补骨脂对兔激素性股骨头坏死骨小梁面积分数的影响

补骨脂对兔激素性股骨头坏死骨小梁面积分数的影响

梅寒雪刘华李慧英

梅寒雪刘华李慧英（通讯作者）（河南中医学院第一附属医院450000）

【摘要】目的研究中药补骨脂对激素性股骨头坏死的治疗作用。方法健康成年日本大耳白兔30只，雌雄各半，体重在2.5-3.0kg。随机分为对照组10只，造模组20只，用改良的马血清加甲基强的松龙的方法诱导制成兔激素性股骨头坏死模型,造模组再随机分为模型组10只和治疗组10只,治疗组给予补骨脂提取液连续8周。8周后剖出股骨头，甲醛固定、EDTA溶液中脱钙、酒精逐级脱水，石蜡切片，HE染色，显微镜下观察不同组别的骨小梁形态及面积分数。结果造模8周后，对照组的骨小梁面积分数较模型组及治疗组高。结论激素性股骨头坏死会造成骨小梁形态破坏，中药补骨脂对骨小梁的破坏有修复作用。

【关键词】激素性股骨头坏死补骨脂骨小梁面积分数

股骨头坏死（OsteonecrosisNecrosisofthefemoralhead,ONFH），是各种原因引起的股骨头的血液循环障碍，而导致骨细胞缺血、变性、坏死，骨小梁断裂、股骨头塌陷的一种病变。自1957年Petrogrand和Mastomarine[1]首次报道长期大剂量糖皮质激素(简称激素)引起股骨头缺血坏死以来,临床上此类病例越来越广泛,且逐年增高，随着病程发展,往往给患者造成为不可逆的损害,后期致残率高。本研究通过中药补骨脂应用于兔激素性股骨头坏死模型，观察骨小梁的形态及面积分数，进一步证实了补骨脂治疗激素性股骨头坏死的作用机制。

1.材料与方法

1.1实验动物及材料

健康成年日本大耳白兔30只，雌雄各半，体重在2.5-3.0kg。由河南省康达动物实验中心提供。颗粒饲料喂养，单笼饲养。饲料由河南省动物实验中心提供。补骨脂提取液由河南中医学院第一附属医院制剂室提供。

1.2主要仪器与试剂

青霉素华北制药股份有限公司

马血清郑州益康生物工程有限公司

戊巴比妥钠武汉大方医药化工有限公司

甲基强的松龙湖北方乐达生化有限公司

电子天平上海寺冈电子有限公司DS-671

甲醛溶液上海溶剂厂

无水乙醇(优级纯)北京化工厂

智能生物组织摊片机YD-A浙江金华益迪医疗设备厂

智能生物组织烤片机YD-B浙江金华益迪医疗设备厂

全自动生物组织脱水机YD-12P浙江金华益迪医疗设备厂

全自动生物组织包埋机YD-6P浙江金华益迪医疗设备厂

其他材料：各种型号注射器、灌胃管、棉签、碘伏、量筒、烧杯等

1.3方法

研制激素性股骨头坏死兔模型[2]：

所选用动物喂养1周后，采用随机分组法分为两组，即空白组10只，造模组20只，两组动物在体重及雌雄数等方面差别经t检验无统计学意义。所有造模组动物首次应用马血清10mL／kg经兔耳缘静脉注射，间隔3周后，马血清减量为6mL/kg经兔耳缘静脉再次注射；间隔2周后，腹腔注射甲基强的松龙，按45mg／kg连续3d，每天注射1次。注射激素期间，每天每只动物腹腔注射青霉素10万单位，连续7d，预防感染。空白组动物常规饲养。至最后一次注射激素后将造模组20只动物随机分为两组即模型组和治疗组。至此，整个实验组别划分完成，即空白组、模型组和治疗组，每组有动物10只。

1.4给药方法

自分组第一天开始，空白组和模型组动物每天给10ml生理盐水灌胃,治疗组动物每天给10ml补骨脂提取液灌胃，共连续灌胃8周。

1.5病理学检查[3]

