简介：摘要目的利用腺病毒包装质粒pBHGE3与携带LASP-1 siRNA的穿梭质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1在HEK293细胞内，包装成病毒ZD55-LASP-1和Ad-LASP-1。方法利用Effectene DNA转染试剂将质粒pBHGE3与质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1分别感染HEK293细胞，纯化并扩增病毒。通过PCR鉴定Ad-LASP-1、ZD55-LASP-1是否包含目的基因，E1区是否缺失及有无野生型腺病毒污染。鉴定正确的病毒进行扩增，CsCl梯度离心纯化，TCID50法测病毒滴度。结果PCR鉴定证明ZD55-LASP-1未混杂野生型腺病毒,且包含目的序列LASP-1 siRNA；Ad-LASP-1 E1区缺失,且包含目的序列LASP-1 siRNA。ZD55-LASP-1滴度为4×1010 PFU/ml，Ad-LASP-1滴度为2×1010PFU/ml。Western-blot证实ZD55-LASP-1在肿瘤细胞中表达E1A，Ad-LASP-1不表达E1A。结论靶向表达LASP-1 siRNA序列的病毒ZD55-LASP-1重组成功，为肾癌的下一步基因治疗提供了基础。

简介：腺病毒基因组约为35kb，分为7个血清型，采用其中较为安全的血清型2和5可作为载体。腺病毒做为载体有很多优点：它能感染广泛的细胞类型；能感染分裂细胞或不分裂细胞；腺病毒的疫苗已为人们使用．

简介：摘要目的探讨7型腺病毒肺炎患儿的临床特征。方法回顾性分析2019年1月至2019年9月厦门市儿童医院收治的20例7型腺病毒肺炎患儿的临床资料，对患儿的临床表现、实验室检查、肺部影像学资料、纤维支气管镜镜下表现、治疗方案及疗效等进行分析，并随访观察患儿预后情况。结果20例7型腺病毒肺炎患儿均伴有发热、咳嗽，易出现呼吸困难；易引发肝功能异常、心肌损伤等合并症。20例患儿均有不同程度的乳酸脱氢酶(LDH)升高，重症患儿常合并降钙素原(PCT)升高。易混合其他病原体感染，其中以肺炎支原体感染居多，其次是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、烟曲霉菌。胸部影像学检查可见肺实变不张，以左下肺、右下肺为主，合并患侧少量胸腔积液。部分患儿后期遗留支气管扩张或闭塞性细支气管炎；经纤维支气管镜检查主要表现为气道黏膜充血、水肿，部分出现黏液栓甚至塑型支气管炎形成。所有患儿经综合治疗后均病情好转出院。结论7型腺病毒肺炎发病急，病情重，合并症多，病程长，缺乏特异性治疗，且易出现混合感染，导致病情迁延、反复，加大治疗难度，后期遗留后遗症概率高。适时行纤维支气管镜及肺泡灌洗治疗，对于疾病的诊断及治疗均有非常重要的意义。

简介：程序性细胞死亡因子5（programmedcelldeath5,PDCD5）在多种肿瘤细胞中表达明显降低。携带pdcd5基因的靶向增殖型腺病毒SG611-pdcd5对白血病细胞具有杀伤作用,对正常细胞具有相对保护作用。本研究旨在观察联合应用SG611-pdcd5与低剂量化疗药物依托泊甙（etoposide,VP-16）对白血病细胞系K562的作用。以不同浓度梯度的药物或不同感染复数（multiplicityofinfection,MOI）的病毒液作用于K562细胞,培养48小时后用MTT法检测细胞存活率。结果表明,与SG611-pdcd5（MOI=40）或VP-16（0.5μg/ml）单独作用组相比,SG611-pdcd5（MOI=40）＋VP-16（0.5μg/ml）组细胞存活率明显降低（p均〈0.05）,分别为（59.45±4.12）%、（82.91±3.41）%及（42.00±5.75）%。SG611-pdcd5与VP-16的协同作用强于PDCD5蛋白或携带pdcd5基因的非增殖型腺病毒Ad-pdcd5与VP-16的协同作用（p均〈0.05）;VP-16浓度为4.0μg/ml时,VP-16＋SG611-pdcd5（MOI=40）组、VP-16＋proPDCD5（40μg/ml）组及VP-16＋Ad-pdcd5（MOI=80）组细胞存活率分别为（37.09±1.89）%、（52.36±1.64）%及（73.64±4.33）%。结论：SG611-pdcd5具有促进低剂量VP-16杀伤K562细胞的作用,二者联合可增强对白血病细胞的杀伤作用。

