生物标准品（对照品）活性验证方法探讨

生物标准品（对照品）活性验证方法探讨

张德波

张德波（成都市药品检验所四川成都610045）

【中图分类号】R-331【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）22-0008-02

中国药典2005年版二部和2010年版二部附录中收载的生物检查方法如升压物质、降压物质检查法，以及生物测定如升压素、肝素、缩宫素生物测定法，对标准品或对照品溶液可继续使用的条件规定是不同的。2005年版药典规定“如无沉淀析出，可在3个月内使用”，而2010版药典则改为“经验证保持活性符合要求的条件下，可在3个月内使用”。这两版式药典的规定有无质的差别，以及标准品和对照品的活性应当怎样来验证，笔者在这里谈谈自己的粗浅认识，供大家参考。

1两版药典不同规定的质的差别

药典中收载的这几种检查或测定方法所涉及的标准品或对照品，其溶解性都很好，并不会因为贮存时间延长而发生溶解性降低析出沉淀。溶液中有沉淀析出一般都是由于溶液中长菌了，产生菌落状的团块。发生这样的情况就表明溶液已经变质，不能再使用。这种情况很容易观察到，在工作中也容易掌握。

但2005年版药典并没有考虑标准品或对照品溶液的活性会随着贮存时间的增长有可能发生变化，主要是活性有可能降低。因此，2010年版规定要考查活性，且活性应符合要求才可以使用，是考虑了生物标准品和对照品最本质的东西，应该说这一规定是非常科学的。

2标准品或对照品活性验证的关键点

标准品或对照品即使在长菌等情况下，其生物活性还是或多或少的存在，但其活性已大大降低，已达不到作为标准品或对照品的准确性要求，不能再使用。因此，活性验证的关健是活性的大小是否符合作为标准品和对照品的要求，活性验证的目的就是要验证标准品或对照品的活性大小是否符合要求。

3标准品或对照品活性验证方法

3.1升压物质检查法升压物质检查所使用的标准品是垂体后叶标准品，其活性验证可采取该方法规定的大鼠灵敏度测定方法。标准品溶液配制成0.1u/ml浓度，低剂量应能使大鼠血压升高1.33～3.33kPa，且高、低剂量之比约为1:0.6，高剂量所致反应的平均值应大于低剂量所致反应的平均值。达到这样的要求，表明垂体后叶标准品溶液活性验证符合要求。

3.2降压物质检查法降压物质检查所使用的对照品是组胺对照品，其活性验证方法就是采取该方法规定的猫灵敏度测定方法。对照品溶液稀释成0.5µg/ml浓度，按猫体重每1kg注射组胺0.05µg、0.1µg、0.15µg高、中、低三个剂量，共重复给予2～3次，中剂量所致猫血压下降值应不小于2.67kPa，同时高、中、低三个剂量所致反应的平均值应有差别，且应是正反应。达到这样的要求，表明组胺对照品溶液活性验证符合要求。

3.3肝素生物测定法肝素生物测定法使用的标准品是肝素标准品，其活性验证除了要验证标准品溶液具有抗凝作用外，还应达到不同剂量间抗凝时间有区别。

以采用血浆试验为例说明。设标准品管和空白对照管，按药典规定的测定方法加血浆、肝素标准品稀释液（空白对照管加等量的氯化钠溶液）和氯化钙溶液，分别混匀，恒温，观察并记录凝结时间。如此操作找出使标准品管平均凝结时间明显大于空白对照管的标准品稀释液剂量，为低剂量。然后以上面找出的低剂量浓度为准，按1:0.85左右的剂间比配制标准品高、中剂量浓度，再按药典规定的方法测定，试验设高、中、低和空白对照管，重复3次，低剂量管的血浆凝结时间应大于空白对照管，中剂量管平均凝结时间应大于低剂量管，高剂量管凝平均凝结时间应大于中剂量管，总之应呈正反应。

3.4缩宫素效价测定缩宫素效价测定使用的标准品是垂体后叶标准品或合成缩宫素标准品，其活性验证的原则有两点：一是标准品溶液应有子宫收缩作用，二是标准品溶液的高、低剂量致子宫收缩作用应有明显差别。在试验时要注意，高、低剂量的比值不得超过1:0.7。

3.5升压素生物测定法升压素生物测定所使用的标准品也是垂体后叶标准品，其活性验证可采用上面升压物质检查项所述的活性验证的方法。

4讨论

4.1中国药典二部中对生物标准品或对照品贮备液的配制均规定了配制的浓度，比如升压物质检查中的垂体后叶标准品按升压素计配制成每1ml中含0.1单位的浓度，肝素生物测定中的肝素标准品溶液配制成1ml中含100单位的溶液。对于垂体后叶标准品而言，由于存在加热煮沸过程，无法用容量瓶定容，采取固定浓度的配制方法是合理的，但对缩宫素标准品、肝素标准品等最好采取定容的方法配制，而不采取固定浓度的方法配制。

4.2以上有一部分标准品和对照品活性验证方法就是该方法下的动物灵敏度测定方法，因此在试验时，没有必要专门用动物进行活性验证，可以采取动物灵敏度测定与活性验证合二为一进行。如果试验结果达不到要求，则可能是活性不符合要求，也有可能是动物本身灵敏度未达到要求。任何一方面的问题试验都无法继续，可另取动物试验，且重新配制标准品和对照品，以免反复浪费时间与动物。

4.3标准品和对照品活性验证，不是简单地验证活性存在，重要的是验证活性所致反应要能达到一定的程度，这个反应程度在验证时应有量化指标。

4.4肝素生物测定法首先寻找的肝素稀释液低剂量，其实就是肝素低剂量的稀释浓度，因为药典规定的血浆测定的两种加样方法，加样体积是确定了的，只有改变标准品浓度才可能调整剂量大小。

4.5升压素生物测定法中没有规定要进行动物灵敏度测定，但在实际工作中最好还是先进行一个动物灵敏度测定，低剂量应致血压升高到一定范围，而高、低剂量所致反应应有差别，这样才能保证试验可靠。在活性验证时，采取这一方法即可。低剂量能使血压升高到一定高度表明标准品活性存在，高、低剂量有差别，表明剂量不同，作用强度不同，生物活性呈正反应。

4.6如果贮存的标准品和对照品已经发生肉眼可见变化，如长菌，色泽明显变化等，表明溶液已经变质，不能再用，即使按上述方法验证活性还符合要求，也不能使用。

4.7本文的见解只供参考，希望起到抛砖引玉的作用，引起各位同仁来研究新版药典的不同点，以达到共同学习共同提高的目的。