5种蒙药汤剂不同煎煮时间的微生物限度检查及污染情况分析

5种蒙药汤剂不同煎煮时间的微生物限度检查及污染情况分析

胡日瓦 满都拉 乌日尼勒 陈羽涵 昂格乐玛 乌仁图雅 贺喜格达来

鄂尔多斯市蒙医医院，内蒙古鄂尔多斯 017010

摘要：目的 通过微生物限度检查法对5种蒙药汤剂进行不同煎煮时间的微生物生长有无影响进行检查。方法 选择5种蒙药汤剂，分别文火煎煮1min、3min、5min、和无煎煮进行对比实验，检查方法采用2020年版《中国药典》非无菌产品微生物限度检查法。结果 5种蒙药汤剂不同时间中，煎煮5min时需氧菌和霉菌/酵母菌的菌落数量最少，其依次为3min、1min和无煎煮组；耐胆盐革兰阴性菌和大肠埃希菌均未检出。结论 蒙药汤剂为非无菌产品，患者在煎煮口服用药当中为安全隐患考虑，考察汤剂不同时间的煎煮对其进行微生物的检查，文火煎煮时间3到5分钟杂菌生长较少，从而保障用药安全和保证疗效。

关键词：蒙药汤剂；微生物；污染分析

作者简介：胡日瓦（1994年8月-）性别：女，民族：蒙古族，籍贯：内蒙古鄂尔多斯市杭锦旗，学历：硕士研究生，研究方向：药品检验

传统蒙药剂型中有汤剂、散剂、丸剂、灰剂、酒剂、膏剂等。相比散剂和丸剂，汤剂制备工艺简易、无需灭菌、吸收快、起效迅速等优点[1-2]。因蒙药汤剂多为煎煮剂，用不锈钢容器、砂锅、瓦罐里煎煮[3-4]，并用文火煎煮或热浸法可确保挥发油以及各种化学成分的损害降到最低。

据近期传统蒙药相关报道中，敖志远[5]提到蒙药汤剂服用的便捷有效新方法，表明微波煎煮法节能省时并方便快捷，保温热浸法在条件有限的情况下也是一种简便有效可行的方法。斯琴图雅等人[3]报道蒙药汤剂煎煮条件与汤剂疗效的关系，提出蒙药汤剂煎煮条件及相关建议和要求，从而达到保证疗效。据中药相关报道中，张平等人[6]考察 50 种中药煎煮类饮片的微生物污染情况，分析不同炮制方法、不同类别饮片对微生物生长的影响。范一灵等人[7]研究中药饮片及中药代煎剂中的微生物负载情况，了解中药代煎剂产品的微生物用药风险。根据以往报道中缺乏蒙药汤剂的微生物限度的考察相关资料。本文初步对煎煮后的蒙药汤剂的微生物限度的检查及污染情况进行分析研究。

1 仪器与材料

1.1仪器

全自动立式高压灭菌器(型号GR60DR)；医用洁净工作台(型号BSC-1500IIA2-X)；生化培养箱(型号BSP-250)、九阳电磁炉(型号JYC-21GS02)。

1.2材料

实验材料产自内蒙古鄂尔多斯市蒙医医院院内制剂，分别为沙参止咳汤散、森登-4汤、嘎古拉-4汤、协日嘎-4汤、三子汤，共收集5种制剂，每种制剂量不少于100g。培养基为pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号2102242）、胰酪大豆胨琼脂培养基（批号20220505）、胰酪大豆胨液体培养基（批号21041617）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（批号2106024）、麦康凯液体培养基（批号20200713）、麦康凯琼脂培养基（批号20220530）、肠道菌增菌液体培养基（批号20190218）、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（批号21021981），购自北京路桥和海博生物公司。

2 方法与结果

2.1方法

供试品各取10g，加入已灭菌的纯化水（121℃,15min）200ml，分别文火蒸煮1min、3min、5min、和无蒸煮进行对比实验，检查方法采用2020年版《中国药典》四部1106非无菌产品微生物限度检查法，以常规法检查需氧菌、霉菌和酵母菌、耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌。

2.2结果

2.2.1需氧菌菌落计数结果

通过对5种蒙药煎煮汤剂在不同煎煮时间的需氧菌对比试验（表1），其结果为：沙参止咳汤散在文火煎煮5min和3min时需氧菌菌落数量最少为200cfu/g，其依次为1min和无煎煮组；森登-4汤文火煎煮5min和3min时需氧菌菌落数量最少为100cfu/g，其依次为1min和无煎煮；嘎古拉-4汤文火煎煮5min时需氧菌菌落数量最少为100cfu/g，其依次为3min、1min和无煎煮组；协日嘎-4汤文火煎煮5min时需氧菌菌落数量最少为1000cfu/g，其依次为3min、1min和无煎煮组；三子汤文火煎煮5min时需氧菌菌落数量最少为0cfu/g，其依次为3min、1min和无煎煮组。

