探讨痰涂片抗酸染色冷染法、热染法的效果比较

探讨痰涂片抗酸染色冷染法、热染法的效果比较

阿斯艳?玉山

阿斯艳?玉山

（新疆阿克苏地区维吾尔医医院检验科新疆阿克苏843000）

【摘要】目的：比较痰涂片抗酸染色冷染法、热染法的效果。方法：采用冷染法和热染法进行抗酸染色，对2种不同的抗酸染色方法进行了比对分析。结果：同一份痰标本在取痰的部位、痰膜的厚薄、痰膜的大小几乎一致的情况下,冷染法和火焰加热染色法的检测结果两者间具有显著性差异。结论：采用火焰加热染色法进行抗酸染色，只要操作者把握好加热时间和温度，避免火焰加热法易出现的缺点，染色效果与痰片的保存时间均优于冷染法。

【关键词】抗酸染色；冷染法；热染法

【中图分类号】R44【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）17-0067-02

抗酸染色法1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。抗酸染色的步骤包括初染、脱色、复染三步，肺结核病人痰标本直接涂片找抗酸杆菌有着重要的诊断价值，而抗酸染色法则是其中关键之一[1]。因此，寻找一种易于控制实验条件和标准化操作的抗酸染色方法非常必要[2]。我们采用冷染法和热染法进行抗酸染色，对2种不同的抗酸染色方法进行了比对，具体操作方法报道如下。

1.材料与方法

1.1材料

留取我院住院的肺结核病人经抗酸加热染色法染色阳性的痰标本，制成标准厚涂片备用。

1.2抗酸染色试剂

由珠海贝索生物技术有限公司生产的结核菌染色液。

1.3方法

已制备好的阳性痰涂片每10张为一组,共分两组第一组用冷染法：涂片经酒精灯火焰加热固定后，滴加石碳酸复红溶液于各涂片上，不加热静置10min，水洗。加3%盐酸酒精脱色液，脱色至涂片上看不见红色为止，水洗。加碱性美蓝复染液，染0.5～1min，水洗，自然干燥后镜检。

第二组用火焰加热法：涂片经酒精灯火焰加热固定后，滴加石碳酸复红溶液于各涂片上，在火焰高处徐徐加热，加热温度出现蒸汽为止，避免干涸静置5min。加3%盐酸酒精脱色液，脱色至涂片上看不见红色为止，水洗，加碱性美蓝复染液，染0.5～1min，水洗，自然干燥后镜检。

1.4染色结果和效果标准

菌体染上红色为阳性，未染上红色为阴性。染色效果：着色较浅或因着色不牢固，在室温保存后退色为不良。

2.结果

同一份痰标本在取痰的部位、痰膜的厚薄、痰膜的大小几乎一致的情况下,冷染法和火焰加热染色法的检测结果两者间具有显著性差异。

2.1冷染法

抗酸杆菌着色较浅，染色效果不良。阳性痰片在常温保存30天后观察保存效果，发现冷染法阳性片已退色，不易常温保存。

2.2火焰加热染色法

抗酸杆菌着色鲜明，染色结果均为阳性。阳性痰片常温保存30天后观察保存效果，阳性片未退色[3-4]。

3.讨论

抗酸染色从制片到染色影响因素很多。冷染法：在简化操作步骤,减少染液用量及对环境保护上均优于热染法[5]。但冷染法初染时（加3%石碳酸复红溶液）因温度较低，着色较浅菌体难以着色，通过增加染色时间使菌体可以着色，但着色不很牢固，阳性痰片在常温保存不良，容易退色[6-7]。染色效果远远差于热染法。原因可能是结核分枝杆菌的细胞壁含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面。脂质主要包括磷脂、脂肪酸和蜡质等成分。所以采用冷染法分枝杆菌菌体细胞一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色[8]。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。痰涂片是指将痰液涂到玻璃片上去检查。检验科的医生把从患者呼吸道取到的痰液标本拿去涂片，再进行染色，然后在显微镜下查看。如果痰中有细菌就容易被查出，甚至可以粗略地分辩出是哪一类或哪一种细菌。所以痰涂片检查是呼吸内科一种简单而廉价，可以迅速得到初步结果的常用检查方法。

齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。

火焰加热染色法：在加热时间和温度上很难把握，但采用火焰加热法染色能使染液穿透到结核分枝杆菌菌体细胞，使菌体着色很牢固，染色效果均较佳。能保证阳性涂片检出率。而且不易退色。

通过实验研究，我们观察到采用火焰加热染色法进行抗酸染色，只要操作者把握好加热时间和温度，避免火焰加热法易出现的缺点，染色效果与痰片的保存时间均优于冷染法。

【参考文献】

[1]童莉,孟繁荣,刘志辉等.抗酸染色阳性痰涂片刮削物扩增分枝杆菌rpoB基因的初步探索[J].实用医学杂志,2014,21(11):1811-1814.

[2]廖鑫燕,冉宇,边士昌等.床旁优化痰涂片检查对呼吸机相关性肺炎早期诊治的价值[J].中华危重病急救医学,2014,03(12):879-883.

[3]夏辉,赵冰,宋媛媛等.全国结核病实验室网络痰涂片镜检室间质量保证结果分析[J].医学研究杂志,2013,42(4):21-26.

[4]葛学顺,陈维开,陶晓军等.痰涂片革兰染色对重症监护室医院获得性肺炎早期诊治的意义[J].中国感染控制杂志,2013,12(1):24-26.

[5]罗丹,黄敏莹,刘飞鹰等.壮族人群痰涂片阳性肺结核患者抗结核药物治疗的不良反应及其影响因素[J].中华传染病杂志,2012,30(10):613-617.

[6]李娅,易富,缪春健等.初治肺结核与肺部感染患者5项检测指标的特点[J].国际检验医学杂志,2015,(19):2912-2913.

[7]孙晓霞,方巍,赵蕾等.痰涂片对ICU呼吸机相关性肺炎耐药菌治疗的指导意义[J].中华医院感染学杂志,2013,23(22):5627-5628.

[8]刘洁,林珊,林伟等.痰涂片、TB-Ab、TB-DNA在肺结核诊断中的应用比较[J].齐齐哈尔医学院学报,2014,11(17):2510-2511.