简介：

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简介：目前,在供体器官短缺的情况下,大家公认猪是最合适的异种器官和组织的提供者,用猪肝细胞治疗急性肝衰病人已有报道.如何将肝细胞最大限度完整地、无损伤地分离出来,这是非常关键和重要的一步.我室在进行猪肝细胞的分离中,逐渐探索出一套比较行之有效的方法.材料与方法:采用中国实验用小型猪,常规麻醉、消毒、开腹,用D-Hank′s液进行肝脏原位灌注,再用0.02%EDTA-Hank′s液(37℃)灌注18～20min,摘取肝脏行多点灌注5min,置肝脏于60目钢网上,用直剪迅速剪开肝脏被膜,用镊子夹起轻轻抖动,并用1640液冲洗,边抖动边冲洗,使细胞滤出漏于烧杯中.与此同时,用剪刀把肝组织剪成小块,再用玻璃注射器芯轻轻研磨,边研磨边冲洗,操作要轻,并保持无菌,收集肝细胞,离心洗涤三次,并逐级用80目、100目、120目、150目钢网过滤.分离出的肝细胞进行计数、台盼蓝拒染试验检查、PAS染色、葡萄糖-6-磷酸酶染色及电镜检查.结果:肝细胞存活率90±1.3%,PAS染色显示肝糖元丰富,葡萄糖-6-磷酸酶染色显示酶的活性良好.电镜观察,肝细胞的线粒体、内质网等亚显微结构未见异常.对于猪肝细胞的分离,国外文献报道多采用Ⅳ型胶原酶循环灌注法,但费用很昂贵.在实践中,我们用EDTA代替胶原酶,采用肝脏原位灌注+多点灌注+机械研磨的方法,取得了较为满意的效果.此法与胶原酶灌注法比较,从分离的肝细胞数量、活力、肝糖元及细胞中一些酶的活性都与胶原酶法无显著差异,且光镜及电镜观察,显示细胞形态及亚细胞结构未见异常.我们认为此方法易于控制,价格低廉;而胶原酶法容易消化过度,造成细胞膜破损,或消化不完全造成多个细胞连在一起,且费用昂贵.实验证明,改良的猪肝细胞分离方法为用猪肝细胞治疗急性肝衰病人的研究提供了一个可行的方法.

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简介：成年人脑组织发育完善,不会由于操作不慎引起损伤而变形,而胎婴儿脑组织发育不熟,质脆易脆,尤其是畸形者,在取脑,固定,切面,任何一个环节操作不慎,均引起不同程度损伤,或变形失去原有形态结构,给诊断和教学工作带来不必要困难.为了保持原有形态结构,根据别人介绍经验,寻找一种比较适应行之有效方法,水浮取脑法,我们作了一些尝试,现介绍如下:

简介：长期以来,Guguen等[1]的两步胶原酶灌注法分离获得肝细胞的方法,几乎成了肝细胞分离的经典方法;在此基础上又发展了多种不同的培养方法,如在培养瓶内加纤连蛋白(febronectin)以促进肝细胞附壁[2],添加生长因子于培养基促其生长等.但上述方法步骤繁琐,成本较高,且两步胶原酶灌注法主用于大鼠肝细胞的分离,不适于新生鼠肝细胞的分离,甚至分离成年小鼠肝细胞,都因为血管的纤细,在实际应用中也很困难.

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简介：山羊是医学试验常用动物,在制作其心脏血管铸型时发现,若用一般的人心血管铸型方法,较难得到理想效果,几经尝试成功摸索出了简单有效的制作方法,介绍如下.

简介：改进组织学超微结构教学方法邹晓菊，章为，解文华西医大组织学与胚胎学教研室成都６１００４１组织学是医学院校的基础课程之一，由于它具有重要地位，历来受到教、学双方的高度重视。而组织学教学过程中细胞、组织和器官超微结构知识是组织学＂三基＂内容之一，而贯穿于...

