简介:摘要目的利用毕赤酵母高效表达新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD),并评估以该RBD蛋白作为抗原所制备的疫苗组合物的免疫原性。方法选取RBD蛋白并合成对应基因片段,将其构建至pPICZαA质粒,质粒经线性化转化后整合到毕赤酵母基因组中进行重组表达。Western blot和基于BLI(Biolayer Interferometry)技术的定量分析方法对培养上清中RBD蛋白进行检测,筛选能够分泌表达RBD蛋白的单克隆菌株。通过优化发酵工艺,包括培养基的盐浓度调整和诱导条件优化(pH、温度和时间等参数),实现RBD蛋白的高效表达,并在小鼠体内评估其免疫原性。结果筛选获得重组RBD蛋白表达效果较好的RBD-X33单克隆菌株。通过优化后的发酵工艺,即采用HBSM培养基、诱导pH为6.5±0.3、诱导温度为22℃、诱导时间持续120 h,实现发酵收获上清中重组RBD的表达量达到240 mg/L。在小鼠免疫原性试验中,采用铝+CpG双佐剂系统吸附重组RBD蛋白的疫苗组合物能够激发小鼠产生2.7×106结合抗体滴度和726.8活病毒(野生型)中和抗体滴度。结论采用毕赤酵母表达系统能够高效表达重组RBD蛋白,且所表达的RBD蛋白能够有效激发动物产生免疫应答。本研究为基于RBD蛋白的重组新型冠状病毒疫苗的开发提供了参考。
简介:摘要目的探讨程式化腔镜手术治疗甲状腺微小乳头状癌(PTMC)的经验和效果。方法回顾分析中山大学附属东华医院2018年1月至2019年9月51例行经胸乳入路颈部无瘢痕腔镜甲状腺手术(SET)治疗的PTMC患者的临床资料。手术操作采用程式化步骤:建立手术空间、三部法切除甲状腺、中央区淋巴结清扫、关闭手术空间。结果51例患者中,行单侧甲状腺腺叶+峡部切除25例,甲状腺全/近全切除26例;预防性中央区淋巴结清扫(CLND)16例。51例术中全部显露喉返神经,35例显露喉上神经外支,无中转开放颈部切口手术者。术后随访42例,其中2例出现声音嘶哑和单侧喉返神经麻痹,分别于术后第55和75天恢复;无呛咳、声音低钝及永久性低钙发生;颈部皮肤感觉异常1例,3个月后逐渐好转。结论程式化腔镜甲状腺手术可提升治疗的安全性。