蛇胆陈皮胶囊含量测定方法研究

蛇胆陈皮胶囊含量测定方法研究

樊伟华付向红

樊伟华付向红（江西药都樟树制药有限公司江西樟树331200）

【摘要】目的建立蛇胆陈皮胶囊（蛇胆汁、陈皮（蒸））的含量测定方法。方法采用HPLC法对制剂中橙皮苷进行了含量控制。结果本品中橙皮苷的含量测定线性范围为0.296ug-1.48ug（r=0.9999）,平均回收率为98.9%（RSD=1.96%，n=5）。结论含量测定方法准确可行，重复性好，作为药品标准可有效地控制蛇胆陈皮胶囊的质量。

【关键词】蛇胆陈皮胶囊HPLC橙皮苷含量

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）29-0138-02

蛇胆陈皮胶囊质量标准收载于部颁标准中药成方制剂第3册，由蛇胆汁、橙皮苷陈皮（蒸）两味药组成。原标准只有一个针对陈皮的显微鉴别和一个蛇胆的薄层鉴别，故认为原标准对产品质量可控性差。曾拟采用高效液相色谱法，以牛黄胆酸钠为检测指标，建立含量测定方法，因目标成分含量低而未采用，故现采用高效液相色谱法对制剂中的橙皮苷进行了定量控制，方法简便、灵敏，可作为控制和考察本品内在质量的方法。

1.仪器与试药

岛津LC-10ADvp溶剂输送泵，SPD-10Avp检测器，CTO-10Asvp柱温箱，Phenomenex4.6×250mm色谱柱，startorius电子天平；色谱纯甲醇，其它试剂均为分析纯；橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，编号为110721-201014）。其他试剂均为分析纯，蛇胆陈皮胶囊由江西药都樟树制药有限公司提供。

2.色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%磷酸溶液（40：60）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长为283nm，柱温35℃。照此条件分析，橙皮苷对照品和制剂中的其它组分均能达到基线分离（如下图），且分离度均大于1.5，理论板数按橙皮苷峰计算均大于3000。

对照品HPLC色谱图供试品HPLC色谱图缺陈皮的阴性样品溶液HPLC图谱

3.波长选择

取橙皮苷对照品的50%甲醇溶液，置UV-8500紫外仪中扫描，结果橙皮苷在283nm处有一吸收峰，结合《中国药典》2010年版一部陈皮药材[含量测定]项下的检测波长也为283nm，故选择283nm为检测波长。

4.流动相的选择

经过对比多种不同流动相的分离效果，认为采用甲醇-0.1%磷酸溶液（40：60）为流动相，橙皮苷与其它组分分离完全，峰形好，结果满意。

5.对照品溶液的制备

取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇溶液制成30ug/ml的溶液，即得。

6.供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品，研匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，取出，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取精密量取续滤液25ml，蒸至约5ml，通过已处理的D101大孔吸附树脂（内径1.5cm，长20cm）,先以水100ml洗脱，弃去水液，再用乙醇100ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇溶液使溶解，并定量转移至25ml的量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，摇匀，滤过，即得。

试验过程中，考察了洗柱用乙醇量对含量测定结果的影响，结果表明，洗脱用乙醇的量为100ml时，样品中的橙皮苷便可充分提出，故确定乙醇的用量为100ml。

7.空白试验

按处方取不含陈皮的其它药味，依制法制成阴性样品，再依供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，按供试品溶液制备方法测定，结果阴性样品溶液不含橙皮苷，表明阴性对照对本法无干扰。

8.线性关系的考察

精密称取在橙皮苷对照品14.8mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀（148ug/ml），再分别精密吸取适量，用50%甲醇溶液稀释成不同浓度的对照品溶液。分别精密吸取不同浓度的对照品溶液各20ul，依法测定峰面积，结果见表1。

表1线性关系考察结果

橙皮苷浓度(ug/ml)14.829.644.459.274

橙皮苷的量（ug）0.2960.5920.8881.1841.48

橙皮苷的峰面积1511430.22970176.84431425.55950000.97437505.7

以峰面积为纵坐标，橙皮苷的量为横坐标绘制标准曲线,计算得回归方程：Y=5010803X+10515，R=0.9999。表明橙皮苷在0.296ug-1.48ug范围内具有良好线性关系。

9.稳定性试验

取本品（批号：20100501），按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，并依法每隔一定时间进样测定一次峰面积，在放置8小时内，峰面积基本一致。表明橙皮苷的50%甲醇溶液在放置8小时内稳定。

10.精密度试验

精密吸取橙皮苷对照品溶液(29.6μg/ml)20μl，重复进样5次，测定峰面积，结果橙皮苷峰面积积分值的相对标准偏差小于2%，表明此法精密度良好。

11.重复性试验

分别取同一批蛇胆陈皮胶囊样品（批号20100501）5份，依法测定橙皮苷的含量。样品中橙皮苷含量的相对标准偏差为1.13%，表明此法重现性良好。

12.加样回收试验

采用加样回收法。取同一批已知含量的蛇胆陈皮胶囊（批号：20100501，含量4.3mg/g）精密称取样品0.25g各5份，分别定量加入橙皮苷对照品适量，按正文中含量测定项下方法测定橙皮苷的含量。结果见表2，平均回收率为98.9%，相对标准偏差为1.96%，表明此法回收充率良好。

表2回收率试验结果

取样量(g)样品中橙皮苷量(μg)加入橙皮苷量(μg)实测橙皮苷量(μg)回收率(%)平均回收率(%)RSD

(%)

0.25041076.711602220.598.6

0.24681061.111602223.4100.2

0.24311045.411602218.2101.1

0.25031076.311602221.298.7

0.25671103.911602217.596.098.91.96

13.样品含量测定及限量规定

取本品5批，依法测定橙皮苷含量，结果见表3。

表35批蛇胆陈皮胶囊样品含量测定结果

批号橙皮苷含量（mg/g）

201005012.7

201006022.8

201012013.4

201102013.2

201103013.9

由于不同产地及来源的陈皮中橙皮苷的含量有高有低，结合以上5批样品中橙皮苷的含量测定结果，暂将本品中橙皮苷（C28H34O15）的含量定为每克不得低于2.5mg，即每粒（0.3g）不得低于0.75mg。

14.结论

蛇胆陈皮胶囊是由蛇胆汁、陈皮（蒸）两味药组成，因方中蛇胆汁处方量小，其中成份牛磺胆酸钠含量也小；而陈皮（蒸）主含橙皮苷，故采用高效液相色谱法对橙皮苷作了含量控制，方法简便、灵敏、专著性强，可以作为控制本品质量的方法。

参考文献

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