ELISA一步法检测HBsAg假阴性结果分析

ELISA一步法检测HBsAg假阴性结果分析

陈静

陈静

（沈阳市第四人民医院110031）

【摘要】目的探讨采用ELISA一步法检测导致出现(HBsAg)钩状效应（HBsAg假阴性）的原因。方法选择我院健康体检者150例，其中，HBeAg阳性HBsAg阴性标本35例,倍比稀释标本后分别应用ELISA二步法和一步法检测HBsAg,观察两种方法的阳性率及不同稀释比与吸光度的变化。结果检测35份标本原血清结果,一步法HBsAg均为阴性,二步法均为阳性；一步法,大部分标本从原血清至1:7均为阴性，吸光度值OD为0.076,1:17稀释后OD值逐渐升高,从1:126至1:1023吸光度变化不大(OD值:3.30±0.15),1:2058后OD值逐渐下降；二步法从原血清到1:266吸光度变化不大(OD值:3.20±0.17)),1:524后OD值逐渐下降。结论ELISA二步法可避免HBsAg浓度过高致钩状效应所引起的HBsAg检测结果假阴性。

【关键词】酶联免疫吸附(ELISA)实验乙肝病毒表面抗原HBsAg钩状效应

【中图分类号】R441【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）06-0198-01

酶联免疫吸附(ELISA)实验[1],按其操作步骤分为一步法和二步法。一步法因为操作更简单而深受广大用户的青睐,但是在一步法实际工作中，我们发现ELISA一步法钩状效应明显[2]，就会出现HBsAg假阴性，易造成漏检现象。同时，我们采用二步法检测HBeAg及抗-HBc双项阳性血清标本中的HBsAg，将标本倍比稀释后检测吸光度OD值的变化，对比一步法出现钩状效应，引起HBsAg假阴性结果出现的原因。

1.材料与方法

1.1一般资料采集我院健康体检人群150例，其中，对于检查乙肝病毒标志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe及抗-HBc),共发现HBeAg和抗-HBc双项阳性而HBsAg阴性标本35例,年龄21～38岁。分离血清,低温保存。

1.2标本来源标本取自我院正常体检者150例标本。

1.3试剂HBsAg试剂盒使用北京金豪公司和上海科华公司，通过国家批批检。

1.4主要仪器采用上海科华KHBST-360免疫检测酶标仪，上海科华大容量KHBST-36洗板机。

1.5监测方法血样本在常规下用一步法和两步法分别进行检测，操作严格按试剂说明书进行。

1.5.1一步法监测：即包被反应孔加待测标本后直接加入酶结合物,37e水浴30min,洗涤,待显色。

1.5.2二步法监测：将一步法加样和加酶结合物分步进行,即包被反应孔加待测标本后,37e水浴30min,洗涤干净,然后加酶结合物,37e水浴30min,再洗涤,待显色。

1.5.3弱阳性质控物吸光度测定：用一步法连续测定20次,质控物OD/阴性对照OD,2.7>OD>2.1为在控,否则重测,取吸光度平均值,待测稀释标本OD值在质控物吸光度内为该标本的最低稀释比或最高稀释比。

1.5.4稀释标本吸光度测定：用生理盐水稀释HBeAg阳性HBsAg阴性标本,分别用一步法及二步法测定各不同稀释比的吸光度值OD[3],OD值最接近质控物吸光度OD值为该标本的最高稀释倍数。

2.结果

2.1弱阳性质控物吸光度值：连续20次测定吸光度,平均值为0.125(0.116～0.147)。

2.2HBV标志物检测结果:150例HBeAg阳性HBsAg阴性标本HBV标志物模式均表现为HBsAg、抗-HBs及抗-HBe三项阴性,HBeAg和抗-HBc双阳性。应用二步法检测HBsAg均为阳性。

2.3标本稀释比与吸光度的变化关系:一步法检测,与质控物吸光度比较,从开始出现弱阳性为该标本最低稀释比，82份标本1：7出现弱阳性,其余68份1:15出现弱阳性,随着稀释度的增加,其吸光度OD值迅速升高,从1:126至1:1023吸光度变化不大(3.30±0.15),1:2058后OD值逐渐下降,1:65546稀释仍显弱阳性；二步法检测,从原血清到1:266吸光度变化不大(3.20±0.17),1:514后OD值逐渐下降。

3.讨论

乙肝病毒表面抗原（HBeAg）存在于乙肝病毒Danna颗粒的核心部分，HBeAg存在表明乙肝病毒（HBV）处于增殖和复制状态，具有强烈的传染性[2]。从实验的结果看出，一步法在检测中32例出现了假阴性结果，而两步法检测结果呈阳性，这是一种叫做前带现象(或HOOK效应)引起，即在检测高滴度抗原(抗体)时出现的极低水平阳性和假阴性结果。而采用二步法检测可完全消除“HOOK”效应，降低漏检率。

参考文献

[1]张善弟，黄宁．酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的质量保证[J]．检验医学与临床，2009，6(1)：48.

[2]郑怀竞,韩松,主编.临床检验ELISA指南[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1994:11～41.

[3]李凤侠，范亚敏，范永丽．酶联免疫吸附试验一步法检测ＨＢｓＡｇ的分析体会[J].中国误诊学杂志，2009，9(16)：3875.