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简介：人体解剖学是研究正常人体形态结构的科学，是医学院校的一门重要的基础形态学科，特别是解剖学实验课显得更为重要，它既是验证理论课的内容，又是理论课的复习，更是解剖学知识的深化和提高。随着国际交流的不断扩大，来华留学生日益增多，留学生教学的研究成为各高等院校一个崭新的课题，其教学模式、教学方法及教学手段等问题都具有极大的探索价值。我校自2002年开始招收巴基斯坦留学生，针对学生的特点及该学科的特点，运用多种教学方法，激发学生的学习兴趣，提高学生思考问题、解决问题的能力，取得以下的一些经验和体会。

简介：组织学是一门形态学科,因而学生在学习过程中容易死记形态结构而忽略其功能.组织学研究的又是人体微细结构,肉眼看不见摸不着,显微镜下也只能看见某个平面.如果死记形态结构,没有理解,确实枯燥、抽象、难记.这样学的知识既零碎,又死板,没有多少用处.实际上组织学研究是从人体微细结构及相关功能,是一门相当活跃的医学基础课.如果把形态结构与功能有机地结合起来进行教学,就可化枯燥为形象,变死板为生动,把看起来零碎的、互不相干的形态结构变为有逻辑性的系统知识,使其易学、易懂、易记.

简介：对于溃变神经纤维的镀染,Nute法是较可靠的形态学方法之一,但存在着程度较为复杂、烦锁等问题.为此我神经切片研究室在实际应用中,对于一些实验步骤,大胆地进行了改良和简化,结果与改良前相比没有显著差异,但操作过程却比原方法简便、易行、结果稳定,使实验者的工作量明显下降.现将改良的关键处介绍如下:一、固定:原方法:灌注固定先灌0.9%生理盐水冲出血液,再以5%重铬酸钾和2.5%铬酸钾的水溶液500ml灌注固定.取出组织固定于10%中性福尔马林1w或更长至3m.改良后,我们增加了取材后组织再浸泡于灌流液中2～4hr这一步骤,它可防止灌流时灌流液不能完全达到周缘神经组织部位,同时缩短了组织后固定的时间,只将组织再浸入4%多聚甲醛固定1～7d即可.二、包埋和切片:原方法:取5～10mm厚的组织流水冲洗24hr,放入装有25%明胶水溶液的培养皿中(加盖),于37℃温箱浸泡12～18hr进行明胶包埋,置于10%福尔马林中6hr或更长.改良后我们在切片前增加了将组织浸入10%或20%的蔗糖液中过夜这一步骤,次日再将组织骤冷,在恒冷箱中切片,并且将切片置于0.05M磷酸缓冲液,贴至挂过明胶的载玻片上行染色操作.这样我们省略了明胶包埋这一复杂程序,使实验单位易行.三、封固:原法是将切片浸入10%明胶水溶液与等量95%酒精中5min,切片摊于载玻片上,使载片倾倾斜倒出多余水,勿使切片完全干燥,再用95%酒精,浸泡吸水纸压平浸入95%酒精使明胶凝固、脱水、透明封片.改良后我们在染色后将片直接用梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,树胶封固,可省去明胶贴片、压片、凝固等步骤.

简介：采用强碱浓酸腐蚀法处理制作人体骨标本国内已有报道[1,2],但由于碱性强,酸的浓度高,操作时间不易掌握,稍不注意就会腐蚀骨质.也有采用高压熏蒸的方法[3],但操作时无法观察,时间难以控制,且温度太高,易损伤骨质.本文采用稀硫酸溶液沸煮法处理制作人体骨标本,酸的浓度低,温度适中,时间恰当,可随时翻动,便于观察,既可以清除骨表面的软组织残留物,保持骨表面结构自然完整,又不腐蚀骨质,是一种理想的制作方法.