简介：鸽腺病毒感染病是一种流行范围极广泛的潜在病原体感染所引起的急性传染病。实验表明，将病鸽与健康鸽放在一起，甚至将病鸽呕出的胃液注入健康鸽的嗉囊内也不一定使健康鸽发病，

简介：摘要目的建立免疫荧光检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus type 3, BAV-3)的方法，用于生物制品用牛源材料的检测。方法分别以牛鼻甲骨细胞、传代牛肾细胞、原代牛肾细胞培养BAV-3，筛选最适宜的敏感细胞培养BAV-3，纯化获得抗原后免疫BALB/c小鼠。采用杂交瘤抗体技术制备抗BAV-3单克隆抗体(单抗)，亲和层析法纯化后用异硫氰酸荧光素标记。用制备的单抗建立直接免疫荧光法检测BAV-3，并对方法的特异性、灵敏度及中间精密度进行验证。结果用抗BAV-3单抗检测牛腹泻病毒、副流感病毒3型、呼肠孤病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、羊轮状病毒，均无交叉反应。采用该方法检测牛鼻甲骨细胞培养的BAV-3，3次传代可检出的最低病毒含量和标准差分别为0.10和0.05 CCID50。结论建立的免疫荧光检测BAV-3方法具有良好的特异性和较高的灵敏度、中间精密度，可用于BAV-3的常规检测。

简介：摘要目的分析儿童重症7型腺病毒肺炎临床特点及治疗结果，探讨儿童重症7型腺病毒肺炎的治疗方法。方法回顾性分析2016年1月至2019年10月广州市妇女儿童医疗中心儿童重症监护病房收治的70例重症7型腺病毒肺炎患儿的临床资料，描述性分析重症7型腺病毒肺炎患儿的临床情况、治疗经过及结局。结果(1)70例重症7型腺病毒肺炎患儿，男43例(61.4%)，女27例(38.6%)；0～12个月30例(42.9%)，13～36个月28例(40.0%)，>36个月12例(17.1%)。(2)入PICU前发病时间(11.87±7.10)d；入PICU 6 h内序贯器官功能衰竭评分为6.80±3.13；Murray肺损伤评分为2.49±1.15；P/F值(150.57±86.25)mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)。X线胸片受累程度达2个象限及以上的有64例(91.4%)；所有患儿诊断脓毒症。(3)实验室检查：白细胞计数(7.6±5.5)×109/L，血小板计数(238.8±164.2)×109/L，C反应蛋白(39.4±37.2)mg/L。(4)治疗方案和结局：65例(92.9%)使用静脉丙种球蛋白；45例(64.3%)使用过激素；43例(61.4%)进行了纤维支气管镜探查或冲洗；21例(30.0%)进行了血液净化治疗；63例(90.0%)进行了无创或有创呼吸机治疗，其中20例(28.6%)患儿使用了高频呼吸机辅助通气；6例(8.6%)使用了肺泡表面活性物质；19例(27.1%)使用体外膜肺氧合治疗。呼吸机平均治疗时间(13.10±11.58)d；PICU中体温降至正常时间为(4.69±4.01)d；平均入住PICU时间(15.76±12.20)d；平均住院天数(27.04±13.10)d。16例患儿死亡，病死率22.9%。结论儿童重症7型腺病毒肺炎病情危重、肺损伤显著，虽经体外膜肺氧合等积极治疗，仍具有较高的病死率。

