不同催化剂对血液制品蛋白质含量的测定比较

不同催化剂对血液制品蛋白质含量的测定比较

韦世萍

广西冠峰生物制品有限公司530200

【摘要】目的：比较硒粉-硫酸钾、硫酸铜-硫酸钾混合催化剂在血液制品蛋白质含量测定中的消化时间及测定结果差异情况。方法：采用凯氏定氮法对人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4）、人免疫球蛋白测定蛋白质含量，各品种分别使用硒粉-硫酸钾、硫酸铜-硫酸钾两种混合催化剂进行消化。结果：硒粉-硫酸钾催化剂消化时间约50分钟；硫酸铜-硫酸钾催化剂消化时间约90分钟；两种催化剂测定血液制品的蛋白质含量结果无显著性差异。结论：凯氏定氮法测定血液制品蛋白质含量时，硒粉-硫酸钾催化剂的消化时间相对于硫酸铜-硫酸钾催化剂大大缩短，且对测定结果无显著性影响。

【关键词】血液制品；硒粉；硫酸铜；硫酸钾；蛋白质含量测定。

凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，其测定原理为在催化剂的条件下，浓硫酸将样品有机氮消化分解为氨，氨再与硫酸反应生成硫酸铵，再碱的条件下蒸馏出氨，用过量硼酸吸收蒸馏出的氨，最后用强酸滴定出总氮量，根据总氮量换算出蛋白质含量[1]。凯氏定氮法中可用的催化剂种类较多，如硫酸铜、氧化汞、汞、硒粉、二氧化钛等。但不同催化剂测定血液制品蛋白质含量的差异未见有学者进行深入探讨。本文通过对人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4）、人免疫球蛋白三个血液制品品种使用两种催化剂进行蛋白质含量测定的结果进行分析，为不同催化剂在蛋白质含量测定中条件提供参考资料。

1.材料与方法

1.1实验样品：人血白蛋白10g/瓶（20%，50ml）；静注人免疫球蛋白（pH4）1.25g/瓶（5%，25ml）；人免疫球蛋白150mg/瓶（10%，1.5ml）由广西冠峰生物制品有限公司提供。

1.2实验试剂：硫酸铜-硫酸钾混合催化剂（厂家：西陇化工股份有限公司，批号：20170319）；硒粉-硫酸钾混合催化剂（厂家：北京金元兴科科技有限公司，批号：20180303）；硫酸（厂家：廉江市爱廉化试剂有限公司，批号：20131108）；钨酸钠（厂家：天津市光复精细化工研究所，批号：20160406）；氯化钠（厂家：天津市光复科技发展有限公司，批号：160802）；氢氧化钠（厂家：西陇化工股份有限公司，批号：1603011）；硼酸（厂家：西陇化工股份有限公司，批号：150722）；0.005mol/L硫酸滴定液；甲基红（厂家：天津市光复科技发展有限公司，批号：20151031）；溴甲酚绿（厂家：天津市光复精细化工研究所，批号：YW08.03）

1.3实验器材：KND-1000凯氏定氮仪（上海新嘉电子有限公司）；电炉；消化管、单标移液管、容量瓶、锥形瓶、移液枪、研钵。

1.4方法

1.4.1设立实验A、B两组，其中硫酸铜-硫酸钾混合催化剂为A组，硒粉-硫酸钾混合催化剂为B组，用0.9%氯化钠溶液做空白。

1.4.2 总氮供试溶液的配制：精密量取人血白蛋白2.0ml，用0.9%氯化钠溶液稀释至50ml；精密量取静注人免疫球蛋白（pH4）1.0ml，用0.9%氯化钠溶液稀释至10ml；精密量取人免疫球蛋白1.0ml，用0.9%氯化钠溶液稀释至20ml。分别取1.0ml放入消化管中，加入催化剂1 g（A组放硫酸铜-硫酸钾；B组放硒粉-硫酸钾），硫酸6 ml。

1.4.3非蛋白氮的配制：精密量取供试品，置20 ml容量瓶中加水10 ml，加10 %钨酸钠溶液2.0 ml，0.33 mol/L硫酸溶液2.0 ml，加超纯水至刻度。或精密量取上述供试品2 ml加水14.0 ml，10 %钨酸钠溶液2.0 ml，0.33 mol/L硫酸溶液2.0 ml。摇匀，静置30 min，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

1.4.4消化：用直火缓缓加热使温度在硫酸沸点以下，待消化液内水分充分挥发且不剧烈沸腾时升高温度，保持约400℃（1200w左右）消化至A组溶液成澄明的绿色，B组溶液成澄明无色，关火，冷却10min后取出。

1.4.5定氮仪蒸馏：清洗仪器后，将配制好的碱液、吸收液和蒸馏水分别放置在仪器相应位置，按照仪器操作规程的要求将已冷却的的消化管装入正确位置，关上安全门，连接上水源，设定碱量50 ml、水量10 ml、时间7min、清洗条件及其他仪器参数等；接收瓶加入10 ml硼酸和10滴指示剂，并将冷凝管尖端插入液面下，开始蒸馏。

1.4.6滴定：馏出液用硫酸滴定液（0.005 mol/L）滴定，溶液呈蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸滴定液相当于0.1401 mg的N。以总氮量减去非蛋白氮量即为供试品溶液的含氮量。氮转换为蛋白质的换算系数为6.25。

1.5数据分析标准

A、B两组检测蛋白质含量结果F＜Fα则说明两组检测结果无显著性差异。

1.6结果

1.6.1人血白蛋白测定结果：分别使用A、B两种催化剂测定6次人血白蛋白蛋白质含量，其消耗时间及蛋白质含量结果见表

1，两组数据使用单因素方差分析F＜Fα，表明两组结果无显著性差异，结果图1。

表1人血白蛋白测试结果

图1：单因素方差分析图

1.6.2静注人免疫球蛋白（pH4）测定结果：分别使用A、B两种催化剂测定6次静注人免疫球蛋白（pH4）蛋白质含量，其消耗时间及蛋白质含量结果见表2，两组数据使用单因素方差分析F＜Fα，表明两组结果无显著性差异，结果图2。

表2静注人免疫球蛋白（pH4）测试结果

图2：单因素方差分析图

1.6.3人免疫球蛋白测定结果：分别使用A、B两种催化剂测定6次人免疫球蛋白蛋白质含量，其消耗时间及蛋白质含量结果见表3，两组数据使用单因素方差分析F＜Fα，表明两组结果无显著性差异，结果图3。

表3人免疫球蛋白测试结果

图3：单因素方差分析图

1.7结论

通过用不同催化剂对血液制品凯氏定氮法测定蛋白质含量的测定实验结果分析，硫酸铜-硫酸钾混合催化剂消化时间需约90分钟，而硒粉-硫酸钾很合催化剂消化时间仅需约50分钟，大大缩减了消化时间，两种催化剂测定结果无显著性差异，在中间产品生产时，生产车间需等待定氮的结果进行后续的配制，因此实验过程耗时越短对后续的生产越有利，可以缩短生产等待的时间，也能缩短产品放置时间，降低产品受污染的风险。

参考文献：[1]郭颖娜, 孙卫.蛋白质含量测定方法的比较[J].河北化工. 2008 年 04 月.第31卷第4期