法检测；表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)浓度的升高,对SMMC-7721肝癌细胞的抑制也是增加的；流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡增强人肝癌细胞的凋亡在EGCG的作用下有显著变化，通过流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡是加强的。

3讨论

肝癌是现在威胁人类健康的主要杀手，对人们的生命构成严重的危害。人们谈癌色变，防癌抗癌是人们目前从未停止过一场持久战，人们在寻找研发抗癌药物一直坚持不懈，癌症的发病机制复杂，涉及到人体多个系统，让人们在研究上困难重重，人们希望能够研究出既能杀死癌细胞，又能够对人身体没有伤害的抗癌药物是目前人们在研发抗癌药物上一直追求的目标。每个人的机体内都存在着癌基因，正常情况下癌基因是处于不表达状态，并发挥着维持人体的正常生理活动的功能。与人体细胞生长、增值、凋亡及血管生成等重要生理过程相关的是通过人体内的AKT信号通路来完成的，同时这个信号通路也参与癌症的发病机制。

绿茶主要成分有茶多酚、咖啡碱、脂多糖等[3]。具有多种活性功能，被广泛应用于食品、生物化学、卫生保健、食品加工、日用化工、环保、医药、生物制药等领域。绿茶主要生物活性成分是茶多酚，茶多酚中活性成分是表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)，经研究具有抗癌细胞的功效，在这次实验中通过MTT和流式细胞检测了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌细胞的增值与凋亡的功效。EGCG对人SMMC-7721细胞的增殖功能有显著的抑制作用，对癌细胞的凋亡有显著的增加；表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的浓度增加，对癌细胞的增值抑制功能也增加，因此，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人SMMC-7721细胞抑制功能表现量效关系，通过MTT和流式细胞技术证明了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌细胞具有抑制其增殖和促进凋亡的功能，从细胞水平证明表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有一定的抗癌功能。基于发现茶叶的众多功效，还有待于进一步开发茶叶的潜在的功能。

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作者简介：汤明忠，男，1984年9月出生，籍贯:内蒙古兴安盟，2011年毕业于内蒙古医科大学肿瘤外科，现工作于内蒙古呼和浩特市第一医院，从事部门:急诊，研究方向:乳腺，肝癌