简介：

简介：2．2腺病毒在我国流行的情况如何？同其他国家的流行趋势类似，我国腺病毒的肆虐时间也在上世纪50-60年代。1958年以来我国各地相继证实，腺病毒除引起上呼吸道感染外，还可引起小儿肺炎，6个月至2岁的婴幼儿腺病毒肺炎最为危重，尤以北方各省多见，病情严重者也较南方多。

简介：

简介：利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达,结果显示,pBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后,于36h即可观察到荧光,72～96h无明显差别,传3代后仍可见表达荧光的细胞,pBE3LCRgp质粒转染DK细胞后,于48～96h用间接免疫荧光染色可检测到糖蛋白的表达,而pBE3LGFP和pBE3Rgp质粒转染DK细胞后经检测均无表达,表明构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的基因的表达,但利用外源性启动子可使外源基因获得良好表达.

简介：摘要目的探讨小儿腺病毒肺炎临床护理效果。方法选用2015年3月至2017年3月期间在我院的52例小儿腺病毒肺炎患儿为研究对象，分别用常规护理和针对性护理，对比两组患儿护理情况。结果两组患儿的优良率分别为96.15%和80.77%，干预后，两组家长焦虑、抑郁评分明显好于干预前，观察组好于对照组。结论通过对小儿腺病毒肺炎患儿实施针对性护理，患儿各项症状得到显著改善，缓解了家长焦虑、抑郁等症状，值得推广应用。

简介：摘要人腺病毒（HAdV）是急性呼吸道感染、腹泻、急性眼角结膜炎等多种疾病的常见病原体。许多研究表明HAdV基因组易发生基因重组，进而形成新的基因型别，迄今已报道的104个型别中53~104型为重组形成的新基因型，在全球范围内引起多次疫情，对疾病的防控提出新挑战。目前对其重组研究较少，亟需深入研究以揭示重组机制及临床意义。

简介：鸽腺病毒是一种一年四季都可发生的信鸽消化道或肠道传染病。该病对信鸽危害极大，传染速度极快，且死亡率极高。

简介：某肉鸡养殖场肉仔鸡发生了一起以心包积液、肝炎为主要特征的疫病,通过对病死鸡的临床症状和病理剖检观察、PCR检测、鸡胚接种试验等确诊为该鸡场发生了禽腺病毒的感染,通过采取系列治疗措施,疫情得到了控制。

简介：本文简要综述腺病毒载体的研究现状，包括各型载体的构成、优势与缺陷，及其相应的优化策略，并指出在我国人群中腺病毒载体作为疫苗和基因治疗的工具所应采取的优化措施。

