幽门螺杆菌临床检验研究进展

幽门螺杆菌临床检验研究进展

张晓军 ,陈亚龙通讯作者

临潼康复疗养中心  陕西西安  710600

【摘要】幽门螺杆菌（Hp）属于多种消化道疾病的常见致病菌，如慢性胃炎、胃黏膜病变、消化性溃疡等。澳大利亚学者 Marshall 等1983年首次从胃炎患者的胃黏膜中分离出一种幽门螺杆菌（Helico-bacter pylori，Hp），引起了国内外学者的广泛关注和重视。1989年 Goodwin 等根据生物学活性、超微结构、核酸杂交试验结果将其归于螺杆菌属。经过多年的发展，有关幽门螺杆菌临床检测的研究取得了长足进步和可喜成果，并在临床上逐步得到应用。

【关键词】幽门螺杆菌；检验；进展

幽门螺杆菌（Hp）属于多种消化道疾病的常见致病菌，如慢性胃炎、胃黏膜病变、消化性溃疡等。澳大利亚学者 Marshall 等[1]1983年首次从胃炎患者的胃黏膜中分离出一种幽门螺杆菌（Helico-bacter pylori，Hp），引起了国内外学者的广泛关注和重视。1989年 Goodwin 等根据生物学活性、超微结构、核酸杂交试验结果将其归于螺杆菌属。经过多年的发展，有关幽门螺杆菌临床检测的研究取得了长足进步和可喜成果，并在临床上逐步得到应用。总结幽门螺杆菌临床检验方法及效果，现综述如下：

1 侵入性检测

1.1 快速尿素酶试验

该试验是所有检测手段中最为简便迅速的一种方法。尿素酶（Urease，Ure）由 A、B 两个亚单位组成，暴露于细胞表面。在胃内强酸性环境下，于细菌周围形成“氨云”，有效抵抗胃酸对细菌的破坏，是HP重要的毒力因子之一。Ure含量丰富约占全商体蛋白的5%～10%，并在细菌表面厂泛表达，具有相对分子质量大、可形成题粒状结构等特点。数分钟即可做出诊断。目前已有试剂盒，使用简便、快速、便宜。活检标本的尿素酶活性主要与感染Hp的数量多少有关，量少时可造成假阴性结果，而其它能产生尿素酶的细菌如空肠螺杆菌，变形杆菌等，都水解尿素，可造成假阳性反应。此法不宜单独作为Hp根除率的检查[2]。

1.2 细菌培养

胃黏膜组织的细菌培养是诊断Hp 感染的最可靠方法，可做为验证其他检测手段的“金标准”。目前主要有两种方法：①静态培养，用组织培养瓶加入少量液体，形成一个大面积的气液面。②是震荡培养，将液体培养基放于震荡器上在微需氧环境中震荡培养。

1.3 活检标本切片染色

将胃黏膜活检组织标本用100%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片染色。根据Hp的形态学特征进行检测和分析。可直接观察胃黏膜表面上定植的 Hp，是临床上最常用的另一项Hp诊断的“金标准”。染色的方法有多种，常用的方法有：①苏木精一伊红（HE）染色。②Gram染色。③Warthin-Starry（W-S）银染色。④Gi-emsa染色。⑤其他染色法：吖啶橙染色；阿的平荧光染色；石炭酸复红染色；Gimenez染色。⑥间接免疫荧光检查。⑦免疫组化。其中W-S染色效果最好，细菌清晰易辨，特异性和敏感性几乎均达100%，但该法繁琐费时，且需一定技术。HE 染色细菌清晰可辨，既可供组织学诊断用，又可检查Hp，种常规检测方法[3]。组织学检查有许多优点，用常规组织学检查的标本即可，方便，价廉，且可长期保存，可提供 Hp和组织学方面的资料，对既往的资料也可进行回顾性研究，这是任何其他诊断方法无法替代的。

1.4 细胞涂片染色

用leifson 鞭毛染色法诊断Hp感染，用leifson鞣酸-品红染色法来做胃活检标本印片细胞学检查，以显示Hp的鞭毛，并与组织学检查、RUT和细菌培养等法进行比较。并且印片细胞学标本还可进一步作组织学检查或Hp培养。

