氨甲环酸注射液含量测定分析方法验证

氨甲环酸注射液 含量测定分析方法验证

陈泽宝 甘才花 童久芳

乐信乐美（海南）生物科技有限公司 ， 海南 海口 570311

摘要：目的建立反相高效液相色谱法，测定氨甲环酸注射液含量。方法以C18柱为固定相；以0.23%十二烷基硫酸钠溶液（取磷酸二氢钠18.3g，加水800ml溶解，加三乙胺8.3ml混匀后，再加入2.3g十二烷基硫酸钠，溶解混匀，用磷酸调节pH至2.5，加水至1000ml）-甲醇（60:40）为流动相；检测波长为220nm。结果氨甲环酸在1.20～2.40mg/ml内线性关系良好，相关系数0.9998；定量限为6.06μg/ml；低、中、高3种浓度平均回收率分别为100.5%，100.5%，100.4%。结论：本方法准确，简便，专属性强，可用于氨甲环酸注射液含量测定的考察。

关键词：氨甲环酸；含量测定；分析；验证

导言：

通过下文实验采用高效液相色谱法对氨甲环酸注射液含量进行测定，为氨甲环酸质量控制提供有效的依据，并且该方法专属性强，精密度好，准确度高，能够为氨甲环酸注射液质量控制提供有效的定量方法。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

仪器为岛津LC-2030C液相色谱仪、BSA124S型赛多利斯电子天平、PB-10型赛多利斯酸度计、DK-S22型恒温数显水浴锅。

1.2 实验试剂、样品及对照品

试剂为磷酸二氢钠、三乙胺、十二烷基硫酸钠、磷酸、色谱甲醇及去离子水；样品为氨甲环酸注射液（乐信乐美（海南）生物科技有限公司，批号：08190501）；氨甲环酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100174-201704；含量：100%）

2实验方法

2.1色谱条件

色谱柱为岛津C18柱（规格：4.6*250mm，5µm），柱温为25℃，流动相为0.23%十二烷基硫酸钠溶液（取磷酸二氢钠18.3g，加水800ml溶解，加三乙胺8.3ml混匀后，再加入2.3g十二烷基硫酸钠，溶解混匀，用磷酸调节pH至2.5，加水至1000ml）-甲醇（60:40）；流速为1.0ml/分钟；进样量为20μl；检测波长为220nm。

2.2供试品溶液配制方法

量取氨甲环酸注射液1ml，置10ml 量瓶中，用水稀释至刻度，即得。

2.3专属性

①未破坏：量取本品1ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，即得。②酸破坏：量取本品1ml，置10ml量瓶中，加入1mol/L盐酸溶液1ml，90℃水浴12h后，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml中和，用水稀释至刻度，即得。③碱破坏：量取本品1ml，置10 ml量瓶中，加入1mol/L氢氧化钠溶液1ml，90℃水浴12h后，加1mol/L盐酸溶液1ml中和，用水稀释至刻度，即得。④氧化破坏：量取本品1ml，置10ml量瓶中，加入5%过氧化氢溶液1ml，80℃水浴1h后，用水稀释至刻度，即得。⑤高温破坏：量取经高温105℃破坏7天本品1ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，即得。⑥光照破坏：量取经5000lx光照破坏15天本品1ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，即得。同法对空白溶液进行上述破坏试验。精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果显示，本品经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后均无明显降解；各破坏条件下，未破坏空白及破坏后空白溶液均对检测无干扰，各破坏溶液中杂质峰与主峰均能达到基线分离，主峰峰纯度高，物料平衡，表明本方法具有良好专属性。

2.4线性

精密称取对照品200.13mg，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取0.6、0.8、1.0、1.1、1.2ml贮备液，分别置5个10ml量瓶中，用水稀释至刻度，做为60%、80%、100%、110%、120%线性溶液。精密量取线性溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，并以氨甲环酸峰面积与其浓度计算线性回归方程，求出相关系数r。

结果显示，在所验证浓度范围（1.20～2.40mg/ml）内，主峰峰面积与其相应浓度呈现良好线性关系，线性回归方程为y=388339x-14494，相关系数r为0.9998。

2.5定量限

取60%线性溶液，逐步稀释至信噪比约10:1，即得。

结果显示，最低定量限浓度为6.06μg/ml。表明本方法灵敏度较高。

2.6重复性

精密称取氨甲环酸对照品20.23mg、20.08mg，分别置两个10ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1~2。精密量取本品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。同法配制6份。

结果显示，6份供试品溶液测得含量分别为100.96%，101.09%，101.18%，102.01%，101.90%，101.94%，平均含量为101.5 %，RSD为0.5%，表明本方法重复性良好。

2.7供试品溶液稳定性

精密称取氨甲环酸对照品20.05mg、20.17mg，分别置两个10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1~2。精密量取本品溶液1ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，供试品溶液分别在0、2、4、6、8、12、16、20、24、36、48小时时，精密量取20μl注入到液相色谱仪中，结果显示，供试品含量分别为100.03%、100.01%、100.01%、99.99%、99.94%、100.11%、100.20%、100.15%、100.26%、99.54%、100.44%，各时间点含量RSD为0.2%。表明在48h内稳定性较好。

2.8回收率

按处方量配制空白辅料溶液，精密量取空白辅料溶液5ml，分别置9个25ml量瓶中，1~3号瓶、4~6号瓶、7~9瓶分别加入氨甲环酸原料约40mg、50mg、60mg，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别做为80%、100%、120%回收率溶液；精密量取重复性项下对照品溶液和上述回收率溶液各20μl，注入到液相色谱仪中，记录色谱图，回收率%=测得量/加入量×100%。

结果显示，9份回收率溶液测得回收率分别为100.62%、100.63%、100.38%、100.36%、100.64%、100.47%、100.39%、100.27 %、100.53%，平均回收率为100.5 %，RSD为0.1%，表明本方法准确度良好。

3讨论

3.1比较了水、流动相的效果，测得结果一样，考虑安全和成本，选择水作为溶剂。

3.2通过200~400nm进行扫描，氨甲环酸在220nm处有最大吸收，故选择220nm为测定波长。

3.3上述试验结果表明，本方法精密度、稳定性、重复性、回收率都较好，本研究建立了高效液相色谱法测定氨甲环酸注射液含量的方法，通过大量试验得出最优的色谱条件。本法具有样品处理简单、重现性好等优点。可作为该制剂质量控制的方法之一。

4结论

实验室主要是使用高效液相色谱法测定氨甲环酸注射液中氨甲环酸的含量。此检测方法专属性强，精密度好，准确度高。本文以上研究主要是探讨用反相高效液相色谱法测定氨甲环酸注射液中氨甲环酸含量的效果。

参考文献：

[1]《中国药典.》2020年版四部通则9101及药典标准：药品质量标准分析方法验证指导原则

[2]杜宁、王玉、蔡美明、狄斌. 高效液相色谱法测定氨甲环酸注射液的含量和有关物质. 中

国药学杂志2010年1月第45卷第2期

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