HPV基因分型特点与宫颈病变的相关性研究

HPV基因分型特点与宫颈病变的相关性研究

安 雪

河北省承德市隆化县妇幼保健院 河北承德 068150

摘要：随着人们生活方式以及性观念的转变，妇科许多疾病的发生几率都呈现逐年升高的趋势，而宫颈癌作为妇科常见的恶性肿瘤疾病之一，也尚且如此。根据临床的相关研究发现，人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）是导致HPV感染以及宫颈癌出现的重要因素之一。宫颈病变发展速度较慢，从早期宫颈异常改变发展至宫颈癌需数十年，因此早期进行宫颈病变的检查及治疗对于预防宫颈癌的发生、改善患者预后相当关键。

关键词：HPV基因分型；宫颈病变；关联

1导言

目前，在临床上多采用液基薄层细胞学来进行检查，从而判断受检者的宫颈处是否存在病变组织，达到早期发现、早期预防的目的。随着临床检验技术的发展和进步，HPV基因分型检测也逐渐被应用于宫颈病变组织的筛查中，有学者在此基础上提出，采用TCT联合HPV基因分型检测能够提高检测效率，在预防宫颈癌或者予以早期诊治中，能够起到重要作用。

2资料与方法

2.1研究对象

收集2020年6月—2021年3月广州开发区医院西院区门诊、住院和体检一共6181例女性人乳头瘤病毒基因分型标本，年龄在18～87岁，平均年龄(39.64±8.34)岁。

2.2方法

2.2.1样本要求

检验前准备：①3天内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗；②24小时内不应有性行为；③检查应在非月经期内进行；④检查前阴道不进行醋酸或碘液涂抹。标本采集步骤：由医生以窥阴器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈过多的分泌物擦去。将宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转3～5圈。慢慢取出宫颈刷，将其放入装有细胞保存液的样本管中。在管口处将多余的刷柄折断，将刷头留在样本管中，旋紧管盖，做好样本标示并保持样本管直立放置，送检验室检测。如不能马上送检样本，可置于4℃保存，并于2个星期之内进行检测。

1.2.2试剂与仪器

①试剂：潮州凯普生物化学有限公司生产的核酸提取试剂盒(DNA-L型磁珠法)、人乳头瘤病毒(HPV)分型检测试剂盒(PCR+膜杂交法);②仪器：凯普公司生产的HBNP-480A核酸提取仪、杭州博日生产的TC-96/G/H(b)扩增仪及凯普公司生产的HHM-3、HB2012A、HBHM-3000S杂交仪。

2.3实验方法

将标本经过DNA提取、扩增后进行杂交，肉眼进行判读结果(检测结果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点)。该试剂可检测HPV14种高危型亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68亚型),5种低危型亚型(6、11、42、43、44亚型),2种其它亚型(53、CP8304亚型)。

2.4统计学方法

使用SPSS22软件进行统计分析。

3HPV基因分型分析

3.1宫颈癌早期诊断的意义

宫颈癌主要是由HPV感染而引起的一种妇科恶性肿瘤。根据流行病学的调查原理显示，宫颈癌在近年来呈现出了发病年轻化的趋势。对于女性来说，宫颈癌的出现不仅会导致其生活质量明显下降，身体健康受到影响，还会增加其死亡风险，严重威胁患者的健康安全。在我国的癌症防控规划中，已将宫颈癌列为重点的防治对象之一，这也从侧面反映出了大众在预防宫颈癌方面开始加强了重视。随着各地区宫颈癌防治的宣传工作不断开展，人们也提高了疾病预防的意识，在生活中也积极完善相关检查和宫颈癌筛查，在一定程度上也保证了宫颈癌筛查工作的顺利实施。然而，在此基础上，早期诊断的有效率也是我们应当关注的重点。随着临床检测技术的不断进步，越来越多的检测方法被应用到宫颈癌病变的诊断中，以提高宫颈癌的早期诊断率，从而做到早发现、早治疗。为进一步提高宫颈癌的早期诊断率。

3.2HPV基因分型检测

首先，应采用HPV核酸扩增分型检测系统来完成受检者机体HPV亚型基因的检测，检测类型共有21种，包括高危型亚型和低危型亚型这两类。同样，在HPV基因分型检测中，需要将受检者的标本组织从液小瓶中转入微量离心管内，13000r/min，离心5min，在分离后去除上清液，及时保存离心管底中的细胞块。而后，在离心管底部的细胞块中加入裂解液完成悬浮沉淀，同时放置在90℃的水浴环境中进行加热，继续予以13000r/min，离心5min；最后，分离并取出上清液后，继续进行PCR扩增、杂交及显色处理。其中，在HPV基因分型检测所使用到的基因芯片试剂盒，来自深圳亚能生物科技有限公司。

