洁净室中沉降菌测量不确定度评定

洁净室中沉降菌测量不确定度评定

姜乔予

天津津环医净空气检测技术有限公司，天津 300000

摘要：当前，我国科学技术水平不断增强，整体医疗水平也得到很大提高。洁净手术室已经成为现代化医院的一个重要标志和发展趋势，也是评判医院等级的重要指标，是当今医院手术室建设的潮流。洁净手术室的洁净程度与环境密切关系到手术感染风险与手术成功率。

关键词：洁净室；沉降菌测量；不确定度评定

引言

《药品生产质量管理规范》（GMP，2010年修订版）附录Ⅰ无菌药品规定：应当对洁净区微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。其中，沉降菌法是利用专属培养基，通过沉降法收集空气中的活微生物粒子于沉降碟中，经适宜的条件培养后对可见的菌落进行计算，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）的洁净度，测定结果真实客观，且无需专门的采样装置，是最常用的监测洁净室洁净度的方法。

1材料与方法

1.1仪器

SPX-250SⅡ型生化培养箱(上海新苗医疗器械制造有限公司);LT1002E电子天平(常熟市天量仪器有限责任公司);量筒(500mL,天津市天玻玻璃仪器有限公司);WS-1温湿度计(天津凤洋公司);W11ABKM压差表(美国MAGNEHELIC公司)。

1.2培养基

大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)(广东环凯微生物科技有限公司)。

1.3测试方法

选取微生物检测室万级洁净区(3.4m×3.5m=11.9m2,高度3.0m),根据沉降菌的测试规则,将配制好的大豆酪蛋白琼脂培养基倒进已灭菌的培养皿中,按照采样点布置图(6个采样点)逐个放置已制备好的培养皿,然后从里到外逐个打开培养皿盖,使培养基表面暴露在空气中4h进行静态测试(1人在洁净区中),培养5d后记录菌落数。

1.4确定不确定度的来源

影响沉降菌测量结果的主要因素有:①各采样点的分布测量结果引入的不确定度;②人员间计数差异引入的不确定度;③测量的环境条件引入的不确定度;④培养箱的温度误差引入的不确定度;⑤天平称量误差引入的不确定度;⑥量具的误差引入的不确定度。

2结果与分析

2.1标准不确定度的A类评定

2.1.1各采样点的分布测量结果引入的标准不确定度u(y)

根据表1的测试结果,进行测量不确定度的A类评定。

表1不同采样点沉降菌菌落结果

各采样点的分布测量结果引入的标准不确定度u(y):

式(2)中,

s(Ai):标准偏差;

Ai:某一采样点的沉降菌菌落数;

M:总平均沉降菌菌落数;

n:采样点数。

2.1.2人员间计数差异引入的标准不确定度u(j)

记录10名微生物检测人员对同一平皿(2个检测点)进行计数的结果 。由表2数据可以得出,对于沉降菌检测项目,不同微生物检测人员对同一平皿进行计数的结果无差异,因此人员间计数差异引入的不确定度u(j)可忽略不计。

表2不同检测人员对同一平皿计数结果

2.1.3A类相对标准不确定u(A)

式(3)中:

M:总平均沉降菌菌落数:

u(y):各采样点的分布测量结果引入的标准不确定度。

由式3可知,A类相对标准不确定度为0.214。

2.2标准不确定度的B类评定

2.2.1测量环境条件的相对标准不确定度u(h)

环境影响因素主要有温度、相对湿度、压差等,所以测量环境条件的相对标准不确定度u(h)按公式(4)计算。

式(4)中:

u(h1):温度引入的相对标准不确定度;

u(h2):相对湿度引入的相对标准不确定度;

u(h3):压差引入的相对标准不确定度。

查温湿度计、压差计的校准报告,温度的扩展不确定

度U=0.4(℃k=2),相对湿度的扩展不确定U=2.0%RH(k=2),

压差的扩展不确定度U=1.4%FS。洁净室温度为22.5℃、

湿度为55.3%、压差为28Pa。

(1)温度引入的相对标准不确定度u(h1)

