聚合酶链式反应在微生物检测中的应用

聚合酶链式反应在微生物检测中的应用

梁卉周敏欧阳坚皮克闻静杨英

江西省萍乡市卫生学校337200

【摘要】DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。随着科学技术以及经济的发展，微生物的检验准确性在临床和生活健康以及饮食上都有着不可忽视的作用。本研究主要通过对聚合酶链式反应进行介绍，针对其特点深入研究其在微生物检验中的应用。

【关键词】聚合酶链式反应；双链DNA；DNA聚合酶

在医学临床上，微生物的检验一直是临床诊疗的重点和难点，以前的微生物检验结果不合格、错误检测等情况经常出现。但是随着近几年医学技术发展，临床微生物技术也在不断的发展，检验微生物的仪器也在不断的更新，研究人员和检验人员的专业素质也在不断的提高，同时临床检验工作也得到了完善。合格、准确的微生物的检验可以帮助临床医生了解患者的致病菌和病源机理，在对患者疾病的诊断和治疗中可以提供重要的帮助。所以，对于微生物的检验，虽然现在的技术是有所提高，但是要想获得真实、可靠的微生物检测结果，对于微生物的检验过程还是需要强化和谨慎对待。并且在医学学术上，有相关的文献指出，要提高检验科检查结果的准确性可以从质控这方面入手。聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加[1~3]。聚合酶链式反应在临床微生物检验可以为感染性疾病的诊断提供其病学原的依据，对于安全、合理、可靠的治疗感染性疾病具有重要的指导意义。本研究主要立足于聚合酶链式反应检验微生物的应用以及对微生物检验的作用上进行深入分析。

聚合酶链式反应在水微生物检验中的应用

在水体微生物检测中的应用目前PCR技术应用于水体微生物检测研究的重点是给水的微生物检测,尤其是近年来引起人们广泛关注的病原微生物,诸如军团菌、贾第虫)、隐孢子虫及一些肠道病毒等的PCR检测方法研究。研究的内容包括DNA物质提取方法的改进、样品中PCR抑制物的去除、PCR方法的改进与比较、扩增产物的分析技术等。与传统方法相比,PCR方法不仅检测时间短、灵敏度高,还可以检出一些依靠培养法不能检测的微生物种类。PCR方法已在粪便污染指示菌及病原细菌、病毒、军团菌和病原原生生物等的检测中有了比较深入而广泛的研究,取得了较好的应用成果[4~5]。聚合酶链式反应还被运用于肠道病毒的检测，研究,发现PCR法不仅可将检测时间从培养法的3～4周缩短到8h,还大大地提高了灵敏度和选择性。Fricker等报道的一种用于检测病毒的PCR新方法可在24h内得到测定结果,并且极其灵敏。他们开创的一种基于PCR的E.coli.检测方法可以在24h内完成对99种不同的环境水样检测,取得了与标准方法100%吻合的检测结果,该方法已列为泰晤士河的例行检测项目。利用与核酸探针技术结合的PCR方法检测粪便污染指示菌,有效地排除了一些抑制物的干扰,可以对E.coli等进行快速测定[6]。

2.聚合酶链式反应检测微生物的重要意义。

常规检测方法受采样及分析条件的影响极大,结果准确性差,检测时间长,并且有些种类(如厌氧菌)分离困难,而PCR技术不仅克服了这些缺点,还为一些生物参数应用于水处理工艺的自动控制提供了可能。由于水处理过程中生物氧化作用是由多菌种共同作用的结果,因此各不同菌群之间的相互作用至关重要。由PCR技术发展而带动的基于多态性技术在微生物生态系的研究取得了迅速进展。PCR技术具有快速、灵敏、准确和简便等特点,有传统方法无可比拟的优势。PCR及其相关技术的研究应用和不断推广必将提高水体微生物的检测水平,促进水工业的发展。在医学上帮助疾病诊治，微生物技术的提高能够更有效的帮助人类进行传染病的监控、检测，另外对于医院的消毒处理的质量控制和卫生细菌学等也能起到重要的作用。聚合酶链式反应在微生物检测中的应用，为取得较好的检查效果，可以为微生物的检验提供科学的指导[7]。

3.结语

随着现在信息技术的发展，临床上的微生物检测技术也在想自动化、信息化微机化等方面发展，并慢慢的成为了感染性疾病的诊断和治疗的重要依据。但是，随着环境的变化，感染疾病和细菌的种类也在不断地额增多，微生物检测技术对于这些变化还有未取得完善的品质，而造成该种结果的是临床标本的阳性检出率不高。所以对于提高微生物阳性检测率是至关重要的，提高微生物检测的质量，能有效的帮助临床感染性疾病的控制。经本研究表明：在临床上，对于不同临床标本微生物的检验，检验医师需要针对不同时段、不同类型的标本进行分析，并且要熟练的掌握微生物检验的相关知识和技术，提高检验的准确率，从而为疾病诊治提供更准确的理论依据。在工业上也具有非常大的潜在价值，聚合酶链式反应检测微生物在生活中具有非常重大的意义。

【参考文献】

[1]马军,邱立平,冯琦.聚合酶链式反应在微生物检测中的应用[J].中国给水排水,2002,01:34-36.

[2]王栋,王旭,陈卓.聚合酶链式反应技术在食品微生物检测中的应用进展[J].福建医科大学学报,2016,03:213-216.

[3]赖军华,韦柳华,杨柳光,刘欢,王承辉,莫松,莫小源.多重聚合酶链式反应在脓毒血症病原体检测中的应用[J].中华医院感染学杂志,2014,17:4409-4411.

[4]吴燕岷,陈莉丽.聚合酶链式反应在3种牙周病原菌检测中的应用[J].国外医学.口腔医学分册,2001,02:100-103.

[5]陈竹,陈元彩.PCR-DGGE在制浆造纸废水处理微生物检测中的应用[J].造纸科学与技术,2006,06:128-131.

[6]张烛仙,包玲,陈兆军.冷凝集试验和聚合酶链式反应在支原体肺炎检测中的应用[J].河南医药信息,1997,12:11-12.

作者简介:梁卉性别:女出生日期:1985.3学历:硕士研究生籍贯:江西萍乡民族:汉职称:讲师研究方向:微生物及分子生物学方向所在科室:医学检验教研室工作单位:萍乡市卫生学校