水飞蓟宾纯化工艺研究

水飞蓟宾纯化工艺研究

李世凯吴晓霞吴晓云

李世凯吴晓霞吴晓云

（盘锦天源药业有限公司124000）?

【摘要】水飞蓟属于一年或二年生菊科草本植物，其提取主要成分水飞蓟素有着很广泛的应用，尤其是医学方面意义重大。以往水飞蓟素主要用于肝炎、胆囊炎中，但随着对其研究越来越深入，发现其除了对肝细胞有修复作用，同时还能对乳腺癌、前列腺癌、子宫癌细胞生长与分化产生抑制作用，此外对于皮肤过敏、牛皮癣等也有很好的效果，故而可用于美容方面。水飞蓟素主要活性成分当属水飞蓟宾，为了提高其应用效果，就应提高水飞蓟宾的纯化工艺，本文对此进行探讨。

【关键词】水飞蓟水飞蓟素水飞蓟宾纯化工艺

【中图分类号】R931.71【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）11-0168-02

水飞蓟也称为老鼠筋、水飞雉等，属于菊科类植物，高1.2米左右，种子可入药，原产地为西欧与北非，近几年我国陕西、黑龙江、甘肃等地有了广泛的栽培。研究显示水飞蓟属于优良的护肝植物，其主要成分为水飞蓟素，对于肝炎、胆囊炎等有很好的疗效，并且目前在美容、抗癌等方面也有了一定的应用。水飞蓟素主要活性成分为水飞蓟宾，要想得到该成分，就必须先将水飞蓟素提取出来，然后加以纯化。关于水飞蓟素的提取方法很多，包括乙酸乙酯提法与醇提法及超声波法等，而水飞蓟宾的纯化方法不同，则会得到不同的纯度。有研究显示，采用甲醇等有机溶剂纯化水飞蓟宾，所得的样品经过紫外线检测并无杂质峰，而纯度可达到97%及以上，从而可以有效分离与纯化水飞蓟宾，但是该类试剂的缺点在于毒性很强。为此，就需要不断研究与探索，寻找更好的纯化方法，本文针对聚酰胺柱层析结合乙醇-水洗脱进行了分析，认为安全性很高，同时经HPLC检测可知，纯度能达到98%。希望通过本次研究探讨，能对相关研究产生借鉴作用。

1仪器和材料及试剂

水飞蓟宾纯化之前应先进行水飞蓟素提取，故而需要的仪器与材料包括：电子天平（如METTLERTOLEDOEL-240万分之一型）、超声波清洗器（如昆山超声仪器有限公司生产的KQ-100DE型）、紫外可见分光光度计（如ShimadzuUV-2401PC型）、高效液相色谱仪（如DIONEXultimate3000型）。

实验仪器：美国SSI-PC2000高效液相色谱仪，Model3860型超声波清洗脱气机，PH计（PHS-2C），电子天平（JD100-3），电热恒温水浴锅，旋转蒸发仪（R201C）等。

此外，需要的试剂则包括水飞蓟种子榨油后剩余的残渣、水飞蓟对照品、分析纯（甲醇、95%乙醇、醋酸乙醇、丙酮、100目聚酰胺粉末、聚酰胺薄膜等）。

2水飞蓟素提取方法

2.1有机溶剂提取法

称取4份（每份20g）水飞蓟种子榨油后剩余的残渣，分别加入各自100ml的甲醇、乙醇、醋酸乙酯及丙酮溶液中，密封塞紧后，浸泡过夜，经超声波法提取45分钟后过滤，将滤渣加入到前述相应溶剂中再次提取，将两次滤液合并，放于60℃中浓缩并烘干，最后得到水飞蓟提取物，称重并记录。

2.2碱提酸沉法

称取5g水飞蓟种子榨油后剩余的残渣，根据预试验结果加入25ml的0.5mol/L的NaOH溶液中，经超声波法提取45分钟，并进行离心处理，离心时间0.5小时，离心速率为每分钟4000r，离心完毕取其上清液，而残渣则再次提取一次，合并两次上清液后，根据预测结果，将溶液pH调整到pH=3，再次离心，取其沉淀物，并放于60℃行烘干处理，完成后对提取物进行称重并记录。

3含量测定方法

3.1水飞蓟素测定

将水飞蓟宾对照品称取6.1mg后，利用80%乙醇进行定容到50ml为止，从而配置出水飞蓟宾对照品母液，将其稀释为不同浓度，之后采用分光光度法进行测定，测定其288nm处的吸光值，并根据所得作标准曲线。采用同样的方法称取不同方法所得的水飞蓟提取物100mg，加入80%乙醇后行超声波辅助溶解→过滤→定容（50ml），所得液体为提取物母液，将其稀释50倍后行全波长扫描，同样记录288nm时的吸光值，并根据标准曲线来计算出提取物的水飞蓟素含量。

3.2水飞蓟宾测定

水飞蓟宾含量的测定方法选用HPLC测定法，高效液相柱为Arichrombond-C18，而流动相设置为甲醇：甲酸-水=47：53，检测的波长设定为288nm，柱温控制在35℃，分别取对照品与母液，进样的体积为5μl，根据对照品出峰时间与峰面积，从而计算出水飞蓟宾含量。

4水飞蓟宾纯化方法

称取前述采取甲醇提取的水飞蓟种子榨油后剩余的残渣所得的物品4g，装入聚酰胺柱（ФxL=5cm×47cm），先利用丙酮-水溶液（浓度50-80%）进行梯度洗脱，同时合并浓缩70-75%洗脱部分；浓缩所得物品上聚酰胺柱（ФxL=2.5cm×40cm），行乙醇-水溶液（浓度30～95%）梯度洗脱，同时合并浓缩70%乙醇洗脱部分，并重复上一次的聚酰胺柱情况，合并浓缩70%乙醇洗脱部分，最后采取重结晶法便可得到水飞蓟宾的纯品。

5总结

本次研究中涉及到了四种有机溶剂，包括甲醇、乙醇、醋酸乙酯、丙酮，其中从相关研究中总结可得，采用甲醇提取水飞蓟素与水飞蓟宾可以取得最好的效果，其次当属丙酮与乙醇，效果最差的当属醋酸乙酯。但是，甲醇与丙酮自身具有一定的毒性，而且丙酮也容易发生挥发，故而生产操作过程中安全性不高，加之产品的残留溶剂很容易对人体产生伤害等，故而目前大部分实际生产及临床研究中，多数建议采用乙醇作为水飞蓟素的提取溶剂。

此外，在相关实验研究中还发现，采取碱提酸沉法提取水飞蓟宾时，容易造成该物质内部结构的变化，从而使得有效成分降低，所得的杂质就会相应增多，故而在水飞蓟素提取中不宜采取碱提酸沉法处理。

总的来说，聚酰胺柱层析结合乙醇梯度洗脱进行纯化，在一定程度上能得到很高纯度的水飞蓟宾，同时大量的研究证明其属于有效、经济且安全的分离纯化方法，在实际生产与临床研究中值得推广。

参考文献

[1]任冰如,赵友谊,徐柏衡等.水飞蓟素提取和水飞蓟宾纯化的研究[J].时珍国医国药,2012,23(3):655-656.

[2]李玉山,王经安.水飞蓟素提取纯化工艺研究[J].化学工程师,2009,14(2):58-59。