表15种蒙药煎煮汤剂在不同煎煮时间的需氧菌对比试验

备注：此结果稀释级别为100级。时间（min）；菌落数量（cfu/g）。

2.2.2霉菌/酵母菌菌落计数结果

通过对5种蒙药煎煮汤剂在不同煎煮时间的霉菌/酵母菌对比试验（表2），其结果为：沙参止咳汤散在文火煎煮5min时结果为0cfu/g，其依次为3min、1min和无煎煮组；森登-4汤文火煎煮5min和3min时霉菌/酵母菌菌落数量最少为0cfu/g，其依次为1min和无煎煮；嘎古拉-4汤文火煎煮5min时霉菌/酵母菌菌落数量最少为0cfu/g，其依次为3min、1min和无煎煮组；协日嘎-4汤文火煎煮5min时霉菌/酵母菌菌落数量最少为100cfu/g，其依次为3min、1min和无煎煮组；三子汤文火煎煮5min时需氧菌菌落数量最少为0cfu/g，其次为3min、1min和无煎煮组为100cfu/g。

表25种蒙药煎煮汤剂在不同煎煮时间的霉菌/酵母菌对比试验

备注：此结果稀释级别为100级。时间（min）；菌落数量（cfu/g）。

2.2.3耐胆盐革兰阴性菌和大肠埃希菌菌落计数结果

通过对5种蒙药煎煮汤剂在不同煎煮时间的耐胆盐革兰阴性菌和大肠埃希菌对比试验，其结果为均未生长耐胆盐革兰阴性菌和大肠埃希菌。

3污染情况分析

在《中华人民共和国药典》2020 年版四部中煎煮汤剂无微生物限量标准，但从保护患者健康，降低用药风险的角度考虑，有必要对蒙药汤剂的微生物污染的控制和管理，合理地控制微生物污染，最终保障用药安全。此次对5种蒙药的微生物限度检查，煎煮时间越久越不利于微生物的生长。

根据药材生产到制剂生产，探讨初步的污染情况，减少其中遇到的污染情况。原药材微生物限度标准的缺失，无形中增加了患者在使用煎煮汤剂的用药风险；在原料药以及饮片的厂家，制剂配置到生产整个工艺流程需要达到卫生要求；药品生产线中成品监管隐患，在制剂混合破碎和加工时对仪器的清洁消毒、卫生等等。

4结论与讨论

蒙药汤剂为非无菌产品，患者在煎煮口服用药当中为保障用药安全和保证疗效，选择考察不同汤剂不同时间的煎煮对其进行微生物限度的检查。在本实验中发现，煎煮时间越久越不利于杂菌的生长，对蒙药汤剂用文火煎煮时间控制在3到5分钟即可；通过对5种不同汤剂的微生物检查对比情况为森登-4汤和三子汤明显有抗菌作用（图1），菌落数量明显少于其他三组，其森登-4汤的方剂组成为文冠木、诃子、川楝子和栀子，而三子汤的方剂组成为诃子、川楝子和栀子。在后续研究当中对三子汤的抗菌作用可进行进一步的研究。

图15种蒙药汤剂的需氧菌对比图

备注：1.沙参止咳汤散;2.森登-4汤;3.嘎古拉-4汤;4.协日嘎-4汤;5.三子汤。

参考文献：

［1］文都斯．浅谈蒙药汤剂［J］．中国民族医药杂志，2017，06(6): 33－34．

［2］李英格，王秀兰，冬梅等．试论蒙药汤剂与中药汤剂之区别［J］．中国民族民间医药杂志，2002，54(01): 1－2．

［3］斯琴图雅，桂香，曹乌吉斯古楞．探讨蒙药汤剂煎煮条件对疗效的影响［J］．内蒙古医科大学学报，2015，S2(37): 264－266．

［4］巴根那主编．蒙医方剂［M］．呼和浩特:内蒙古人民出版社，2007: 7－8．

［5］敖志远．蒙药汤剂服用的便捷有效新方法［J］．中国民族医药杂志，2019，06(25): 70－73．

［6］张平，石春红，胡亚英等．50 种中药煎煮类饮片微生物检查方法研究及污染情况分析［J］．中国药业，2021，30(03): 40－44．

［7］范一灵，李琼琼，杨燕等．中药饮片及中药代煎剂中微生物污染调查与分析［J］．药物分析杂志，2020，40(10): 1828－1836．

[∆] 基金项目：鄂尔多斯市医学重点学科建设项目

通讯作者简介：贺喜格达来，主任蒙药师，鄂尔多斯市蒙医医院蒙药实验室（017010）