简介：摘要目的观察荷载白细胞介素(IL)-24的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合放射对激素依赖性前列腺癌LNcap细胞株增殖和凋亡的影响，并探讨其机制。方法将LNcap细胞(购自上海中国科学院细胞库)分为4组进行干预，分别为，(1)磷酸盐缓液组(PBS)；(2)放射治疗组(10 GY)；(3)病毒组[ZD55-IL-24；10感染复数(MOI)]；(4)联合组(ZD55-IL-24＋RT；5 MOI＋5GY)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测连续96 h各组LNcap细胞增殖能力的变化。Hoechst-33258、原位缺口末端标记法(TUNEL)凋亡检测试剂盒检测处理48 h后各组LNcap细胞的凋亡。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测处理48 h后各组内IL-24和凋亡相关蛋白的表达。多组间采用方差分析(One way-ANOVA)，组间比较采用t检验。结果(1)CCK-8显示，放疗组、ZD55-IL-24和联合组与PBS组比较，均可抑制细胞增殖。PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组在处理96 h后在450 nm处的吸光度(A)值分别为3.84±0.47(t＝20.730，P<0.01)、1.85±0.08(t＝15.600，P<0.01)、1.33±0.19(t＝6.270，P<0.01)、0.78±0.10。(2)Hoechst-33258染色结果显示，各治疗组较PBS组均存在显著细胞凋亡现象。PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组细胞凋亡率分别为(9.20±1.02)%(t＝26.430，P<0.01)、(28.88±3.65)%(t＝6.092，P<0.01)、(35.45±1.80)%(t＝4.505，P<0.01)、(41.95±2.26)%。(3)TUNEL染色结果显示，各治疗组较PBS组均存在显著的细胞凋亡现象。PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组细胞凋亡率分别为(7.95±2.07)%(t＝15.400，P<0.01)、(26.38±2.61)%(t＝5.960，P<0.01)、(32.95±3.94)%(t＝2.600，P<0.01)、(39.45±3.53)%。(4)Western blot结果显示，各治疗组内半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8、Caspase-3的表达水平均高于PBS组，联合组内Caspase-8/Caspase-3表达增高更为明显。以PBS组表达量为参照，Caspase-8和Caspase-3在PBS组、放疗组、ZD55-IL-24和联合组内的相对表达量分别为1.00±0.07、1.00±0.08(t＝23.030、13.910，P<0.01、0.01)、1.61±0.12、1.52±0.11(t＝13.330、8.430，P<0.01、0.01)、2.13±0.15、1.93±0.04(t＝7.390、5.710，P<0.01、0.01)、2.99±0.13、2.52±0.17(与联合组比较)。结论放疗和ZD55-IL-24均可以抑制LNcap细胞增殖并促进细胞凋亡，联合治疗较单一治疗拥有更好的增殖抑制及促进凋亡效果，其机制可能与Caspase-8/Caspase-3介导的内源性凋亡相关。

简介：摘要目的探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7，HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。方法采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染；应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活；实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响；蛋白质免疫印迹实验(western blot，WB)检测病毒感染后细胞内NLRP3、pro-IL-1β的表达及上清中caspase-1和IL-1β蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示HAdV-7可感染THP-1分化的巨噬细胞，WB显示HAdV-7感染诱导细胞内pro-IL-1β蛋白表达上调，ELISA检测表明HAdV-7感染可诱导IL-1β的分泌表达(MOI＝0.5，P＝0.0008)。使用Ac-YVDK-cmk抑制caspase-1表达后，HAdV-7感染上清中IL-1β的表达被明显抑制(P＝0.0025)；HAdV-7感染caspase-1缺陷的THP-1分化的巨噬细胞，IL-1β的表达同样被显著抑制(P＝0.0191)。荧光定量PCR检测HAdV-7感染可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3 mRNA表达上调(NLRP3：P＝0.0004；pro-IL-1β：P＝0.0007)，同时WB显示HAdV-7可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3蛋白表达上调；使用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理细胞，可抑制HAdV-7感染的细胞上清中IL-1β的表达(P＝0.0027); HAdV-7感染NLRP3缺陷的THP-1分化的巨噬细胞，IL-1β的表达被明显抑制(P＝0.0189)。分别使用TLR2、TLR4、TLR7/9信号传导抑制剂，抑制HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞，结果显示抑制TLR4信号传导，细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调(P＝0.0122)；使用ROS抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂，或抑制K＋外流，分别处理HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞，结果显示抑制组织蛋白酶B(P＝0.0292)，或抑制K＋外流时(KCl, P＝0.0022；Glibenclamide, P＝0.0275)，细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调。结论HAdV-7感染THP-1细胞激活NLRP3炎症小体，NLRP3炎症小体激活的第一信号通过Toll样受体4(TLR4)信号传导，第二信号主要通过半通道模型介导K＋外流的和溶酶体破坏模型释放组织蛋白酶B的激活NLRP3炎症小体。

简介：

简介：目的:利用Adeasy-1系统,构建并鉴定CARP基因重组腺病毒载体.方法:PCR扩增含有CARP全长cDNA的片段,经测序验证无误后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的重组质粒,再在293细胞中进行包装扩增,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:测序证实PCR产物为CARP全长cDNA;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;转染293细胞3天后可见绿色荧光,回收病毒可以重复感染293细胞,证明病毒包装成功.