3.3HPV-DNA扩增结果判定

将显色液倒去后，采用清水冲洗膜条，通过对膜条的肉眼观察来判断其变化和检测结果：若是膜芯片中的HPV亚型探针位点处能够发现1个蓝色斑点，则提示受检者发生HPV单一感染；若是膜芯片中的HPV亚型探针位点处能够发现2个及2个以上蓝色斑点，则提示受检者出现双重或者多重HPV感染。统计并记录各级感染的例数。

3.4液基薄层细胞学检查（TCT)

TCT的全称为“新柏氏液基薄层细胞学”，被作为一种检测技术应用于临床检验中，主要包括制片细胞分布方式、保存细胞标本方式以及细胞薄层制片效果等方面的内容。近年来，大量的研究证明了液基薄层细胞学检查的安全性和有效性，在宫颈细胞的检测、分类及诊断中起到了重要的作用。在临床上，液基薄层细胞学检查也是一种较为先进的检测手段，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检测技术相比，具有标本处理满意度高、宫颈检出率高等优点。在传统的宫颈刮片巴氏涂片检测中，由于标本中存在黏液、血液等其他细胞组织，从而会导致检测结果出现误差，从而影响临床的诊治。而液基薄层细胞学检查可以在一定程度上改善此类缺陷，提高癌变细胞的检出率，可以让早期癌变的患者得到更为有效的治疗。

4讨论

宫颈癌是女性三大常见肿瘤之一，与HPV的感染有着密不可分的关系，作为女性健康的杀手，其发病率仅在乳腺癌之下。由于个人或环境的多种因素，现今癌症呈年轻化现象，这也引起女性同胞更多地关注自己的身体健康。大约有70%～80%的女性一生中都感染过HPV,但并不是所有的人都会发展成宫颈癌，这些感染很多时候会像感冒一样仅仅在体内短暂停留，就可以被自身免疫系统清除，但是宫颈癌的发生会因为伴随的高危亚型持续感染而导致病情的发展。HPV病毒高危亚型的持续感染作为引发宫颈癌的必要条件。目前宫颈癌筛查的重要手段之一就是进行HPV核酸的检测。在目前所能鉴定出的所有亚型中，其中大约有40多种亚型与宫颈癌相关。在本次研究中所收集的数据主要来自广州市黄埔地区检测人群，该地区阳性率(10.0%)明显低于黄俊远等统计出的广州地区阳性率(24.74%)及陈波等统计的数据(28.43%);高危型感染率8.6%低于相关文献报道的中国高危型感染率14.8%;感染率最高的三个高危型分别是52型、58型和39型，其中高危型52感染率最高(24.43%),与黄俊远等统计的广州地区情况相符，但其他阳性率略有出入，黄俊远等和陈波等统计出广州感染率最高的三个亚型相同，均为16型、52型、58型，这可能由于他们统计的人群数据来源主要是广州市老城区，人口流动相对稳定，我院检测分析的人群主要来自广州黄埔开发区，大多数以流动人工为主，常住人口相对较少，说明在同个城市中，由于每个区域的人群组成、生活习惯、环境的不同，可能会导致各个区域的感染率及亚型分布都会有一定的差异。

本研究结果显示宫颈级别越高，高危型HPV检出率越高，提示高危型HPV感染率与宫颈恶变存在较为密切的关系。既往陈炜等研究证实，癌前病变组及宫颈癌组患者高危型HPV阳性临床显著高于正常组，且宫颈癌组这一数据显著高于癌前病变组；CINII组、CINIII组、宫颈癌组患者HPV感染率分别为92.3%、92.0%、97.0%，宫颈癌及CINI组分别为23.50%、26.70%，差异具统计学意义；本研究在前人研究结果基础上进一步证实宫颈癌病变与高危型HPV感染的相关性。目前认为，多种亚型感染与HPV持续时间存在一定关系。

结束语

综上所述，宫颈癌可以通过筛查防治减少部分病例的发生，通过定期监测HPV的感染情况，早发现、早诊断、早治疗，可以降低子宫颈癌的疾病负担。本院就诊妇女有较高的高危型HPV感染率，且随着宫颈病变程度的增加而增大，定期进行HPV的筛查非常必要。

参考文献

[1]肖亮博,陈光炼,吴振勇,朱海勇.广州市黄埔地区6181例女性宫颈细胞人乳头瘤病毒基因分型分析[J].现代医院,2021,21(09):1433-1435.

[2]曹娟娟.HPV基因分型特点与宫颈病变的相关性研究[J].哈尔滨医药,2021,41(04):94-95.