1.5 电镜对Hp的超微结构观察

Hp呈弯曲形或S型、V型、环形、小球形及杆状，菌体长约1.5～6 μm，表面光滑，两端钝圆，有1～6根带鞘鞭毛。胃窦部Hp稍长，其它部位的较短，细菌常多个或散在分布于胃黏膜上皮微绒毛之间，Hp存在部位病理改变主要为上皮微绒毛减少、消失、断裂、部分不规则包绕菌体。

1.6 聚合酶链反应（PCR）

Hp的尿素酶基因、16SrRNA 基因和编码Hp特异 26KD蛋白质的基因部分序列的测出，为 PCR 特异 性引物的选择提供了依据。

采用PCR技术能准确评估治疗后的Hp是否被真正根除，对于指导 Hp 感染的治疗有十分重要的临床意义。PCR的另一优点是可以成功地检测胃黏膜以外的用常规方法不能检出的Hp，包括胃液、唾液、牙菌斑及粪便中的 Hp。

家中发生率非常低。PCR技术的广泛应用，对 Hp 流行病学、传染病学及分子遗传学的研究方面也起到重要作用。

1.7 PCR单链构象多态技术（PCR-SSCP）

用PCR及SSCP技术分析和鉴定临床分离的Hp菌株方法。该方法敏感性强、图形简单、易于比较、重复性好。PCR-SCP不仅可以用于Hp的流行病学调查，而且能评估治疗后再现的 Hp是复发还是再感染[4]。

2 非侵入性检测

2.1 13C、14C呼吸试验

呼吸试验的原理是基于Hp在体内产生大量的尿素酶分解尿素为CO2和NH4+，因此若给感染 Hp的患者口服同位素标记碳的尿素溶液，则尿素被分解后产生的同位素标记CO2从肺呼出。 可收集呼气样本，用液体闪烁计数器或用气体同位素质谱仪检测同位素标记CO2的量。检测 Hp的敏感性和特异性分别达100%和88%，Hp清除后则呼出减少或消失。根据标记物的不同，分为13C 和14C 呼吸试验，儿童多采用13C。呼吸试验具有快速、可靠、安全、无痛苦的优点。国外已将其作为追踪观察治疗效果、确定经过抗菌治疗后Hp是否清除的最好办法，且适合于大规模流行病学调查，它优于血清学的一个明显特征是表明目前是否有Hp感染，而不是曾经是否感染过。

2.2 15N-尿氨排泄试验

根据呼吸试验类似的原理.让受试者口服稳定性同位素15N标记的尿素，然后测定尿中排出的15NH3来判断胃内Hp的实际感染状况，其敏感性为96%。15N-尿氨排出试验是一种有一定定量意义的敏感性与特异性均高的 Hp感染体内诊断试验。

2.3 免疫学检查

HP 感染后诱发全身细胞免疫和体液免疫反应。在定植的早期，胃黏膜固有层以中性粒细胞浸润为主；在慢性感染阶段，以淋巴细胞、浆细胞和嗜酸性粒细胞浸润为主。感染可刺激浆细胞产生局部和全身的特异性抗体，参与体液免疫反应。HP的菌体、鞭毛、尿素酶、空泡细胞毒素（VacA）细胞毒素相关蛋白（CagA）等均可产生特异性抗体。感染后产生的全身抗体主要是IgG 和IgA，IgM少见。IgG常在感染后21d出现，持续时间较长；IgA在不同患者以及同一患者不同感染时期均有很大差异。这些免疫反应对机体无保护作用但对 HP 检测提供了方便，临床上常将IgG作为血清学检查HP 的主要测定指标，该方法简单易行，是最常用的检测方法之一。其缺点是因为抗体可长期存在，阳性结果只能说明既往感染，可用于排除感染。HP 定植于胃上皮细胞后分泌大量因子，使菌体表面存在多种抗原成分，可以反映 HP 现症感染。根据病人在 HP感染的不同时期血清中存在的不同抗原抗体，，可作为确定 HP感染类型、制定治疗方案及判断预后的重要指标。

