心肌肽肽图的研究

心肌肽肽图的研究

张海松1陈文吟1孔祥平1尤玉琴1陈阳述1许可1李

张海松1陈文吟1孔祥平1尤玉琴1陈阳述1许可1李杰2（1解放军第四五八医院肝病研究所广东广州510602）（2大连珍奥药业有限公司辽宁大连116620）

【摘要】目的：研究高效液相色谱法测定心肌肽肽图，用于质量控制。方法：用C18色谱柱，甲醇：水（10：90）为流动相，流速0.8ml/min，波长254nm，测量5批心肌肽的保留时间和峰面积。结果：共九个色谱峰，保留时间的批间相对标准偏差（RSD）小于1%，峰面积的相对标准偏差（RSD）小于1.5%。结论：该方法可用于心肌肽的质量控制。

【关键词】心肌肽肽图

心肌肽是从乳猪心脏中提取的多肽类活性物质，能促进多种因素下损伤心肌的修复。2005年被国家食品药品监督管理局批准为一类化学药，用于心脏外科手术围术期心肌保护的辅助药物[1]。

由于该药为混合多组分注射剂，最初申报的质量标准中无组份控制指标,新药审评专家提出在质量标准中应有控制指标保证制备工艺及产品质量的稳定性和一致性，对此我们用HPLC法对心肌肽进行了组份测定,结果表明,该方法可用于心肌肽质量的控制。

1材料与方法

1.1材料

注射用心肌肽（批号：20040602，20040705，20040901，20041001，20050101，规格20mg/瓶，大连珍奥药业有限公司）；甲醇（色谱纯，Honewell）

Agilent1100高效色谱仪及工作站（美国），HypersilODS色谱柱（40mm×250mm,5µm）。

1.2色谱条件

参考心肌肽研究和质量标准中鉴定项的色谱条件[2]，确定色谱条件为十八烷基硅烷键合硅胶柱（C18柱），流动相为甲醇：水（10：90），流速0.8ml/min，柱温26℃；检测波长254nm。

1.3样品处理及测定

取五批样品，分别加流动相制成每1ml中含多肽1mg的溶液，进样20µl，每批样品重复进样五次，连续三天，记录色谱图。

2结果

五批样品的色谱图中均出现9个归一化法峰面积大于1%的色谱峰，9个峰的峰面积之和占总面积的98%以上，色谱图见图1。不同批同一色谱峰保留时间和峰面积（均为归一化法得到的峰面积）的相对标准偏差（RSD）见表1和表2，同一批样品不同天数色谱峰保留时间和峰面积的相对标准偏差见表3和表4。下表中的峰号均按出峰时间顺序编号。表1-4结果表明,该方法测定5批心肌肽的9个色谱峰(占归一化法峰面积的98%以上)峰面积的批内批间相对标准差不大于1.4%，保留时间的批内批间相对标准差不大于0.9%，说明该方法重现性好，同时该法操作简便和经济，适用于心肌肽组份质量控制。

3讨论

心肌肽是从乳猪猪心中提取的多组份混合物，虽然有生物活性、含量测定等指标控制质量，但该类药品受原材料来源、提取过程步骤多等因素影响，组份较易变化，因此，为了保证产品质量的稳定性和一致性，应有肽图检查控制产品质量。但生化提取产品的该类研究未见公开报道，因此该研究在心肌肽报批生产的审评会上获专家认同订入质量标准，在最近几年生产的近七十批产品中对产品质量控制起到了非常重要的作用，二十多所三甲医院临床使用该产品，无严重不良反应报告，疗效肯定[3，4]。实验结果表明,该方法测定5批心肌肽的9个色谱峰(占归一化法峰面积的98%以上)峰面积的批内批间相对标准差不大于1.4%，保留时间的批内批间相对标准差不大于0.9%，说明该方法重现性好，同时该法操作简便和经济，适用于心肌肽组份质量控制。至于九个色谱峰中哪些为活性组份，将在后续研究文献中报道。

参考文献

[1]张海松,孔祥平,许可.心肌肽含量的测定方法[J].中国生化药物杂志，2007，28（2）：104-106.

[2]国家食品药品监督管理局.YBH32282005注射用心肌肽[S].2005.

[3]史春霞，张磊，汪炜健，等.心肌肽素在心脏手术中对心肌的保护作用的临床研究[J].中国循环杂志，2005，20（5）：381-384.

[4]史春霞，李立环，任发成，等.心脏手术围术期应用注射用心肌肽素对心肌保护作用的多中心临床研究[J].中华胸心血管外科杂志，2007，23（4）：231-233.