动物连续灌胃8周后，戊巴比妥钠麻醉，解剖出股骨头，观察股骨头形态，切取股骨头，室温置于百分之十甲醛溶液中固定24小时，流水冲洗24小时后移入百分之十EDTA溶液中脱钙，至骨组织无气泡发生或软化为宜，或用大头针轻轻能刺进为度，自来水冲洗24小时（脱钙过程注意避光），然后转入百分之七十酒精内脱水各一小时，再以百分之八十酒精脱水3小时，百分之九十，九十五酒精3次脱水各1小时，百分之百酒精3次脱水各1小时，投入苯甲酸甲酯中透明过夜，浸石蜡50min包埋，切片厚度5μm。行HE染色。在光镜10*4倍视野下每个病理片拍1-3张（如1张病理片不能把整个股骨的病理片视野眼全部包括，则再拍第2张，如此类推），先应用病理图像分析软件Image-ProPlus6.0对股骨上段松质骨的骨组织每张病理照片直接测出的参数、单位及测量方法，再通过国际通用的公式对直接测出的参数计算骨小梁面积百分数。

1.6统计学处理

统计学处理使用SPSS10.0版统计软件，采用t检验的方法进行组间数据的比较(P<0.01)表示差异有统计学意义。

2.结果

病理组织学变化

对照组：股骨头部骨小梁结构、形态完整。

模型组：股骨头部骨小梁变细，间距增大，结构紊乱，部分有断裂现象。

治疗组：骨小梁较粗大，排列规则。

3.讨论

补骨脂为豆科补骨脂属Psoralea植物补骨脂Psoraleacorylifolia的果实，性味辛，苦，温，归肾、脾经。具有温肾助阳、纳气、止泻的功效［4］。历代中医常用于治肾虚，冷泻，遗尿，滑精，小便频数，阳痿，腰膝冷痛，虚寒喘嗽，外治用于皮肤病、白癫风、秃发等。

现代研究证明，补骨脂含多种活性成分，如：香豆素类，补骨脂素，异补骨脂素，黄酮类，补骨脂乙素，补骨脂多糖等成分。林举择等［5］用MTT法测定补骨脂注射液对大鼠成骨细胞增殖的影响，结果显示原代成骨细胞逐渐形成纤维细胞集落，有成纤维细胞型表现，传代成骨细胞逐渐被细胞分泌的基质所包埋，形成钙化。补骨脂对新生大鼠成骨细胞的增殖有显著促进作用，表明利用胰酶消化法可以分离培养出纯度高、数量较多且培养时间明显缩短的成骨细胞。补骨脂促进骨小梁修复作用与其增加成骨细胞的数量和促进成骨细胞的增殖能力有关；骨小梁是骨内的一种结构，与骨的生成有关，骨小梁表面被覆盖一层成骨细胞，成骨细胞分泌纤维和有机基质（即类骨质），类骨质继而钙化为骨基质。骨化过程不断被扩展，形成越来越多的骨小梁，进而形成骨质。由此可见，中药补骨脂可促进骨小梁生成，对股骨头坏死中骨小梁的破坏有修复作用，进而达到治疗股骨头坏死的目的。

参考文献

[1]PiettograndV，MastromadnoR.Osteopatdaprolungatatrattamentocortisonico.OrtopTraumApparMar.1957；25：791—810.

[2]王伟，刘利英，王坤正等.激素性股骨头坏死模型的建立及其发病机理探讨[J].西安交通大学学报.2007,28（5）：545-546.

[3]李晓昊，林宁，邓伟民，黄海.补肾壮骨颗粒对雌性骨质疏松大鼠体重及骨组织计量学的影响.[J].广东医学.2011,32(18):2357-2358.

[4]国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005;129.

[5]林举择，陈升恺，罗家栋.补骨脂注射液对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响[J].中医正骨，2004,16(6):6.