2.3.1胶体金免疫渗滤法

①既往感染抗体检查：胶体金免疫渗滤法是近年发展的一种血清检查 HP 抗体的方法。通过基因重组技术表达抗原并进行纯化，以硝酸纤维素膜为载体，试剂及标本通过渗鸿完成抗原抗体反应，通过胶体金的红色标志物观察结果，可作为 HP既往感染的标志。②现症感染血清学抗体快速检测法：现症感染血清学抗体快速检测法，是一种随着基因生物学及免疫工程学的应用而发展起来的第三代血清抗体检测技术，通过HPcDNA 文库筛选、分离、重组，提取出特异性强、纯度高的抗原来检测相应的血清抗体。

2.3.2 酶联免疫吸附试验

①血清抗体检测：酶联免疫吸附试验是最常用的检测HP 抗体的方法，该方法能实现标准化操作，成本较低，通常用于血清lgG抗体检测，敏感性和特异性达87%以上；其缺点是目前常选用活体细菌、甲醛处理过的细菌、酸性甘氨酸抽提物等作为抗原，这些未经纯化的粗制抗原制备物常与其他菌种间有交叉抗原性，从而在一定程度上影响了检测的特异性。②血清可溶性抗原检测：HP感染人体后，释放可溶性抗原物质（S-HP）并进入血液循环，采用超速离心和凝胶过滤等技术纯化 HP 外膜蛋白，获得抗膜蛋白抗体，然后用 ELISA 双抗体夹心法检测受试者血清中的S-HP即可诊断感染。其优点是血清不用稀释，操作简便，成本较低；其缺点是只能检测 HP 总蛋白或某种蛋白。③尿液抗体检测：国内有人用间接法对尿液、睡液、血清3种标本进行 HP-IgG抗体检测，准确性和特异性都达83%以上，尤以尿液检测效果最佳，但是在儿童的临床应用中受到限制。④粪便抗原检测：不需要口服任何试剂，为完全非侵入性检查，且不受年龄、性别、疾病种类限制，操作简便，无须昂费仪器，敏感性、特异性均可达到 90%以上，优于一般血清学试验，此外，阴性预测值稍低于尿素呼气实验，可在没有使用尿素呼气试验条件时替代呼气试验。但该方法也受药物影响，有局限性如兰索啦唑和铋剂可引起假阴性，故此种检测方法应在停药4周后进行[5]。

2.3.3 免疫印记技术

免疫印记技术（IBT）也称免疫转印技术，是将凝胶电泳与固相免疫相结合的一种复合免疫技术，其中用来分析蛋白质的方法称为 Westerm blot。

2.3.4 蛋白芯片技术

蛋白芯片技术（protein chip technique）是将一系列"诱饵"蛋白（如抗体）以阵列方式固定在经过特殊处理的底板上，然后将其与待分析的样品杂交，只有那些与“诱饵”结合的蛋白才被保留在芯片上。

综上所述，Hp的检测有很多种方法，各有优缺点。临床应用上，一般主张血清学检测作为筛查手段，尿素酶试验作为快速诊断，活检组织检查和细菌培养作为确诊方法，由于耐药菌株的增加，培养与药敏显得尤为重要，组织学检查和13C、14C 呼吸试验用于确定经治疗后 Hp是否根除。为了提高阳性率和准确性，最好能同时使用几种检查方法，取长补短。随着医学研究的不断深入.Hp的检测方法必将不断取得突破性进展。

参考文献

[1]M ars hall BJ, Warren JR. Unidentified curved bacilli in the stam ach of patients with gastrit is and peptic ulceration[J]. Lancet, 1984, 16(1) (8390):1311-1315.

[2]焦冬菊, 孙轸, 谢佳平. 幽门螺杆菌感染检测方法的研究进展[J]. 检验医学与临床, 2018, 15(17):3.

[3]林伟佳, 薛晓光. 幽门螺杆菌临床检验方法研究[J]. 中国保健营养, 2018, 028(006):367.

[4]鲍维海. 276例C13呼气试验幽门螺杆菌检测结果临床研究[J]. 健康之友, 2019, 000(015):47.

[5]曾妙, 杨三三, 李雪诺,等. 幽门螺旋杆菌的检测方法研究现状[J]. 海南医学, 2020, 31(6):5.