(2)湿度引入的相对标准不确定度u(h2)

(3)压差引入的相对标准不确定度u(h3)

测量环境条件的相对标准不确定度u(h)

2.2.2培养箱温度误差引入的相对标准不确定度u(T)

查所使用培养箱的校准报告,其扩展不确定度为UT=0.2,℃k=2,培养箱温度的相对标准不确定度u(T)为:

2.2.3天平称量误差引入的相对标准不确定度u(m)

培养基配制方法是称量16g大豆酪蛋白琼脂培养基,加入400mL蒸馏水,搅拌溶解后灭菌,查询所使用天平的校准报告,载荷为20g时,天平的扩展不确定U=0.03g,k=2,计算天平称量所引入的相对标准不确定度(um)为:

2.2.4量具的误差引入的相对标准不确定度u(L)

查量筒的校准报告,其扩展不确定度U=1.0mL(k=2)

2.2.5B类标准不确定度(u(B))

由式12可知，B类标准不确定度为0.0216。

2.3合成标准不确定度(uc)及扩展不确定度(U)

取包含因子k=2(置信概率为95%),沉降菌的扩展不确定度为：

2.4不确定度报告

万级洁净室沉降菌结果为(4±2)个/皿,k=2。

3讨论

3.1洁净区沉降菌监测整体趋势分析

某院制剂室洁净区沉降菌监测振幅波动也相对较大，整改措施：（1）洁净服改为全罩型尼龙材质的，清洗和灭菌严格按照操作规程进行，清洗溶剂为纯化水，洗衣间单独设置。（2）仪器设备、过滤网每季度清洁1次，过滤网每半年更换并记录，洁净厂房及其内部设备每班次消毒，洁净室经常除湿，尤其是潮湿季节，湿度过大易引起霉菌滋生，应加大除湿力度。（3）定期对系统的送风量进行检测，经常性地检查各级空气过滤器的空气阻力情况和容尘量。（4）提前领取物料，并经脱外包装，擦拭内包装后传入洁净区，最后开紫外照射消毒至少30min。

3.2个别洁净室监测值偏差分析

（1）大输液配制区浓配间和称量间内有较多的原料粉末及活性炭等产尘物质，制剂配制过程中易在空气中飞扬而导致沉降菌超标。安装了相应的捕尘装置后，减少了粉尘飞扬引起的污染，从而降低了沉降菌监测值。（2）普通外用制剂配制区分装间由于制剂工艺手工操作较多，进入洁净室的人员多，人为污染概率大。改进措施：加大操作人员培训考核力度，对所有在受控环境中工作的人员制定规范的培训计划，内容涵盖GMP法规、制剂质量管理文件，重点是相关制度、职责、操作规程，并养成良好的卫生习惯。严格洁净室内操作人员管理，控制人员在合理的数量内，尽量减少参观人数、大幅度活动和进出洁净室的次数，以减少尘埃粒子或气溶胶造成的空气污染。采取改进措施后，偏差率明显降低。

结语

从以上分析可以看出,对于沉降菌的不确定度评定,其中A类相对标准不确定度这一分量最大,为0.214;B类相对标准不确定度这一分量为0.0216,其中测量环境条件的相对标准不确定度为0.0213,培养箱温度误差引入的相对标准不确定度为0.0029,天平引入的相对标准不确定度为0.00094,量具的误差引入的相对标准不确定度为0.00125。B类相对标准不确定度分量约为A类相对标准不确定度分量的10%,所以对于沉降菌的不确定度评定,主要是以A类不确定度为主,B类不确定度所带来的影响可以忽略不计。

参考文献

[1]GB/T16294-2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法[S].

[2]李天翥,齐岩.沉降菌测试暴露时间与培养基失水率和微生物回收率的考察与研究[J].生物技术世界,2016,(1):243-244.

[3]林子琳.洁净室沉降菌检测采样点高度影响考察研究[J].海峡医药,2017,29(7):5-7.