当归提取物的毒性研究

当归提取物的毒性研究

朱家琪 谢静宜 王建福

潍坊医学院   山东潍坊 261053

摘要:目的研究当归提取物的急性毒性、遗传毒性和亚慢性毒性。方法采用小鼠急性经口毒性试验、三项遗传毒性试验( Ames试验、骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验) 、90d喂养试验对当归提取物的安全性毒理学进行研究。结果 当归提取物对雌、雄昆明种小鼠的最大耐受剂量(MTD)均大于20g/kg·bw，属无毒级；Ames试验、骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性，90d喂养试验各剂量组大鼠体重增加、食物摄入量、食物利用率、脏器/体重比值与对照组比较均无异常，血液学指标和生化指标值在正常范围内，大鼠主要脏器组织未见有意义的病理学改变；未观察到有害作用剂量大于10.00g/kg·bw。结论 在本实验条件下，当归提取物未见明显毒副作用。

关键词:当归；急毒；遗传；亚慢性

当归是伞形科植物当归的干燥根。常生长于海拔2千米以上高寒多湿的山区，主产于甘肃东南部、云南、四川等地。化学成分包括挥发油、多糖、有机酸、氨基酸和黄酮类等，其中挥发油中以蒿本内酯的含量最高，有机酸成分主要包括阿魏酸、香草酸、丁二酸、二十四烷酸、棕榈酸等。当归性温，味甘、辛，归心、肝、脾经，具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效[1]。

本实验通过对当归提取物的急性毒性、遗传毒性和亚慢性毒性进行研究，为其进一步研究开发提供毒理学依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1受试物   当归药材用60%乙醇回流提取、浓缩、干燥得到提取物粉末，经检测阿魏酸0.24%。人体推荐量为0.72g。

1.1.2 实验动物SPF级昆明种小鼠、SD大鼠，饲养环境为屏障环境，温度为22℃-24℃。

1.2方法

1.2.1 小鼠急性毒性试验  采用最大耐受量试验。选用昆明种小鼠20只，体重为(19.0±1.0) g，雌雄各半。取受试物50g加纯化水至100ml，给小鼠1d内间隔4h经口灌胃2次，每次灌胃体积为0.2ml/10g·bw，累积剂量为20g/kg·bw。灌胃前禁食16h，灌胃后连续观察两周，记录中毒表现及死亡情况。

1.2.2Ames试验 采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型 TA97、TA98、TA100、TA1024株菌株进行试验。试验设5000、1000、200、40、8μg/皿 5个剂量组，同时设自发回变、溶剂对照和阳性突变剂对照。采用平板掺入法，对5个剂量组同时予以加与不加S-9的试验，每组做3个平行皿，如果受试物的回变菌落数超过自发回变菌落数的2倍以上，并有剂量—反应关系者定为阳性。整套试验在相同试验条件下重复一次并分别统计。

1.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验采用间隔24h两次经口灌胃法进行试验。取体重为(27.0±1.0)g 的昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以0.04g/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，1%羧甲基纤维素钠为阴性对照。试验组高、中、低剂量分别为10.00、5.00、2.50g/kg·bw。末次给样后6h颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓涂片，计数嗜多染红细胞(PCE)微核发生率，按X2检验统计分析。

1.2.4 小鼠精子畸形试验取体重(29.0±2.0)g的雄性昆明种小鼠25只，随机分为5组，每组5只。阳性对照、阴性对照和高、中、低试验组设置同1.2.3。每日灌胃一次，连续5d，于末次灌胃后的第30d处死动物，取附睾精子涂片计算畸变精子发生率，按X2检验统计分析。

1.2.590d喂养试验取体重(75.9±8.2)g的SD大鼠80只，雌雄各半。将实验动物随机分为四组。设低、中、高受试物组剂量分别为1.2、2.4、3.6g/kg·bw，约相当于人体推荐剂量的100、200、300倍。对照组给予等体积的纯化水，连续90d。实验期间每周加食2-3次，记录给食量和剩食量，每周称一次体重。计算动物增重、食物利用率，测定血常规、生化等血液学指标。肉眼观察脏器的一般病变，称量并计算脏体比值。对肝、肾、脾、胃、肠、睾丸、卵巢作病理切片检查。

1.2.6统计分析实验数据用Excel、SPSS11.5软件进行统计分析，检验水准α=0.05(双侧) 。

2结 果

2.1  当归提取物对小鼠急性毒性的影响  以20g/kg·bw 剂量的当归提取物给两种性别的昆明种小鼠灌胃后未见明显中毒症状，观察14d无死亡。第15d处死受试动物，肝、脾、肾、胃、肠、心、肺等主要脏器未见明显异常改变。当归提取物对昆明种雌、雄小鼠的最大耐受剂量(MTD)大于20g/kg·bw。

2.2  当归提取物对遗传毒性的影响

2.2.1 Ames 试验  对4株试验菌株，在加与不加S-9条件下，各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量—反应关系，表明当归提取物为诱变阴性。

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 雄鼠低、中、高剂量组微核率为（1.2-1.6）‰，与阴性对照组1.4‰比较差异无统计学意义，而环磷酰胺组微核率23.6‰与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05); 雌鼠低、中、高剂量组微核率为(1.4-1.8)‰，与阴性对照组1.4‰比较差异无统计学意义，而环磷酰胺组微核率24.8‰与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 1 当归提取物小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验结果

2.2.3 小鼠精子畸形试验  当归提取物对小鼠精子畸形发生率未产生明显改变，各剂量组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，而环磷酰胺组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 2当归提取物对小鼠精子畸形发生率的影响

2.3 当归提取物对SD大鼠亚慢性毒性的影响  90d喂养试验期间对照组和3个剂量组动物生长发育良好，摄食、饮水、大小便活动均正常。未观察到任何异常行为和体征。各剂量组大鼠体重、增重、进食量、食物利用率、血液学指标、血生化指标、脏器/体重比值与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。大体解剖肉眼观察各脏器未见明显异常; 组织学切片检查可见各剂量组肝、脾、肾、肠、胃、睾丸、卵巢与对照组比较均无有意义的病理改变。

3结论

当归提取物对雌、雄昆明种小鼠的最大耐受剂量(MTD)均大于20g/kg·bw，属无毒级；Ames试验、骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性，90d喂养试验各剂量组大鼠体重增加、食物摄入量、食物利用率、脏器/体重比值与对照组比较均无异常，血液学指标和生化指标值在正常范围内，大鼠主要脏器组织未见有意义的病理学改变；未观察到有害作用剂量大于10.00g/kg·bw。结论：在本实验条件下，当归提取物未见明显毒副作用。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京：中国医药科技出版社.2020.