简介：神经细胞原代培养是研究神经细胞形态及功能的重要手段之一.传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,无法满足在单一神经细胞培养基础上进行实验研究的需要.本实验在传统培养方法的基础上加以改良,对原混合培养方法在胎龄、取材、温度、消化、换液、抑制剂、机械操作等方面进行了控制和改进.本培养方法具体改进如下:1.运动神经细胞取自E14大鼠胚胎的脊髓.因为胚胎运动神经元形态分化和化学分化程度较低,体外存活能力强,E14胎鼠脊髓易剥离.而传统方法是取E12～E16.E12胎鼠组织太嫩,不易分离;E16胎鼠脊柱已部分骨化,血液太多,挑离脊髓时易形成撕裂损伤.2.取材时将脊髓沿冠状面切开,取脊髓腹侧半,改变传统的整个脊髓培养,以达到培养单一运动神经元的目的.3.整个取材过程在冰袋上进行,更好的保持细胞活力.4.严格控制胰酶的浓度和消化时间.胰酶浓度是0.125%,37℃二氧化碳孵育箱内消化0.5hr较好,采用4℃含血清的DMEM液适时终止反应.为避免组织丢失,改吸弃胰酶为吸组织于另一试管中,且迅速终止消化反应.5.减少传统方法中的吹打次数,用弯头吸管代替直头吸管吹打;取消离心或细胞筛过目等步骤,降低细胞损害程度.6.细胞种植后改传统换全液为换半液,改传统培养2d换液为定时观察,按需换液.这样不仅保证了细胞在已适应了的环境中生长,并且减少了污染的机率.7.本方法不使用抑制剂,减少药物对运动神经元的损伤,使神经细胞在更接近于体内自然环境中生长.种植细胞1～2hr即可观察到细胞贴壁,胞体呈圆形,饱满、透亮,有短的突起出现.因此,本方法的优点是:不仅能够大大缩短从取材到种植的时间,提高运动神经元的活性,而且成功的获得了相对单一的运动神经元培养物(纯度达90%以上),为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体

简介：人工椎间盘置换通常是指采用人工椎间盘替换疼痛或无功能的髓核与纤维环和/或终板.目前美国FDA正在就腰椎人工椎间盘置换的临床前应用进行研究,据估计到2010年,美国70%的脊柱手术可能会采用人工椎间盘,世界脊柱关节成形术市场会达到14～30亿美元[1].本文就这一方面的研究进展综述如下.

简介：近年来,用于系统解剖学实验的尸体来源越来越少,而教学使用尸体标本的数量和价量却越来越多和越高.针对这一矛盾,我们从系统解剖学实验标本的设计与制作入手,根据教学大纲要求,用较少的尸体,设计制作较好的标本,来满足教学的需求.下面以一个实验室而言,谈点多年来的工作体会.

简介：围绕如何培养学员的学习能力、思维能力、动手能力和运用专业外语的能力方面，我们除注重理论课和实习课外，还特别注重第二课堂的活动。目的是在有限的教学时程内，使学员既能掌握本门课程的基本知识与技能，又能使上述能力得到明显提高。第二课堂活动的内容有讲座，组织学制作技术，组胚知识竞赛和翻译英文论著。知识竞赛由学员组队参加，最后评出集体和个人1，2，3等奖。知识竞赛的题目涉及到组胚学各个知识点，专业英语等，甚至包括教员从本讲过的知识，具有一定的深度和难度。通过组胚知识竞赛，帮助学员扩大了知识面，提高了对组胚学习的兴趣，对全面深入的掌握组胚知识有很大帮助。第二课堂的翻译论文活动，提高了学员的专业英语水平，在教员指导下已发表论文摘译10余篇。通过组织学制片技术，培训了学员的动手能力。在第二课堂活动中，发现了一些掌握组胚知识坚实的学员，他们中一些人因此而选择了终身从事组胚专业的道路。调查显示，最受学生欢迎的第二课堂活动是知识竞赛，其次是组织学制片技术。在丰富多采的第三课堂活动中，学员的科研能力得到提高，而且丰富了知识，拓宽了眼界，提高了专业英语水平，达到培养人才的预期目的。

简介：本文用6只成年家兔的基底节，分别制取连续切片、垂直切片和各向同性均匀随机切片，估计节内毛细血管的体积分数、表面积密度和长度密度。结果显示，在不同切片厚度及不同放大倍数下的估计值有显著差异，而在同样切片厚度及同样放大倍数的条件下，用不同切片方法所得估计值之间无显著差异。本文对该结果的意义进行了讨论。