化妆品类微生物检验项目

1化妆品与微生物关系

每当美容产品增加一种新功能，其原料也会相应地增加一种，原料中包含各种营养素，为细菌生长提供机会。并且化妆品基本上都是由水分构成的，潮湿的环境更有利于病原微生物的生长和繁殖。此外化妆品的酸碱度为PH4-7之间，储藏温度20~30℃，这些均与细菌、霉菌等致病菌的生长条件接近。这些都是导致病菌在化妆品中生长繁殖的原因，假若一些劣质的化妆品中含有大量的致病菌，或贮存时产生霉变，则会引起使用者的各种病症，因此，如何有效地监测并控制致病菌，就显得尤为重要。

2常见微生物

化妆品产品中常见的细菌包括：绿脓杆菌、嗜麦芽假单胞菌、盐碱假单胞菌、奥斯陆毛霉菌、阴沟肠杆菌、产气性克雷伯氏菌。

3检测原理

药品和化妆品在生产、贮存、运输、使用等各个环节，都会因种种原因而引起质量变化。这些原因其一就是由所谓微生物所造成的，微生物是指一种非常微小的有机体，通常包括细菌，酵母，霉菌，病毒等等。被微生物污染的化妆品或药品，会使其理化性质（如颜色、气味等）发生改变，使其活性成分发生变化，有些甚至会导致致敏、中毒、病毒等，所以，对化妆品或药品中的微生物进行严格的控制是必要的。

菌落总数指的是检样经过处理，并在一定的条件下进行培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），在1 g（1 mL）检样中所含菌落的总数。得到的结果仅包含在该方法所述条件下生长的一组嗜中等温度需氧细菌的总数量。

霉菌和酵母菌的总数，是指1 g或1 mL化妆品中，经试样在一定条件下培养后，被污染的活的霉菌和酵母菌的菌落总数，以判明其对霉菌和酵母菌的污染程度及其总体卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃培养72h，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

4检测技术

（1）快速测试片技术

本方法是目前使用最多、操作简单、快捷的方法，在食品中各种微生物指标的测定中得到广泛的应用。测试片由上下两层薄膜组成，下层的聚乙烯薄膜上印有网格，并被细菌繁殖所需的培养基所覆盖，在这两层薄膜中添加显色剂，上层为聚丙烯薄膜，并添加冷水可溶凝胶，使用时，揭开覆盖的薄膜，将样品滴加到纸片中心，37℃下培养48 h左右，阳性菌落则在测试片上呈红色或粉红色。

（2）聚合酶链式反应技术

PCR技术的基本原理是以特定菌群中的特定基因为靶标，通过设计特异性引物，对目标菌群进行PCR扩增。如果出现条带，表明待测样本中包含目标菌，并且色带的亮度与目标菌含量成正比；如果没有出现带状，表明待测样本中没有目的菌。

（3）三磷酸腺苷生物发光检测技术

三磷酸腺苷(ATP)生物发光技术的原理是荧光素酶(Firefly luciferase)以D一荧光素(D—luciferin)、ATP和氧气为底物，在M92+离子的作用下，化学能向光能转换，产生光量子效应。利用荧光强度与ATP在一定的浓度范围内成线性关系的条件，通过测量ATP含量，就可以推断出样品中的细菌数量，整个过程只需要十几分钟。

（4）电阻抗技术

电阻抗技术的原理是：细菌在培养基中生长和繁殖的过程中，会将培养基中的电惰性大分子物质，如碳水化合物、蛋白质和脂类等代谢为具有电活性的小分子物质，如乳酸盐和乙酸盐等。这些离子态物质可以增加培养基的导电性，从而引起其阻抗的改变。可根据介质的电阻抗变化，判断出细菌在介质中的生长、繁殖特点，进而进行相应细菌的检测。本方法在细菌总数，霉菌，酵母菌，大肠杆菌，沙门氏菌，金葡菌等方面均有较好的应用。

（5）荧光光电法

在采用荧光光电法检测微生物中具有代表性的是美国BioLumix实时陕速微生物荧光光电检测系统，该系统将最新的荧光光电技术、染色技术、CO2传感技术和特异性的培养技术结合在一起检测生物体的代谢过程，使之能够同步检测颜色和光子的变化，目标微生物在特定培养基中的生长和代谢可通过感光试剂（色彩和荧光染色）检测。当代谢过程发生时，试剂的光谱模式会发生改变，光传感器检测到这些变化后以预先设定好的时间间隔进行监控并报告检测结果，菌量越高检测时间越短。

（6）微生物挥发性有机化合物检测技术

微生物在代谢的过程中，会产生微生物挥发性有机化合物（MVOCs)，它的种类多样性和种属特异性，MVOCs是一类重要的有机污染物，前期工作中，已获得349种细菌和69种真菌的近1000种活性成分，并完成它们的化学结构和代谢途径的研究。MVOCs对发酵食品的风味与质量起着决定性作用，其检测能够对食品变质过程进行早期、快速、有效的检测，实现对食品变质过程的早期防控，具有重要的理论与实际意义。此法还可应用于化妆品中的微生物分析。Alvarez—Rivera等利用顶空固相微萃取技术与气相色谱一质谱法（HSSPME—GC/MS）对被污染化妆品中微生物释放的MVOCs进行收集并检测，结果表明，该方法可以对化妆品中的微生物进行准确地识别，同时还可以对微生物污染的过程进行动态监测。

5现存问题

目前，我国化妆品微生物检验工作中，由于多种原因，仍存在着许多问题。

化妆品微生物检测面临着严峻的考验。目前，化妆品微生物的检验方法以抽样检测为主，这种方法的运用，一方面会受人为因素的影响，另一方面也会受技术问题的制约，使化妆品微生物检验工作变得更加困难。

化妆品微生物检测没有引起足够的关注，其原因是：第一，目前对化妆品中存在的微生物问题尚未引起足够的重视，更多地把注意力放在化学污染上。第二，无论从实际操作手段和理论基础来看，我们对化妆品微生物检测技术的依赖性仍然较强，这极大地阻碍化妆品微生物检测工作的高效进行，从而阻碍整个化妆品行业的发展和进步。