霍乱弧菌检测的方法与结果探究

霍乱弧菌检测的方法与结果探究

梁芬

（普洱市疾病预防控制中心；云南普洱665000）

摘要目的：探究分离培养法和胶体金免疫层析法，两种霍乱弧菌检测方法和结果差异。方法：从2015年至2016年，选取608例霍乱弧菌样本，同时使用分离培养法和胶体金免疫层析法进程检测，并就两种方法的结果符合率进行比较。致性为优，符合率定位100%。结果：608例霍乱弧菌样本中，培养法阳性20例，胶体金免疫层析法检测结果与培养法一致为阳性；培养法阴性588例，胶体金免疫层析法检测585例为阴性，3例为阳性，经培养法复核，确定3例为阴性。结论：胶体金免疫层析法作为一种新兴的霍乱弧菌检测方法，可以快速完成霍乱弧菌的检测，且具有较高的准确性，将其应用于霍乱弧菌检测，可有效提高疫情防控质量。

关键词霍乱弧菌；检测的方法；结果

霍乱弧菌（V.cholera）是霍乱的病原体，属于弧菌科，是革兰氏阴性菌的一种。霍乱弧菌主要分为埃尔托生物型（EL-Torbio-type）和古典生物型（Classicalbiotype）两种。培养法是卫生部规定的霍乱弧菌标准方法，适用于各种霍乱弧菌标本，检测结果准确、可靠，但整体检测时间相对较长。近几年，胶体金免疫层析法被提出用于霍乱弧菌标本检测，与培养法相比，胶体金免疫层析法检测更加快速。本文针对两种检测方法进行对比，实验结果如下。

1材料与方法

1.1材料

pH8.6碱性蛋白胨水（杭州微生物试剂厂）；TCBS（硫代硫酸盐枸橼酸盐胆盐琼脂）；霍乱弧菌O1群多价血清和小川稻叶O139分型血清（浙江省疾病预防控制中心）；霍乱弧菌胶体金免疫快速检测卡（郑州博赛生物技术有限公司）。所有试剂均在有效期以内。

1.2样本来源

本组试验中608例霍乱弧菌样本，均收集于疑似霍乱感染者粪便以及霍乱疫情采集标本。试验中检测为阳性的霍乱弧菌样本，均送至相关疾病预防控制中心进一步确认（其中呕吐物2份，肛拭18份）。其余腹泻患者肛拭988分，均通过培养法检测验证为阳性。

1.3方法

根据《霍乱防治手册》（第五版）规定进行病原菌分离培养和血清鉴定；胶体金免疫层析法操作方法如下：一，采取适量以增菌的碱性蛋白胨水滴入检测卡中，均匀摇晃，观察5min内的试验结果。如出现两条紫红色线条，即反应带线和质控带线，可确定为阳性；仅出现一条紫红色线条，即反应带，则表示为阴性；如没有出现线条或仅出现反应带，则表示检测结果无效。同时使用培养法和胶体金免疫层析法，对608例霍乱弧样本进行检测，同时对比检测结果。检测结果以培养法为标准。

1.4数据分析

本次研究使用SPSS19.0统计学软件对相关数据进行分析与处理，计数资料以（n，%）表示，再行卡方检验，若P＜0.05，则差异在统计学当中存在意义。

2结果

608例霍乱弧菌检测样本中，培养法检测阳性20例，均是0139群霍乱弧菌，使用胶体金免疫层次法检验与培养法检测一致；培养法阴性588例，胶体金免疫层析法检测585例为阴性，3例为阳性，经培养

法复核，确定3例为阴性。

实验结果显示，应用培养法进行霍乱弧菌检测，可准确得出结果，正确率为100%。使用胶体金免疫层析法进行检测，阳性检测正确率为100%，阴性检测正确率约为99.49%。两种检测方法一致性为优。

3讨论

霍乱弧菌（V.cholera）是霍乱的病原体，属于弧菌科，是革兰氏阴性菌的一种。霍乱弧菌主要分为埃尔托生物型（EL-Torbio-type）和古典生物型（Classicalbiotype）两种。上述两种霍乱弧菌类型，仅在个别生物学性状方面存在一定的差异，在免疫学性和形态等方面并无明显差异，在流行病学特征及临床病理方面无本质差别。历史记录1817年至今，世界范围内共发生了七次世界性的霍乱，其中六次为古典生物型（Classicalbiotype）导致的，一次为埃尔托生物型（EL-Torbio-type）所致。自然条件下，人类是唯一的易感者。因此，加强霍乱弧菌加测方法的探讨，具有重要意义。

培养法为卫生部指定霍乱弧菌检测标准，本组试验中以此检测结果为标准，对胶体金免疫层析法进行对比评价。针对胶体金免疫层析法检测，阴性样本中3例阳性结果，以培养法为标准。胶体金免疫层析法正确率为99.49%，与培养法检测结果一致性评价为优。试验证明胶体金免疫层析法在霍乱弧菌检测中，具有较高的准确性，具有较高的应用价值。

培养法检测具有较高的准确度，但整体检测周期过长，霍乱是一种烈性传染疾病，患者患病后发病较为迅速，且致死率高，应用培养法进行霍乱预防具有一定的局限性。实验证明胶体金免疫层析法，可快速、准确地进行霍乱弧菌检测，检测方法简单易行，检测结果与培养法相比具有较高的一致性，将其应用于霍乱弧菌检测，可有效提高检测效率，具有较高的应用价值。但本组试验中选取数据基数不够庞大，试验结果可能存在一定误差，胶体金免疫层析法在霍乱弧菌检测中的实际应用价值，还需进一步增大样本量进行试验确定。

结语

胶体金免疫层析法作为一种新兴霍乱弧菌检测技术，具有较高的准确性，检测结果与培养法结果一致性对比为优，且整体检测周期较短，具有较高的应用价值。

参考文献

[1]吴谦,黄晓蓉,郑晶等.用分子生物学方法检测孵化前后鳖受精卵中的霍乱弧菌[J].江苏农业科学,2011,39(06):75-77..

[2]申小娜,张京云,付秀萍等.O1群E1Tor型霍乱弧菌溶原性测定的机理研究[J].中华实验和临床病毒学杂志,2016,30(02):199-203.

[3]胡兴娟,沈飚,江玲丽等.海产品中霍乱弧菌实时浊度LAMP检测方法的建立[J].河南农业科学,2014,08(10):127-130.

[4]张霞,高琳,王淞等.交叉引物等温扩增检测霍乱弧菌方法的建立[J].食品研究与开发,2015,36(17):108-112.

[5]张政,金大智,朱水荣等.多重荧光定量PCR甄别霍乱弧菌方法的建立[J].中华流行病学杂志,2010,31(9):1026-1029.