他氟前列素滴眼液无菌检验方法验证

他氟前列素滴眼液无菌检验方法验证

彭文娅

重庆科瑞制药（集团）有限公司微生物实验室，邮编 400060

摘要：目的建立他氟前列素滴眼液无菌检验方法。方法依据《中国药典》2020版四部附录1101无菌检查法，取供试品15瓶，集菌器一套，将供试品全量混合至含有300mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌容器中，混匀后通过集菌仪加入到滤筒中，过滤完全；用0.1%无菌蛋白胨水溶液100ml/次冲洗滤膜，冲洗8次，流速为120ml/min，将其中2个滤筒分别加入硫乙醇酸盐流体培养基100ml，1个作为供试品需氧菌厌氧菌（30-35°C）培养，1个加入金黄色葡萄球菌（不大于100cfu）1ml作为阳性对照培养（30-35°C），剩下1个滤筒加入胰酪大豆胨液体培养基100ml，作为供试品真菌及需氧菌（20-25°C）培养，依法检查。结果菌液组和试验组接种的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌均在48小时内培养基变浑浊；枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉在72小时内培养基变浑浊。结论 建立此无菌检查测定方法准确、可靠，用于他氟前列素滴眼液无菌检查。

关键词：他氟前列素滴眼液；薄膜过滤法

 为保证产品无菌品质，开展无菌检验是检验工作中的重要环节。开展无菌验证方法的建立，为该产品无菌检验提供技术支持，报告如下：

仪器与试药

2.1制备试验菌液

接种大肠埃希菌、枯草芽孢菌、金黄色葡萄球菌新鲜培养物到TSA培养基上，接种生孢

梭菌的新鲜培养物至FTM培养基中，30~35℃培养18~24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至SDA斜面上，20~25℃培养2天，上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液，黑曲霉菌[CMCC（F）98003]质控菌株（1000-9999cfu/颗）至复溶液（1.1ml）中，震荡混匀使菌株完全溶解20~25℃培养5天。

2.2验证用无菌检查方法：

需气厌氧菌：取供试品5瓶，滤筒1个，用少量0.1%无菌蛋白胨水溶液润湿滤膜后过滤润湿液，采用集菌仪将5瓶供试品全量混合至含有100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌容器中，振摇过滤，用0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗，冲洗次数分别为3、5、8次，100ml/次，流速为120ml/min，在最后一次100ml冲洗液中加入金黄色葡萄球菌（不大于100cfu/ml），过滤，再加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基至滤筒中，摇匀，置于规定温度培养不超过5天。同法操作，每次分别加入大肠埃希菌、生孢羧菌试验；

需氧菌真菌：取供试品5瓶，滤筒1个，用少量0.1%无菌蛋白胨水溶液润湿滤膜后过滤润湿液，采用集菌仪将5瓶供试品全量混合至含有100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌容器中，振摇过滤，用0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗，冲洗次数分别为3、5、8次，100ml/次，流速为120ml/min，在最后一次100ml冲洗液中加入白色念珠菌（不大于100cfu/ml），过滤，再加入100ml胰酪大豆胨液体培养基至滤筒中，摇匀，置于规定温度培养不超过5天。同法操作，每次分别加入枯草芽孢杆菌、黑曲霉试验。

阳性对照：另取1瓶装有相同体积培养基的容器，加入等量试验菌，置规定的温度下进行培养。

结果判断：在规定的温度下培养不超过5天，试验组与阳性对照组应在相同的时间内生长良好。

3、验证结果

需气菌厌氧菌验证

需氧菌真菌验证

通过表格数据验证结果显示：他氟前列素滴眼液采用薄膜过滤法进行无菌检查方法如下：取供试品15瓶，集菌器一套，将供试品全量混合至含有300mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌容器中，混匀后通过集菌仪加入到滤筒中，过滤完全；用0.1%无菌蛋白胨水溶液100ml/次冲洗滤膜，冲洗8次，流速为120ml/min，将其中2个滤筒分别加入硫乙醇酸盐流体培养基100ml，1个作为供试品需氧菌厌氧菌培养，1个加入金黄色葡萄球菌（不大于100cfu）1ml作为阳性对照培养，剩下1个滤筒加入胰酪大豆胨液体培养基100ml，作为供试品真菌及需氧菌培养，依照《中国药典》2020年版四部

1101无菌检查法，依法检查，应符合规定。

4、结果讨论

与菌液组对比，大肠、生孢、枯草、金黄、白色黑曲在冲洗3、5、8次时，在24-48小时培养基均浑浊，冲洗次数都可以消除该药品的抑菌性，符合无菌验证规定，从节约试剂，简化操作程序出发，该样品无菌方法建立冲洗次数规定为8次。

参考文献：《中国药典》2020版第四部