GC法测定3,4,5-三甲氧基苯甲醛含量和有关物质

GC法测定3,4,5-三甲氧基苯甲醛含量和有关物质

葛晓强李亚珍高旭

葛晓强李亚珍高旭(北大国际医院集团西南合成制药股份有限公司重庆401137)

【摘要】目的：建立用GC法测定3,4,5-三甲氧基苯甲醛含量和有关物质的分析方法。方法：采用HP-1701型色谱柱（30m×0.53mm×5um），以高纯氮气作为载气，将待检测样品配制成10mg/ml的溶液（二氯甲烷溶解），各成分在色谱柱中分离进入FID检测器检测；柱温：220℃；检测器温度：300℃；进样量：2ul。用百分面积法计算主含量和杂质含量。结果：TMBA峰与溴代杂质峰的分离度良好，相邻峰之间分离度良好。在1-12ug/ml的浓度范围内3,4,5-三甲氧基苯甲醛和溴代杂质峰面积与浓度形成良好的线性关系；精密度试验中溴代杂质百分含量RSD为0.01﹪，TMBA含量的RSD为2.0%；高中低三个浓度的平均回收率分别为101.1%，111.4%，106.0%；5-Br杂质定量限低于0.02﹪；耐用性试验中在色谱条件发生变化或样品处理条件发生变化检测的主峰含量和溴代杂质的相对标准偏差≤15.0﹪。结论：该方法选择性好、精密度高、线性关系良好、准确度高、定量限低，耐用性高。

【关键词】3,4,5-三甲氧基苯甲醛溴代杂质气相色谱

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）12-0326-01

前言：3,4,5-三甲氧基苯甲醛中文别名:TMBA；是合成抗菌增效药甲氧苄啶的重要中间体。溴代杂质全称3-Br-4,5-二甲基苯甲醛。经分析发现甲氧苄啶中某杂质{5-(3-溴代-4,5-二甲氧基苄基)嘧啶-2,4-二胺}是由3,4,5-三甲氧基苯甲醛中的溴代杂质衍变而来，欧洲药典甲氧苄啶专论中对该溴代杂质命名为杂质F，并规定限度为小于0.1%。因此必须通过控制3,4,5-三甲氧基苯甲醛中溴代杂质含量来控制甲氧苄啶中的杂质F水平。

1.仪器与试药

1.1.仪器Agilent6890气相色谱仪，梅特勒-托利多AE240型电子分析天平，AFZ-6000-U分子生物型超纯水机。

1.2.试药试剂3,4,5-三甲氧基苯甲醛对照品由某化工厂提供，溴代杂质对照品购自TCI公司（目录号B3130，批号UIZA）；二氯甲烷为色谱纯。

3-Br-4,5-二甲基苯甲醛3,4,5-三甲氧基苯甲醛

图1结构式

2.色谱条件及系统适用性试验

2.1色谱条件色谱柱：30m×0.53mm×5um固定相为14%的氰丙基苯基-86%的甲基聚硅氧烷；检测器：FID；载气流度:2.2ml/min；(根据实际情况调整)，汽化室温度：280℃；(根据实际情况调整)，柱温：220℃；(根据实际情况调整)，检测器温度：300℃(根据实际情况调整)，进样量：2ul。

2.2系统适用性试验分别准确称取3,4,5-三甲氧基苯甲醛对照品和溴代杂质标准品各100mg于100ml容量瓶中，用二氯甲烷定容，摇匀。再精密吸取此液1.0ml,用二氯甲烷稀释至10.0ml作为系统适用性溶液；进样0.2ul，重复六针；TMBA峰和溴代杂质峰的分离度大于2.5；6次进针TMBA峰面积的相对标准偏差小于10.0%。见图2:

图2系统适用性试验溶液色谱图

3.供试品溶液的配制

称取样品100mg，用二氯甲烷溶解至10.0ml，摇匀。

4.方法学验证

方法专属性验证准确称取溴代杂质标准品100mg于100ml容量瓶中，用二氯甲烷定容，摇匀作为贮备液。精密吸取此贮备液1ml于10ml容量瓶中，用二氯甲烷定容，摇匀。称取样品100mg，用二氯甲烷溶解至10.0ml，摇匀。精密吸取5-Br杂质贮备液1ml于10ml装有100mgTMBA的容量瓶中，用二氯甲烷定容，摇匀。按2.1项下的色谱条件分别进一针样品溶液，标准溶液，样品加标准溶液进行色谱分析。主峰与肩峰的分离度大于0.5，所有相邻杂质峰的分离度大于1.5。见图3样品加标准图

图3：样品加标准图

4.1.杂质回收率吸取4.1项下的杂质贮备液配制参比液(1)、（2）、（3）含溴代杂质浓度分别为8ug/ml；10ug/ml；12ug/ml；精密称取1.0g样品置于100ml容量瓶中，再吸取4.1项下的杂质贮备液0.8ml，1.0ml，1.2ml用二氯甲烷稀释至刻度,摇匀到制得样品加标准溶液A、B、C。按2.1项下色谱条件分析，计算溴代杂质的回收率。结果高中低三个浓度的平均回收率分别为101.1%，111.4%，106.0%；

4.2.精密度试验选定三名分析人员按2.2项进行系统适用性试验，并配制样品溶液每份样品分析两次。每名分析人员的系统适用性试验均符合要求；所有样品测试结果的3,4,5-三甲氧基苯甲醛含量RSD（n=6）为0.01﹪；溴代杂质含量RSD(n=6)为2.0﹪。

4.3.线性考察配制5-Br杂质和TMBA混合液，浓度为1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、10ug/ml、12ug/ml杂质混合溶液；照2.1项下色谱条件进行色谱分析，分别以TMBA或溴代杂质浓度为横标，峰面积为纵坐标，作线性图。TMBA的回归方程为：y=6.46x-0.82，r=0.9991；溴代杂质的回归方程为：y=4.89x-0.81，r=0.9991。在1-12ug/ml的浓度范围内3,4,5-三甲氧基苯甲醛和溴代杂质峰面积与浓度形成了良好的线性关系。

4.4.定量限选取4.4项下的浓度为1ug/ml溴代杂质和TMBA混合液，进行6次分析，在满足峰高精密度条件下，定量限为0.01﹪。

4.5.方法耐用性为考察3,4,5-三甲氧基苯甲醛色谱条件的选择性，选定一批样品（批号27-051/L80701），配制样品溶液10mg/ml，分别将测试条件作一下改动：流速变化：2.0ml/min；2.4ml/min；柱温变化：215℃；225℃；样品放置时间的影响：48小时和72小时；同一批样品在色谱条件发生变化或样品处理条件发生变化时所得到的系统适用性试验都符合要求。且主峰含量和5-Br杂质的相对标准偏差均小于15.0﹪。

参考文献

[1]美国药典附录<1225>；

[2]美国药典附录﹤1078﹥；

[3]美国药典附录﹤621﹥；

[4]欧洲药典EP7.0专论“甲氧苄啶”（P3144～P3146）。